2.5. Extraction and analysis of car

2.5. Extraction and analysis of carotenoids

Yolk samples were extracted according to Schlatterer and Breithaupt (2006) with minor modifications as described previously (Nimalaratne, Lopes-Lutz, Schieber, & Wu, 2012). Approximately 0.5 g of freeze dried egg yolk powder was extracted three times (3 mL each) using a ternary solvent mixture (methanol:ethyl acetate:petroleum ether, 1:1:1, v/v/v) with 0.1% BHT at room temperature for 1 min using a vortex mixer (model 945404, Fisher Scientific, Edmonton, AB, Canada) and the combined supernatants were evaporated under nitrogen gas. The residue was dissolved in 2 mL of TBME:methanol (3:1, v/v). These samples were filtered through 0.45 μm nylon membrane filter and analyzed by UFLC. Duplicate extractions were performed and the samples were protected from light during the extraction and analysis.

Samples were analyzed using a C30 reversed-phase column, 100 mm × 2.0 mm I.D. and 3 μm particle size (YMC America, Allentown, PA, USA) operated at 21 °C. Analyses were performed on a Shimadzu UFLC-XR system (Shimadzu, Kyoto, Japan) equipped with a diode array detector (Model SPD-M20A). The injection volume was 3 μL. A binary solvent system consisting of mobile phase A (methanol:water, 90:10, v/v) and mobile phase B (TBME:methanol, 80:20, v/v) was used with the following gradient: 0–8 min (8–40% B), 8–13 min (40–100% B), 13–14.5 min (100% B), 14.5–14.6 min (8% B). The flow rate was 0.3 mL/min and the carotenoids were detected at 450 nm. Analyses were duplicated. Identification of carotenoids was based on their UV spectra, retention time and order of elution compared to the standard compounds while quantification was based on seven point standard calibration curves as described in Nimalaratne et al. (2012).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 การสกัดและการวิเคราะห์ของ carotenoidsตัวแดงที่สกัดตาม Schlatterer และ Breithaupt (2006) ด้วยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Nimalaratne โลเปส:ราย Schieber และวู 2012) ประมาณ 0.5 กรัมผงแห้งไข่แดงถูกแยกสามครั้ง (3 mL) ใช้ส่วนผสมตัวทำละลายแบบไตรภาค (เมทานอล: เอทิลอะซิเตท: ปิโตรเลียมอีเทอร์ 1:1:1, v/v/v) กับบาท 0.1% ที่อุณหภูมิห้อง 1 นาทีโดยใช้เครื่องผสม vortex (รุ่น 945404 ทางวิทยาศาสตร์ฟิชเชอร์ เอ็ดมอนตัน AB แคนาดา) และ supernatants รวมได้ระเหยภายใต้ก๊าซไนโตรเจน สารถูกละลายใน 2 mL ของ TBME:methanol (3:1, v/v) ตัวอย่างเหล่านี้ที่ถูกกรองผ่าน 0.45 ไมครอนไนล่อนเยื่อกรอง และวิเคราะห์ โดย UFLC ดำเนินการสกัดซ้ำ และตัวอย่างถูกป้องกันจากแสงในระหว่างการสกัดและวิเคราะห์มีวิเคราะห์ตัวอย่างโดยใช้คอลัมน์กลับเฟส C30, 100 มม. × 2.0 มม id และ 3 ไมครอนขนาดอนุภาค (YMC อเมริกา แอลเลน PA สหรัฐอเมริกา) งานที่ 21 องศาเซลเซียส ได้ดำเนินการวิเคราะห์ใน Shimadzu UFLC XR ระบบ (Shimadzu เกียวโต ญี่ปุ่น) พร้อมกับไดโอดอาร์เรย์เครื่องตรวจจับ (รุ่น SPD-M20A) ปริมาณฉีดได้ 3 μL ระบบตัวทำละลายไบนารีประกอบด้วยมือถือเฟส A (เมทานอล: น้ำ 90:10, v/v) และระยะเคลื่อน B (TBME:methanol, 80:20, v/v) ใช้กับการไล่ระดับต่อไปนี้: 0-8 นาที (8-40% B), 8-13 นาที (40 – 100% B), 13 – 14.5 นาที (100% B) 14.5 – 14.6 นาที (8% B) อัตราการไหลได้ 0.3 mL/min และ carotenoids ตรวจพบที่ 450 nm วิเคราะห์ที่ซ้ำกัน รหัสของ carotenoids ตามสเป็คของพวกเขาใช้ UV เวลาที่เก็บข้อมูล และลำดับของชะเมื่อเทียบกับสารมาตรฐานในขณะที่นับตามเส้นโค้งมาตรฐาน 7 จุดตามที่อธิบายไว้ใน Nimalaratne et