MethodsChemicalsThe clobazam bulk p

Methods
Chemicals
The clobazam bulk powder was kindly provided by Hakim Pharmaceutical Company (Tehran, Iran). HPLC grade acetonitrile and analytical grade potassium dihydrogen phosphate were purchased from Merck (Darmastadt, Germany). Clobazam tablets (10 mg) were from Dr Abidi Pharmaceutical Laboratory, Tehran, Iran and obtained from a local pharmacy.

Instrumentation
The analysis was performed by using a chromatographic system from Waters (Milford, USA) consisting of a Model 515 isocratic pump, a Model 710 plus autosampler and a Model 480 UV–vis detector. The data processing system was the version 1.5x of a multi-channel Chrom&Spec software for chromatography. For heat studies, a dry air oven (Melag, Germany) was used. A 100 W Tungsten lamp and a low-pressure Mercury lamp 100 W were used as visible or UV light source, respectively.

The 1H-NMR spectrum was obtained in CDCl3 using a Bruker FT-500 Spectrometer (Bruker, Rheinstetten, Germany). The chemical shifts (δ) relative to tetramethylsilane as internal standard were reported in part per million (ppm). The mass spectrum was achieved on an Agilent 5975C Spectrometer. The IR spectrum was obtained by using a Nicolet 550-FT Spectrophotometer (Nicolet, Maison, WI, USA).

Peak purity of the samples resulted from stress degradation was checked using an Agilent 1100 HPLC system (Agilent Technologies, USA), equipped with a quaternary pump, an on-line degasser, an auto-sampler, a column oven, and a Photodiode Array (PDA) detector coupled with a ChemStation Software version B.04.01 (Agilent Technologies, USA). For the peak purity analysis, the spectra were corrected for background absorption caused by the mobile phase or matrix compounds, by subtracting the appropriate reference spectra. The spectra were assessed in the range of 225–254 nm and the mode of “best possible match of the entire spectrum” was selected as the mode of normalization.

Chromatographic conditions
A Nova-pak C18 column (150 mm × 3.9 mm, 4 μm, Waters, Milford, USA) was used for the chromatographic separation. The mobile phase was composed of 50 mM KH2PO4 (pH 8.5) and acetonitrile in the ratio of 50:50 (v/v) and pumped at room temperature, at a flow rate of 1 ml/min. The wavelength of the UV detector was set at 230 nm. The mobile phase was degassed by filtration through a 0.45 μm filter and sonication for 5 min.

Stock standard solutions
A 50 μg/ml stock standard solution of clobazam was prepared in acetonitrile. Calibration solutions of clobazam at 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2, 5, 10 and 20 μg/ml were prepared by transferring various aliquots of clobazam solution (50 μg/ml) into a series of 10 ml volumetric flasks and completing the volume to the mark with the mobile phase.

Linearity
Six sets of calibration standard solutions of clobazam were prepared in mobile phase in the range of 0.1-20 μg/ml. The solutions were analyzed according to the optimized chromatographic conditions and the peak area was plotted over the clobazam concentration. The statistical data were calculated.

Precision and accuracy
Three different concentrations of clobazam (0.2, 2 and 20 μg/ml) within the calibration range were prepared and analyzed in triplicate during one day and three consecutive days. The coefficient of variation (CV) and error values were determined to find out the precision and accuracy of the analytical method.

Robustness
To find out the robustness of the proposed method, the chromatographic conditions were changed. The influence of the pH value of the mobile phase and also the percent composition of the mobile phase were studied.

Analysis of tablets
The average weight of twenty finely powdered clobazam tablets (10 mg) was calculated. An amount of powdered tablet equivalent to one tablet was weighed and transferred into a 100 ml volumetric flask. After addition of about 70 ml of water and acetonitrile (50:50, v/v), the mixture was vortex-mixed for 15 min. The solution was diluted to mark with the same solvent and centrifuged at 4000 rpm for 10 min. The solution was subjected to the analysis method after four times dilution and filtration through a 0.45 μm polypropylene syringe filter (Teknokroma, Spain).

