First, DNA fragments from a sample

First, DNA fragments from a sample containing multiple organisms are amplified using the PCR technique (to learn more about PCR click the following link.) These amplified products generally entail sequences that are well conserved from organism to organism – for example, sequences for the 16S rDNA are a common choice. This collection of fragments is then subjected to the DGGE component of the procedure.
DGGE is a particular type of gel electrophoresis in which a constant heat (about 60ºC) and an increasing concentration of denaturing chemicals are used to force DNA molecules to unwind. A quick glimpse at electrophoresis tells us that this is a separation technique based on the electrical charge, shape and molecular weight of particulates such as DNA, proteins and RNA (3). In DGGE, DNA, which is negatively charged, is attracted by the positive electrode and forced to migrate through the pores of a polyacrylamide gel. Once it reaches the concentration of denaturing reagents at which it unwinds, it is said to have melted. This determines the melting domains (4, 5), which are defined as stretches of base pairs with an identical melting temperature (4). In other words, base pairs formed by nucleotides A (adenine) and T (thymine), and those formed by C (cytosine) and G (guanine) are chemically melted apart. Basically, what happens is that hydrogen bonding between the base pairs is broken by the temperature and the increasing gradient of denaturing chemicals (urea and formamide) (4, 5). Any variation of DNA sequences within these domains will result in different melting temperatures, thus causing different sequences to migrate at different positions in the gel (4). This provides DGGE with the power to distinguish between mutated and wild type sequences without prior knowledge of what these sequences are, justifying why this method is used to detect mutations within closely related organisms (1, 2).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ครั้งแรก ชิ้นส่วนดีเอ็นเอจากตัวอย่างที่ประกอบด้วยสิ่งมีชีวิตหลายจะขยายการใช้เทคนิค PCR (เพื่อเรียนรู้เพิ่มเติมเกี่ยวกับ PCR คลิกการเชื่อมโยงต่อไปนี้) ผลิตภัณฑ์เหล่านี้เอาต์อันลำดับที่มีอยู่ทั้งจากสิ่งมีชีวิตกับสิ่งมีชีวิตโดยทั่วไป – เช่น ลำดับสำหรับการ 16S rDNA เป็นตัวเลือกทั่วไป บางส่วนของชุดนี้อยู่แล้วภายใต้ DGGE ส่วนประกอบของกระบวนการDGGE เป็นชนิดเฉพาะของ electrophoresis เจลซึ่งความร้อนที่คง (เกี่ยวกับ 60ºC) และความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของ denaturing เคมีใช้บังคับโมเลกุลดีเอ็นเอเพื่อการพักผ่อน เหลือบด่วนที่ electrophoresis บอกว่า เป็นเทคนิคการแยกประจุไฟฟ้า รูปร่าง และน้ำหนักโมเลกุลของฝุ่นละอองเช่นดีเอ็นเอ โปรตีน และอาร์เอ็นเอ (3) ใน DGGE, DNA ซึ่งส่งผลเสียคิด ถูกดึงดูด ด้วยไฟฟ้าบวก และบังคับให้ย้ายผ่านรูขุมขนของเจ polyacrylamide เมื่อมันมาถึงความเข้มข้นของ denaturing reagents ซึ่งมัน unwinds จะกล่าวว่า จะมีหลอม นี้กำหนดละลายโดเมน (4, 5), ซึ่งถูกกำหนดเป็นพื้นที่ของฐานคู่กับอุณหภูมิละลายเหมือนกัน (4) ในคำอื่น ๆ ฐานคู่สร้าง โดยนิวคลีโอไทด์ (adenine) และ T (ไทมีน), และผู้ก่อตั้งขึ้น โดย G (guanine) และ C (cytosine) เป็นสารเคมีหลอมกัน ทั่วไป สิ่งที่เกิดขึ้นคือ ว่า ไฮโดรเจนที่ยึดระหว่างคู่ฐานแตกเนื่องจากอุณหภูมิและการเพิ่มขึ้นไล่ระดับของ denaturing เคมี (urea และ formamide) (4, 5) การเปลี่ยนแปลงของลำดับดีเอ็นเอภายในโดเมนเหล่านี้จะส่งผลในอุณหภูมิละลายแตกต่างกัน ทำลำดับแตกต่างกันการโยกย้ายในตำแหน่งต่าง ๆ ในเจ (4) นี้ทาง DGGE มีอำนาจแยกระหว่างกลาย และลำดับประเภทป่า โดยความรู้เดิมของลำดับสิ่งเหล่านี้ justifying ทำไมวิธีการนี้ใช้ในการตรวจหาการกลายพันธุ์ในสิ่งมีชีวิตที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิด (1, 2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ครั้งแรกดีเอ็นเอจากตัวอย่างที่มีสิ่งมีชีวิตหลายจะขยายโดยใช้เทคนิค PCR (ที่จะเรียนรู้เพิ่มเติมเกี่ยวกับวิธี PCR คลิกลิงค์ต่อไปนี้.) ผลิตภัณฑ์ขยายเหล่านี้มักจะนำมาซึ่งการลำดับที่มีการอนุรักษ์เป็นอย่างดีจากสิ่งมีชีวิตที่จะมีชีวิต - ตัวอย่างเช่นลำดับสำหรับ 16S rDNA เป็นทางเลือกที่พบบ่อย คอลเลกชันของชิ้นส่วนนี้แล้วภายใต้องค์ประกอบ DGGE ของขั้นตอน.