al. (2012)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 การสกัดและการวิเคราะห์ของ carotenoids ตัวอย่างไข่แดงถูกสกัดตาม Schlatterer และ Breithaupt (2006) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Nimalaratne เปส-ลัทซ์ Schieber และ Wu, 2012) ประมาณ 0.5 กรัมของแห้งแช่แข็งไข่ผงไข่แดงถูกสกัดสามครั้ง (3 มลแต่ละคน) โดยใช้ตัวทำละลายผสม ternary (เมทานอล: เอทิลอะซีเต: ปิโตรเลียมอีเทอร์, 1: 1: 1, v / V / V) กับ BHT 0.1% ที่ห้อง อุณหภูมิเวลา 1 นาทีโดยใช้ผสมน้ำวน (Model 945404, Fisher Scientific, เอดมันตัน, AB, Canada) และ supernatants รวมกันได้ภายใต้การระเหยของก๊าซไนโตรเจน ที่เหลือก็เลือนหายไปใน 2 มิลลิลิตร TBME: เมทานอล (3: 1, v / v) ตัวอย่างเหล่านี้ถูกกรองผ่าน 0.45 ไมครอนกรองเมมเบรนไนลอนและวิเคราะห์โดย UFLC ซ้ำสกัดได้ดำเนินการและกลุ่มตัวอย่างได้รับการปกป้องจากแสงในระหว่างการสกัดและการวิเคราะห์. ตัวอย่างถูกวิเคราะห์โดยใช้คอลัมน์ย้อนกลับเฟส C30, 100 มิลลิเมตร× ID 2.0 มิลลิเมตรและ 3 ไมครอนอนุภาคขนาด (YMC อเมริกา Allentown, PA, สหรัฐอเมริกา) ดำเนินการ วันที่ 21 ° C วิเคราะห์ได้ดำเนินการเกี่ยวกับระบบ Shimadzu UFLC-XR (Shimadzu เกียวโตญี่ปุ่น) พร้อมกับเครื่องตรวจจับไดโอดอาร์เรย์ (รุ่น SPD-M20A) ปริมาณการฉีด 3 ไมโครลิตร ระบบตัวทำละลายไบนารีประกอบด้วยเฟสเคลื่อนที่ A (เมทานอล: น้ำ, 90:10, v / v) และโทรศัพท์มือถือเฟส B (TBME: เมทานอล, 80:20, v / v) ถูกนำมาใช้กับการไล่ระดับสีต่อไปนี้: 0-8 นาที (8-40% B), 8-13 นาที (40-100% B), 13-14.5 นาที (100% B), 14.5-14.6 นาที (8% B) อัตราการไหล 0.3 มิลลิลิตร / นาทีและนอยด์ที่ถูกตรวจพบที่ 450 นาโนเมตร วิเคราะห์ได้ซ้ำ บัตรประจำตัวของนอยด์อยู่บนพื้นฐานของสเปกตรัม UV เวลาการเก็บรักษาและคำสั่งของชะเมื่อเทียบกับสารมาตรฐานของพวกเขาในขณะที่ปริมาณก็ขึ้นอยู่กับจุดเจ็ดเส้นโค้งการสอบเทียบมาตรฐานตามที่อธิบายใน Nimalaratne et al, (2012)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 การสกัดและวิเคราะห์ คาโรทีนอยด์ตัวอย่างไข่แดงสกัดตาม schlatterer และไบรเทาปต์ ( 2006 ) มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( nimalaratne โลเปซ , รุทซ์ , ชิเบอร์ & Wu , 2012 ) ตรึงผงแห้งประมาณ 0.5 กรัม ไข่แดง 3 ครั้ง ( 3 ml สารสกัดแต่ละ ) การใช้ตัวทำละลายผสมที่ประกอบไปด้วย ( เอทิลอะซิเตท : เมทานอล : ปิโตรเลียมอีเทอร์ , 1 : 1 : 1 V / V / V ) 0.1% บาทไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 นาทีใช้ Vortex ผสม ( แบบ 945404 ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ , Edmonton , AB แคนาดา ) และ supernatants รวมถูกระเหยภายใต้แก๊สไนโตรเจน การตกค้างของ tbme 2 มิลลิลิตร ละลายในเมทานอล ( 3 : 1 v / v ) ตัวอย่างเหล่านี้ถูกกรองผ่านเยื่อกรองไนลอน 0.45 μ M และวิเคราะห์ข้อมูลโดย uflc . การสกัดซ้ำการทำการป้องกันแสงระหว่างการสกัดและการวิเคราะห์วิเคราะห์การใช้ C30 reversed-phase คอลัมน์ , 100 มม. × 2.0 มิลลิเมตร บัตรประจำตัว และ 3 μ M ขนาดอนุภาค ( ymc America Allentown PA , USA ) ดำเนินการ 21 องศา วิเคราะห์ระบบเป็นจำนวน uflc-xr Shimadzu ( Shimadzu , เกียวโต , ญี่ปุ่น ) พร้อมกับไดโอดเรย์ตรวจจับ ( แบบ spd-m20a ) ปริมาณการฉีด 3 μลิตรระบบตัวทำละลายไบนารีประกอบด้วยเฟสเคลื่อนที่ ( เมทานอล : น้ำรูป v / v ) และเฟสเคลื่อนที่ B ( tbme เมทานอล , 80 : 20 , v / v ) ถูกนำมาใช้กับการไล่ระดับสีดังต่อไปนี้ : 0 – 8 นาที ( 8 ) 40 % B ) , 8 – 13 มิน ( 40 - 100 % B ) , 13 - 14 นาที ( 100 % B ) , 14.5 และ 14.6 มิน ( 8 % B ) อัตราการไหลเท่ากับ 0.3 มิลลิลิตรต่อนาทีและแคโรทีนอยด์พบ 450 nm . วิเคราะห์ข้อมูลซ้ำกัน การใช้แสงยูวีของ carotenoids , เวลาและลำดับของการใช้เมื่อเทียบกับสารมาตรฐาน ในขณะที่ปริมาณขึ้นอยู่กับเจ็ดจุดเส้นโค้งสอบเทียบมาตรฐานตามที่อธิบายไว้ใน nimalaratne et al . ( 2012 )