Recovery
The standard addition method was used to evaluate the relative recovery of clobazam from dosage forms. Standard concentrations of clobazam were added to a solution resulted from tablet sample and analyzed. The resulted peak area was compared with a standard solution at the same concentration level and the relative recovery was calculated.

Stress degradation
Acid and base induced degradation
Clobazam solutions containing 500 μg/ml in 1 M HCl, 2 M HCl and 0.1 M NaOH were allowed to stand at room temperature or 60°C. For the HPLC analysis, 0.5 ml of the solution was transferred into a 10 ml volumetric flask and the excess of acid or base were neutralized with NaOH or HCl, respectively. After diluting to the mark with the mobile phase, the solution was injected to the HPLC system. The peak area was compared with freshly prepared samples at the same initial concentration value. The same procedure was performed using tablet powder instead of clobazam bulk powder. All experiments were performed in triplicate.

Hydrogen peroxide induced degradation
Clobazam solutions in 3% H2O2 (500 μg/ml) prepared from bulk drug or tablet powder were kept at room temperature or 60°C. After twenty times dilution with the mobile phase, the resulted solution was injected to the HPLC system and the peak area compared with a standard solution at the same concentration.

Photolytic degradation
To study the effect of light on drug substance, 100 mg of the bulk powder and also tablet powder were spread in a watch glass and directly exposed to visible or UV-light. The distance between the light source and the samples was 20 cm. For HPLC analysis, 5 mg of the powder was weighed and dissolved in 10 ml mobile phase and injected to the HPLC system after 20 times dilution. Clobazam solutions in water (500 μg/ml) prepared from bulk powder or tablet powder was also exposed to visible or UV-light. The solution was diluted in mobile phase to give a claimed concentration of 25 μg/ml and 20 μl was injected for HPLC analysis. The percentage of the remained clobazam was calculated using a freshly prepared standard solution at the same concentration.

Heat degradation
To find out the thermal stability, clobazam bulk powder and tablet powder were incubated in a dry oven at 80°C for 5 days. Also, aqueous solutions of clobazam bulk powder and tablet powder were incubated in a dry oven at 80°C for 5 days. Solution prepared from these samples were injected to the HPLC system and compared with a standard solution to calculate the percent of degradation.

