2.4.2. In-house digestion buffer me

2.4.2. In-house digestion buffer method
At least 0.01 g of toenail fragment(s) were weighed in a
1.5 mL tube. To wash the nail material, 50 mL of 1 M NaCl
(Sigma), 50 mL of 100 mM EDTA (Merck), 10 mL 20% (w/v) SDS
(ICN Biomedicals Inc.), 6.25 mL of 2 mg/mL Proteinase K, and
380 mL of dH2O were added and the sample incubated for 0.5hr
with agitation at 56 8C in a thermomixer (900 rpm). The solution
was discarded and the nail material rinsed twice with 500 mL of
0.9% (w/v) NaCl, once with 500 mL of 100% (v/v) ethanol, and
then with 500 mL of dH2O discarding the solution after each
wash step.
To the washed nails, 400 mL of TEN buffer (10 mM Tris–HCl/
pH8.0, 1 mM EDTA, 100 mM NaCl), 50 mL of 20% (w/v) SDS, 40 mL
of 20 mg/uL Proteinase K, and 40 mL of 1 M DTT were added,
followed by an incubation at 56 8C with agitation using a
thermomixer (900 rpm) for 2 h to digest the nail material.
Following digestion, an equal volume of ultrapure phenol:chloroform:isomyl
alcohol (25:24:1) pH 8.0 (Invitrogen) was added to
the tube, shaken and then centrifuged at 13,500rcf for 3 min. The
upper phase was removed, added to a new 1.5 mL tube and an
equal volume of chloroform added. The tube was mixed and
centrifuged at 13,500 rcf for 1 min, this chloroform wash step was
performed twice. The resulting upper phase was transferred to an
Amicon Ultra 0.5 100 K device and spun at 14,000 rcf for 2 min. The
filtrate was discarded and the Amicon washed twice with 480 mL
of dH2O. 100 mL of dH2O was added to the Amicon which was then
inverted into a collection tube and spun for 2 min at 1000 rcf to
elute.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4.2 วิธีย่อยภายในบัฟเฟอร์เล็บเท้า fragment(s) น้อย 0.01 กรัมมีน้ำหนักในการหลอด 1.5 mL ล้างเล็บวัสดุ 50 มิลลิลิตรของ 1 M NaClSDS (sigma), 100 mM EDTA (Merck), 50 mL 10 mL 20% (w/v)(ICN Biomedicals Inc.), 6.25 mL ของ 2 mg/mL Proteinase K และเพิ่ม 380 mL dH2O และตัวอย่างได้รับการกก 0.5hrด้วยการปั่นป่วนที่ 56 8C ใน thermomixer (900 รอบต่อนาที) การแก้ปัญหาถูกละทิ้ง และวัสดุเล็บล้างสองครั้งกับ 500 มล.0.9% (w/v) NaCl หนึ่งครั้ง ด้วยเอทานอล 100% (v/v) 500 mL และแล้ว กับ dH2O 500 มล.ทิ้งการแก้ปัญหาหลังจากแต่ละล้างขั้นตอนการล้างเล็บ บัฟเฟอร์สิบ 400 มล. (10 มมทริ – HCl /pH8.0, 1 mM EDTA, 100 มม. NaCl), 20% (w/v) SDS, 40 มล. 50 มล.ของ 20 มิลลิกรัม/uL Proteinase K, 1 M DTT 40 มล.เพิ่มตาม ด้วยการบ่มที่ 8C 56 ใช้ปั่นป่วนการthermomixer (900 รอบต่อนาที) สำหรับ h 2 ย่อยวัสดุเล็บต่อการย่อยอาหาร ปริมาณเท่ากับบริสุทธิ์พิเศษฟีนอล: คลอโรฟอร์ม: isomylเพิ่มแอลกอฮอล์ (25:24:1) ค่า pH 8.0 (Invitrogen)หลอด เขย่า และเหวี่ยงแล้ว 13, 500rcf 3 นาทีถูกเอาบนเฟส เพิ่ม 1.5 mL หลอดใหม่และปริมาณคลอโรฟอร์มที่เพิ่มเท่ากับ หลอดถูกผสม และมีขั้นตอนการล้างนี้คลอโรฟอร์มเหวี่ยงที่ rcf 13,500 สำหรับ 1 นาทีทำสองครั้ง ขั้นตอนด้านบนได้โอนย้ายไปอัลตร้า Amicon 0.5 100 K อุปกรณ์ และปั่นที่ 14,000 rcf 2 นาทีระบบการกรองถูกละทิ้ง และ Amicon การล้างสองครั้ง ด้วย 480 mLของ dH2O 100 มิลลิลิตรของ dH2O เพิ่ม Amicon ที่นั้นคว่ำลงไปในหลอดเก็บ และปั่น 2 นาทีที่ 1000 rcf ไปelute

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4.2 ในบ้านวิธีการย่อยอาหารบัฟเฟอร์
อย่างน้อย 0.01 กรัมของชิ้นส่วนเล็บเท้า (s) ได้รับการชั่งน้ำหนักใน
หลอดมล 1.5 วัสดุที่จะล้างเล็บ 50 มล 1 เมตรโซเดียมคลอไรด์
(ซิกม่า) 50 มล 100 มิลลิเมตร EDTA (เมอร์ค), 10 มล 20% (w / v) SDS
(ICN Biomedicals อิงค์), 6.25 มล 2 mg / ml Proteinase K, และ
380 มล dH2O ถูกเพิ่มและตัวอย่างบ่ม 0.5hr
กับความปั่นป่วนที่ 56 8C ใน thermomixer (900 รอบต่อนาที) วิธีการแก้ปัญหา
ที่ถูกทิ้งและวัสดุเล็บล้างครั้งที่สอง 500 มล
0.9% (w / v) โซเดียมคลอไรด์, ครั้งเดียวกับ 500 มล 100% (v / v) เอทานอลและ
แล้วด้วย 500 มล dH2O ทิ้งวิธีการแก้ปัญหาหลังจากที่แต่ละ
ล้าง ขั้นตอน.
