2.6. Determination of purity and mo

2.6. Determination of purity and molecular weight of purified amylase

Sodium dodecyl sulphate poly acryl amide gel electrophoresis (SDS–PAGE) was performed to determine and check the molecular weight and purity of purified amylase from pitaya peel.

SDS–PAGE was performed with a gel electrophoresis unit (Bio-Rad) using a 12% acrylamide resolving gel in the presence of 0.1% SDS and a 4.5% stacking gel containing 0.1% SDS according to the method of Laemmli (1970).

The SDS reducing sample buffer and tank buffer were 0.5 M Tris–HCl (pH 6.8) containing 2% SDS and Tris–glycine (0.025 M Tris–HCl, pH 8.3; 0.192 M glycine) with 0.1% SDS, respectively.

A 10% TCA solution was employed to concentrate and precipitate protein samples that had been removed from the top phase.

The precipitation process is important for the removal of salts present in the samples, which if not removed, will affect the electrophoresis process.

Electrophoresis was performed at 110 V and 36 mA for 75 min.

When the run was completed, a solution comprising 0.05% (v/v) Coomassie Brilliant Blue G-250, 30% (v/v) methanol and 10% (v/v) acetic acid, was used to stain the gel.

Protein bands were observed after distaining by employing the same buffer without Coomassie Brilliant Blue.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6 การกำหนดความบริสุทธิ์และน้ำหนักโมเลกุลของ amylase บริสุทธิ์ โซเดียม dodecyl ซัลเฟตโพลี acryl amide เจ electrophoresis (SDS – หน้า) ที่ดำเนินการเพื่อพิจารณา และตรวจสอบน้ำหนักโมเลกุลและความบริสุทธิ์ของ amylase บริสุทธิ์จากเปลือก pitaya SDS-หน้าที่ดำเนินการกับเจล electrophoresis หน่วย (ไบ-Rad) ใช้อะคริลาไมด์ 12% แก้ไขเจลในต่อหน้าของ 0.1% SDS และเจซ้อน 4.5% ประกอบด้วย 0.1% SDS ตามวิธีของ Laemmli (1970) องค์กรลดบัฟเฟอร์ตัวอย่างและถังบัฟเฟอร์ได้ 0.5 M ตรี – HCl (pH 6.8) ประกอบด้วย 2% SDS และทริสเรทติ้ง – glycine (0.025 M ตรี – HCl, pH 8.3; 0.192 M glycine) ด้วย 0.1% SDS ตามลำดับ ปัญหา TCA 10% ถูกจ้างเพื่อสมาธิ และ precipitate ตัวอย่างโปรตีนที่ถูกลบออกจากขั้นตอนด้านบน การฝนเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการกำจัดเกลือที่อยู่ในตัวอย่าง ซึ่งถ้าไม่เอาออก จะมีผลต่อกระบวนการ electrophoresis ทำ electrophoresis 110 V และ 36 มาในนาทีที่ 75 เมื่อเสร็จการรัน แก้ไขปัญหาประกอบด้วย 0.05% (v/v) Coomassie Brilliant บลู G-250 เมทานอล 30% (v/v) และกรดอะซิติก 10% (v/v) ใช้สิบแต้มเจ แถบโปรตีนที่สังเกตหลังจาก distaining โดยใช้บัฟเฟอร์ โดย Coomassie Brilliant Blue เหมือนกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 ความมุ่งมั่นของความบริสุทธิ์และน้ำหนักโมเลกุลของอะไมเลสบริสุทธิ์โซเดียมโพลีโดเดซิลซัลเฟต acryl ข่าวคราวเอไมด์ (SDS-PAGE) ได้ดำเนินการเพื่อตรวจสอบและตรวจสอบน้ำหนักโมเลกุลและความบริสุทธิ์ของอะไมเลสบริสุทธิ์จากเปลือกแก้วมังกร. SDS-PAGE ได้ดำเนินการกับหน่วยข่าวคราว (Bio-Rad) โดยใช้ริลาไมด์ 12% การแก้ไขเจลในการปรากฏตัวของ SDS 0.1% และ 4.5% ซ้อนเจลที่มี 0.1% SDS ตามวิธีการของ Laemmli (1970). เอกสารความปลอดภัยลดบัฟเฟอร์ตัวอย่างและบัฟเฟอร์ถัง 0.5 M Tris-HCl (pH 6.8) ที่มี SDS 2% และ Tris-glycine (0.025 M Tris-HCl, pH 8.3; 0.192 M glycine). กับ 0.1% SDS ตามลำดับวิธีการแก้ปัญหาTCA 10% เป็นลูกจ้างที่จะมีสมาธิและตะกอนตัวอย่างโปรตีนที่ ได้ถูกลบออกจากขั้นตอนด้านบน. กระบวนการตกตะกอนเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการกำจัดเกลือที่มีอยู่ในตัวอย่างซึ่งถ้าไม่ได้เอาออกจะมีผลต่อกระบวนการข่าวคราว. Electrophoresis เป็นที่ 110 V และ 36 มิลลิแอมป์ 75 นาที. เมื่อทำงาน เสร็จสมบูรณ์เป็นทางออกที่ประกอบไป 0.05% (v / v) Coomassie? สีฟ้าสดใส G-250, 30% (v / v) เมทานอลและ 10% (v / v) กรดอะซิติกได้ถูกใช้ในคราบเจล. วงดนตรีที่โปรตีนถูกตั้งข้อสังเกตหลังจาก distaining โดยการบัฟเฟอร์เดียวกันโดยไม่ต้อง Coomassie? สีฟ้าสดใส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 ความมุ่งมั่นของความบริสุทธิ์และน้ำหนักโมเลกุลของอะไมเลสด้วย

