Flagellin Is a Ligand for TLR11The

Flagellin Is a Ligand for TLR11
The TLR11 stimulatory activity found in lysates of the UPEC strain 8NU has a protein component, as this activity is abolished by treatment with proteinase K, but not RNase, DNase, or concanavalin A (ConA) (Zhang et al., 2004). Based on this finding, we speculated that the TLR11 PAMP in Salmonella also had a protein component that could be isolated by column chromatography. We fractionated heat-killed lysates of S. Typhimurium on a DEAE-Sephacel anion-exchange column, followed by CM-sepharose cation exchange chromatography and finally Mono Q FPLC chromatography using linear NaCl gradients (Figure 2A). The stimulatory activity of dialyzed fractions from each chromatographic step was tracked by testing induction of luciferase in RAW cells, which express TLR11, stably transfected with an NF-κB-luciferase reporter. The stimulatory activity eluted broadly and corresponded to the two major protein peaks (fraction 8 and fraction 14) following Mono Q fractionation (Figure 2B). To confirm that the stimulatory activity in these fractions was of a similar nature to the TLR11 PAMP, we treated fraction 8 and fraction 14 with DNase, RNase, and proteinase K. As lipopolysaccharide (LPS) is a major PAMP in gram-negative bacteria, we also depleted LPS by using polymyxin B sepharose. As shown in Figure 2C, the NF-κB stimulatory activity in fraction 8 was unaffected by DNase, RNase, and proteinase K but was severely diminished by polymyxin B treatment, and hence, the activity in fraction 8 is likely due to LPS. In contrast, the stimulatory activity in fraction 14 was unaffected by DNase, RNase, and polymyxin B but was abolished by proteinase K treatment, strongly suggesting a protein PAMP.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Flagellin เป็นลิแกนด์สำหรับ TLR11กิจกรรม stimulatory TLR11 พบใน lysates ของ 8NU ต้องใช้ UPEC มีส่วนประกอบโปรตีน เป็นกิจกรรมนี้ถูกยกเลิก โดยรักษาด้วย proteinase K แต่ไม่ RNase, DNase หรือ concanavalin A (ConA) (Zhang et al., 2004) เราตามหานี้ คาดว่า PAMP TLR11 ในสายยังมีส่วนประกอบโปรตีนที่คอลัมน์ chromatography สามารถแบ่งแยก เราแบ่ง lysates ฆ่าความร้อนของ s ได้ Typhimurium DEAE-Sephacel แลกเปลี่ยน anion คอลัมน์ ตาม CM sepharose cation exchange chromatography และสุดท้ายขาวดำ Q FPLC chromatography ใช้เส้น NaCl ไล่ระดับสี (รูป 2A) กิจกรรม stimulatory ของเศษ dialyzed จากแต่ละขั้นตอน chromatographic ถูกติดตาม โดยทดสอบการเหนี่ยวนำของ luciferase ในเซลล์ดิบ ซึ่งด่วน TLR11, stably transfected ด้วยการโปรแกรมรายงาน NF κB luciferase กิจกรรม stimulatory eluted อย่างกว้างขวาง และ corresponded การแห่งโปรตีนหลักสอง (เศษ 8 และเศษ 14) ตามคุณสมบัติของสาร Q ขาวดำ (รูปที่ 2B) เพื่อยืนยันว่า กิจกรรม stimulatory แบบแยกส่วนเหล่านี้มีลักษณะคล้ายกับ TLR11 PAMP เราถือว่าเศษส่วน 8 และเศษ 14 กับ DNase, RNase และ proteinase คุณ เป็น lipopolysaccharide (LPS) PAMP หลักในแบคทีเรียแบคทีเรียแกรมลบ เรายังพร่อง LPS โดย sepharose polymyxin B ดังแสดงในรูปที่ 2C กิจกรรม stimulatory NF κB ในเศษ 8 ถูกยก โดย DNase, RNase และ proteinase K แต่ได้ลดลงอย่างรุนแรง โดยรักษา polymyxin B และด้วยเหตุนี้ กิจกรรมในเศษ 8 มีแนวโน้มจาก LPS ในทางตรงกันข้าม กิจกรรม stimulatory ในเศษ 14 ถูกยก โดย DNase, RNase และ polymyxin B แต่ถูกยุติ โดยรักษา proteinase K ขอแนะนำโปรตีน PAMP