ในการล้างเล็บ, 400 มลสิบบัฟเฟอร์ (10 mM Tris-HCl /
pH8.0 1 มิ EDTA, 100 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์) 50 มล 20% (w / v) SDS, 40 มล
20 มิลลิกรัม / uL Proteinase K, และ 40 มล 1 เมตร DTT เสริม
ตามด้วยการบ่มที่ 56 8C กับการกวนโดยใช้
thermomixer (900 รอบต่อนาที) เป็นเวลา 2 ชั่วโมงในการย่อยวัสดุเล็บ.
หลังจากการย่อยอาหารปริมาณที่เท่ากันของบริสุทธิ์ฟีนอล: คลอโรฟอร์ม : isomyl
เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ (25: 24: 1) ค่า pH 8.0 (Invitrogen) ถูกบันทึกอยู่ใน
หลอดเขย่าแล้วหมุนเหวี่ยงที่ 13,500rcf เป็นเวลา 3 นาที
ขั้นตอนบนจะถูกลบออกเพิ่มใหม่ 1.5 มิลลิลิตรหลอดและ
ปริมาณที่เท่ากันของคลอโรฟอร์มเพิ่ม หลอดผสมและ
หมุนเหวี่ยงที่ 13,500 RCF เวลา 1 นาทีนี้ขั้นตอนการล้างคลอโรฟอร์มถูก
ดำเนินการเป็นครั้งที่สอง ขั้นตอนบนส่งผลให้ถูกย้ายไปยัง
อัลตร้า 0.5 100 K อุปกรณ์ Amicon และหมุนตัวที่ 14,000 RCF เป็นเวลา 2 นาที
กรองทิ้งและล้าง Amicon ครั้งที่สองกับ 480 มิลลิลิตร
ของ dH2O 100 มล dH2O ถูกเพิ่มลงใน Amicon ซึ่งเป็น
คว่ำลงในหลอดคอลเลกชันและหมุนตัวเป็นเวลา 2 นาทีที่ 1000 RCF การ
ชะ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4.2 . วิธีการย่อยอาหารในบัฟเฟอร์ บ้านอย่างน้อย 0.01 กรัม ส่วนเล็บเท้า ( s ) มีน้ำหนักในหลอด 1.5 ml . ล้างวัสดุเล็บ 50 มล. 1 โมลาร์( Sigma ) 50 ml 100 mM EDTA ( Merck ) 10 ml 20 % ( w / v ) SDS( ICN biomedicals อิงค์ ) 6.25 ml 2 มก. / มล. และโปรเค380 มล. dh2o เพิ่มเติมสำหรับ 0.5hr ตัวอย่างด้วยการกวนที่ 56 8C ใน thermomixer ( 900 รอบต่อนาที ) โซลูชั่นถูกทิ้งและวัสดุเล็บล้างสองครั้ง 500 มิลลิลิตร0.1% ( w / v ) โซเดียมคลอไรด์ เมื่อ 500 มล. 100 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) และ เอทานอลแล้วมี 500 มิลลิลิตร สารละลาย dh2o ทิ้งหลังจากแต่ละซักก้าวการล้างเล็บ , 400 ml สิบบัฟเฟอร์ ( 10 มม. นอกจากนี้ HCl / ฯph8.0 1 mM EDTA 100 mM NaCl ) 50 ml 20 % ( w / v ) t , 40 มิลลิลิตร20 มก. / UL โปร K , และ 40 มิลลิลิตร 1 เมตร 20 เพิ่มขึ้นตามด้วยการบ่มที่ 56 8C ด้วยการกวนโดยใช้thermomixer ( 900 รอบต่อนาที ) 2 H ย่อยวัสดุ เล็บต่อการย่อย ปริมาณเท่ากัน บริสุทธิ์มาก ฟีนอล : คลอโรฟอร์ม : isomylแอลกอฮอล์ ( 25:24:1 ) pH 8.0 ( Invitrogen ) คือ เพิ่มหลอด เขย่าแล้วระดับ 13500rcf 3 นาทีที่บนเฟสออกเพิ่มใหม่ 1.5 ml หลอดและเท่าของปริมาณคลอโรฟอร์มที่เพิ่ม หลอดผสมและระดับที่ 1 , 000 rcf มินนี่คลอโรฟอร์มซักก้าว คือแสดง 2 ครั้ง ผลก็ถูกย้ายไปบนเฟสamicon Ultra 0.5 100 K อุปกรณ์ปั่นที่ 14 , 000 rcf 2 นาทีกรองทิ้ง และ amicon ล้างสองครั้งกับ 480 มิลลิลิตรของ dh2o 100 มิลลิลิตร dh2o ถูกเพิ่มเข้าไป amicon ซึ่งจากนั้นคว่ำลงในคอลเลกชันและปั่นหลอดสำหรับ 2 นาทีที่ 1 , 000 rcf เพื่อelute .