โซเดียมโดเดซิลซัลเฟตพอลิคริลาไมด์เจลอิเลคโตรโฟรีซีส ( SDS ) หน้า ) ได้ทำการศึกษาและตรวจสอบโมเลกุล และความบริสุทธิ์ของบริสุทธิ์เอนไซม์อะไมเลสจากเปลือกแก้วมังกร .

t –หน้าแสดงกับ gel electrophoresis ( หน่วยชีวภาพราด ) โดยใช้ 12% อะคริลาไมด์เจลในการปรากฏตัวของ 0.1% SDS และ 4 .5 % วางซ้อนเจลประกอบด้วย 0.1% SDS ตามวิธีการของ laemmli ( 1970 )

ตัวอย่าง SDS ลดบัฟเฟอร์ และบัฟเฟอร์เป็นถัง 0.5 m ทริส– HCl ( พีเอช 6.8 ) ประกอบด้วย 2 % SDS และทริส–ไกลซีน ( 0.025 m ทริส– HCl , pH 8.3 ; 0.192 M glycine ) 0.1 % SDS , ตามลำดับ

แก้ TCA 10% มาใช้ในการตกตะกอนโปรตีนเข้มข้น และตัวอย่างที่ถูกลบออกจากขั้นตอนด้านบน

กระบวนการตกตะกอนเป็นสิ่งสำคัญเพื่อกำจัดเกลือที่มีอยู่ในตัวอย่าง ซึ่งถ้าไม่ลบจะมีผลต่อกระบวนการอิเล็ก .

วิธีดำเนินการโดย 110 V และมา 36 75 นาที

เมื่อวิ่งเสร็จสมบูรณ์โซลูชันประกอบด้วย 0.05 % ( v / v ) เหล่านี้น่าจะเป็น  Brilliant Blue g-250 30 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) เมทานอลและ 10% ( v / v ) กรดที่ใช้คราบเจล

แถบโปรตีนที่พบหลังจาก distaining โดยการใช้บัฟเฟอร์เดียวกันโดยไม่มีเหล่านี้น่าจะเป็น  สดใสสีฟ้า