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

flagellin เป็นแกนด์สำหรับ TLR11
TLR11 กิจกรรมกระตุ้นที่พบใน lysates ของสายพันธุ์ UPEC 8NU มีส่วนประกอบของโปรตีนเป็นกิจกรรมนี้ถูกยกเลิกโดยการรักษาด้วยโปร K แต่ไม่ RNase, DNase หรือ concanavalin (Cona) (Zhang et al, ., 2004) ขึ้นอยู่กับการค้นพบนี้เราคาดการณ์ว่าใน TLR11 PAMP Salmonella ยังมีส่วนประกอบของโปรตีนที่สามารถแยกออกจากคอลัมน์ เรา fractionated lysates ความร้อนฆ่า S. Typhimurium บน DEAE-Sephacel คอลัมน์ไอออนแลกเปลี่ยนตาม CM-Sepharose โคแลกเปลี่ยนประจุบวกและในที่สุดก็โมโนโค Q FPLC การไล่ระดับสีโดยใช้โซเดียมคลอไรด์เชิงเส้น (รูปที่ 2A) กิจกรรมกระตุ้นเศษส่วน dialyzed จากแต่ละขั้นตอนโครมาถูกติดตามโดยการทดสอบการเหนี่ยวนำของ luciferase ในเซลล์ RAW ซึ่งแสดง TLR11, transfected เสถียรกับนักข่าว NF-κB-luciferase กิจกรรมกระตุ้นชะวงกว้างและตรงกับสองยอดโปรตีนที่สำคัญ (เศษ 8 และ 14 ส่วน) ตามลำดับส่วน Mono Q (รูปที่ 2B) เพื่อยืนยันว่ากิจกรรมกระตุ้นในเศษส่วนเหล่านี้มีลักษณะคล้ายกับ TLR11 PAMP เราได้รับการรักษาส่วน 8 และ 14 ส่วนที่มี DNase, RNase และโปรเคเป็น lipopolysaccharide (LPS) เป็น PAMP สำคัญในแบคทีเรียแกรมลบ เรายังหมด LPS โดยใช้ polymyxin B Sepharose ดังแสดงในรูป 2C, NF-κBกิจกรรมกระตุ้นในส่วน 8 เป็นผลกระทบจาก DNase, RNase และโปร K แต่ถูกลดลงอย่างรุนแรงจากการรักษา polymyxin B และด้วยเหตุนี้กิจกรรมในส่วนที่ 8 น่าจะเกิดจากซีรี่ส์ ในทางตรงกันข้ามกิจกรรมกระตุ้นในส่วน 14 คือผลกระทบจาก DNase, RNase และ B polymyxin แต่ถูกยกเลิกโดยการรักษาโปร K, ขอแนะนำโปรตีน PAMP

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทางเป็นลิแกนด์สำหรับ tlr11
tlr11 กระตุ้นกิจกรรมของ upec สายพันธุ์ที่พบใน lysates 8nu มีโปรตีนเป็นส่วนประกอบ เช่น กิจกรรมนี้ยกเลิกโดยการรักษาด้วยโปรตีน K แต่ไม่ใช่เลสตรวจหา ADNase , หรือถูก ( cona ) ( Zhang et al . , 2004 ) ขึ้นอยู่กับการค้นพบนี้เราสันนิษฐานว่า tlr11 pamp ใน Salmonella มีโปรตีนองค์ประกอบที่สามารถแยกโดยโครมาโตกราฟีคอลัมน์ เราพบความร้อนฆ่า lysates ของ S . typhimurium ในการทำเอนไซม์แลกเปลี่ยนไอออน chromatography คอลัมน์ตามด้วยการแลกเปลี่ยนประจุบวก และสุดท้ายซม. เกี่ยวข้อง Mono Q fplc โครมาโทกราฟีโดยใช้การไล่ระดับสีที่มีเส้น ( รูปที่ 2A )การจัดกิจกรรมของแต่ละขั้นตอนผ่านเศษส่วนและถูกติดตามโดยการทดสอบการเหนี่ยวนำเอนไซม์ลูซิเฟอเรสในเซลล์ดิบ ซึ่งแสดง tlr11 อย่างถาวร , transfected กับ NF - นักข่าว b-luciferase κ . กิจกรรมการและตัวอย่างซึ่งตรงกับหลักสองโปรตีนยอด ( เศษ 8 ส่วน Mono Q ( 14 ) ดังต่อไปนี้ ( รูปที่ 2B )เพื่อยืนยันว่ากิจกรรมกระตุ้นในส่วนเหล่านี้เป็นลักษณะคล้ายกับ tlr11 pamp เรารักษาส่วน 8 จำนวน 14 ตรวจหา ADNase เลสและโปร , K . เป็นสีดำเข้ม ( หล่อลื่น ) เป็น pamp หลักในแบคทีเรียแกรมลบ เรายังพร่อง หล่อลื่นโดยใช้ polymyxin B เกี่ยวข้อง . ดังแสดงในรูปที่ 2 , NF - κ B กระตุ้นกิจกรรมในส่วนที่ถูกผลกระทบ โดยการตรวจหา ADNase 8 ,เลสและโปรติเนส K แต่อย่างรุนแรงลง โดย polymyxin บี การรักษา ดังนั้น กิจกรรมในส่วนที่ 8 มีโอกาสเนื่องจากหล่อลื่น . ในทางตรงกันข้าม , กิจกรรมกระตุ้นในสัดส่วน 14 ถูกผลกระทบ โดยการตรวจหา ADNase เลส , และ polymyxin B แต่ถูกยกเลิกโดยการใช้ เค โปร ขอแนะนำโปรตีน pamp .