DGGE เป็นประเภทเฉพาะของข่าวคราวที่ความร้อนอย่างต่อเนื่อง (ประมาณ 60 ° C) และความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของสารเคมี denaturing จะใช้ในการบังคับให้โมเลกุลของดีเอ็นเอที่จะผ่อนคลาย เหลือบอย่างรวดเร็วที่อิบอกเราว่านี่คือเทคนิคการแยกบนพื้นฐานของค่าไฟฟ้าที่รูปร่างและน้ำหนักโมเลกุลของอนุภาคเช่นดีเอ็นเอโปรตีนและ RNA (3) ใน DGGE ดีเอ็นเอซึ่งเป็นประจุลบจะถูกดึงดูดโดยขั้วบวกและถูกบังคับให้อพยพผ่านรูขุมขนของเจลอะคริเลตที่ เมื่อมันมาถึงความเข้มข้นของน้ำยา denaturing ที่มันคลายก็บอกว่าจะต้องละลาย นี้จะกำหนดโดเมนละลาย (4, 5) ซึ่งจะถูกกำหนดเป็นแนวฐานคู่มีอุณหภูมิหลอมละลายเหมือนกัน (4) ในคำอื่น ๆ ฐานคู่ที่เกิดขึ้นจากนิวคลีโอ A (adenine) และ T (มีน) และผู้ที่เกิดขึ้นจาก C (cytosine) และ G (guanine) จะละลายสารเคมีออกจากกัน โดยทั่วไปสิ่งที่เกิดขึ้นคือพันธะไฮโดรเจนระหว่างฐานคู่เสียจากอุณหภูมิและการไล่ระดับสีที่เพิ่มขึ้นของสารเคมี denaturing (ยูเรียและไมด์) (4, 5) การเปลี่ยนแปลงใด ๆ ของลำดับดีเอ็นเอภายในโดเมนเหล่านี้จะส่งผลให้อุณหภูมิหลอมละลายที่แตกต่างกันจึงก่อให้เกิดลำดับที่แตกต่างกันในการโยกย้ายตำแหน่งที่แตกต่างกันในเจล (4) นี้จะให้ DGGE มีอำนาจที่จะแยกแยะระหว่างกลายพันธุ์และลำดับป่าประเภทโดยไม่ต้องรู้ก่อนว่าสิ่งที่ลำดับเหล่านี้เป็นเหตุผลว่าทำไมวิธีการนี้ถูกนำมาใช้ในการตรวจสอบการกลายพันธุ์ของสิ่งมีชีวิตที่อยู่ในเกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิด (1, 2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ครั้งแรก ดีเอ็นเอจากตัวอย่างสิ่งมีชีวิตที่มีหลายอัตรา โดยใช้เทคนิค PCR ( เรียนรู้เพิ่มเติมเกี่ยวกับ PCR คลิกการเชื่อมโยงต่อไปนี้ ) เหล่านี้ขยายผลิตภัณฑ์โดยทั่วไปครอบคลุมลำดับที่จะอนุรักษ์สิ่งมีชีวิตและจากสิ่งมีชีวิตชนิดตัวอย่างเช่นลำดับสำหรับ 16S rDNA เป็นทางเลือกร่วมกันคอลเลกชันนี้ของชิ้นส่วนที่เป็นแล้วต้องการทดลององค์ประกอบของกระบวนการ .
การทดลองเป็นประเภทเฉพาะของเจลที่อุณหภูมิคงที่ ( ประมาณ 60 º C ) และการเพิ่มความเข้มข้นของสารเคมีที่ใช้ในการบังคับี่ดีเอ็นเอโมเลกุล เพื่อผ่อนคลาย เหลือบรวดเร็ววิธีที่บอกเราว่า นี้เป็นเทคนิคที่ใช้แยกประจุไฟฟ้ารูปร่างและน้ำหนักโมเลกุลของฝุ่น เช่น DNA , โปรตีนและ RNA ( 3 ) ในการทดลอง ดีเอ็นเอ ซึ่งเสียค่าใช้จ่าย เป็นที่ดึงดูดโดยขั้วไฟฟ้าบวก และถูกบังคับให้โยกย้ายผ่านรูของโพลีอะคริลาไมด์เจล เมื่อมันถึงความเข้มข้นของสารเคมีที่ี่มันคลายออก มันบอกว่าจะต้องละลาย นี้เป็นตัวละลาย โดเมน ( 4 , 5 )ซึ่งถูกกำหนดโดยยืดของคู่เบสมีอุณหภูมิหลอมเหลวเหมือนกัน ( 4 ) ในคำอื่น ๆที่เกิดขึ้นจากฐานคู่เบส ( เพศตรงข้าม ) และ T ( ไทมีน ) , และผู้ที่ก่อตั้งโดย C ( ไซโตซีน ) และ G ( กัวนีน ) เป็นสารเคมีที่ละลายออกจากกัน โดยทั่วไปสิ่งที่เกิดขึ้นคือพันธะไฮโดรเจนระหว่างเบสคู่เสีย โดยอุณหภูมิและการไล่ระดับของสารเคมี ( ี่และยูเรียฟอร์มาไมด์ ) ( 4 , 5 ) การเปลี่ยนแปลงใด ๆของลำดับดีเอ็นเอภายในโดเมนเหล่านี้จะส่งผลแตกต่างกันอุณหภูมิละลาย จึงทำให้ลำดับที่แตกต่างกันที่จะโยกย้ายในตำแหน่งที่แตกต่างกันในเจล ( 4 )มีการทดลองกับอำนาจที่จะแยกแยะระหว่างกลายพันธุ์และป่าประเภทลำดับ โดยไม่มีความรู้อะไร ลำดับเหล่านี้จะอธิบายถึงวิธีนี้จะใช้เพื่อตรวจหาการกลายพันธุ์ในสิ่งมีชีวิตที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิด
( 1 , 2 )