Isolation of the basic degradation product of clobazam
The degradation product formed in 0.1 M NaOH after 5 h at 60°C was a white crystal. The crystals were separated and dried in a vacuum desiccator. The purity of this product was proved by injecting a sample solution to the HPLC system. The retention time of the product was about 7.5 min. The structure of this product was elucidated by using its 1H-NMR, mass and IR spectra.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการเคมีภัณฑ์กรุณาได้ให้ผงจำนวนมาก clobazam บริษัทเภสัชกรรม Hakim (เตหะราน อิหร่าน) Acetonitrile HPLC เกรดและเกรดวิเคราะห์โพแทสเซียมไฮโดรเจนฟอสเฟตถูกซื้อจากเมอร์ค (Darmastadt เยอรมนี) เม็ด Clobazam (10 มิลลิกรัม) ได้จากดร. Abidi เภสัชกรรมปฏิบัติ เตหะราน อิหร่าน และได้รับจากร้านขายยาภายในใช้เครื่องมือทำการวิเคราะห์โดยระบบ chromatographic จากน้ำ (ลฟอร์ด สหรัฐอเมริกา) ประกอบด้วยรุ่น 515 isocratic คิดปั๊ม 710 รุ่นรวม ทั้ง autosampler และจับ 480 รุ่น UV – vis ระบบประมวลผลข้อมูลมีรุ่น 1.5 x ของหลายช่อง Chrom และข้อมูลจำเพาะซอฟต์แวร์สำหรับ chromatography ศึกษาความร้อน มีใช้เตาอบอากาศแห้ง (Melag เยอรมนี) โคมไฟดาวพุธ low-pressure 100 W และหลอดทังสเตน W 100 ใช้เป็นมองเห็น หรือแสง UV มา ตามลำดับสเปกตรัม NMR 1H กล่าวใน CDCl3 โดยใช้สเปกโตรมิเตอร์ FT-500 Bruker เป็น (Bruker, Rheinstetten เยอรมนี) กะเคมี (δ) สัมพันธ์กับ tetramethylsilane เป็นมาตรฐานภายในมีรายงานในส่วนต่อล้าน (ppm) สเปกตรัมโดยรวมสำเร็จบนการ Agilent 5975C สเปกโตรมิเตอร์ คลื่น IR ได้รับ โดยใช้การ Nicolet 550 ฟุตเครื่องทดสอบกรดด่าง (Nicolet ไม้สน WI สหรัฐอเมริกา)ความบริสุทธิ์สูงสุดของตัวอย่างเป็นผลมาจากการลดความเครียดถูกตรวจสอบโดยใช้ HPLC Agilent 1100 ระบบการ (Agilent เทคโนโลยี สหรัฐอเมริกา), ปั๊ม quaternary, degasser ที่ง่ายดาย การอัตโนมัติแซมเพลอร์ เตาคอลัมน์ และจับ Photodiode เรย์ (PDA) ควบคู่กับซอฟต์แวร์ ChemStation รุ่น B.04.01 (Agilent เทคโนโลยี สหรัฐอเมริกา) สำหรับการวิเคราะห์ความบริสุทธิ์สูงสุด แรมสเป็คตราถูกแก้ไขสำหรับการดูดซึมของพื้นหลังที่เกิดจากการเคลื่อนระยะหรือเมทริกซ์สาร โดยลบแรมสเป็คตราอ้างอิงที่เหมาะสม แรมสเป็คตราถูกประเมินในช่วง 225-254 nm และเลือกวิธีการ "ดีที่สุดอาจตรงกันของคลื่นทั้งหมด" เป็นวิธีการฟื้นฟูเงื่อนไข chromatographicใช้สำหรับแยก chromatographic คอลัมน์ C18 ปากโนวา (150 mm × 3.9 mm, 4 μm น้ำ ลฟอร์ด สหรัฐอเมริกา) เฟสเคลื่อนประกอบด้วย 50 มม. KH2PO4 (pH 8.5) และ acetonitrile ในอัตราคนละครึ่ง (v/v) และสูบที่อุณหภูมิห้อง ที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร/นาที มีการตั้งค่าความยาวคลื่นของเครื่องตรวจจับ UV ที่ 230 nm เฟสเคลื่อนที่ degassed โดยการกรองผ่านตัวกรอง μm 0.45 และ sonication ใน 5 นาทีโซลูชั่นมาตรฐานหุ้น50 μg/ml ปริมาณสินค้าคงคลังมาตรฐานโซลูชันของ clobazam ถูกเตรียมใน acetonitrile โซลูชั่นเทียบของ clobazam ที่ 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2, 5, 10 และ 20 μg/ml ถูกเตรียมไว้ โดยโอน aliquots ต่าง ๆ ของโซลูชัน clobazam (50 μg/ml) เป็นชุด 10 ml volumetric flasks และเสร็จสิ้นการไดรฟ์ข้อมูลที่หมายด้วยระยะเคลื่อนแบบดอกไม้หกชุดเทียบโซลูชั่นมาตรฐานของ clobazam ถูกเตรียมในขั้นตอนการเคลื่อนที่ในช่วงของ 0.1-20 μg/ml แก้ปัญหาได้วิเคราะห์ตามเงื่อนไข chromatographic ให้เหมาะ และพื้นที่สูงถูกพล็อตมากกว่าสมาธิ clobazam มีคำนวณข้อมูลทางสถิติความแม่นยำและความถูกต้องความเข้มข้นแตกต่างกันสามของ clobazam (0.2, 2 และ 20 μg/ml) ในช่วงการปรับเทียบได้เตรียม และวิเคราะห์ใน triplicate ในช่วงหนึ่งวันและ 3 วันติดต่อกัน ค่าสัมประสิทธิ์ของความแปรผัน (CV) และค่าความผิดพลาดจึงตั้งใจที่จะค้นหาความแม่นยำและความถูกต้องของวิธีวิเคราะห์เสถียรภาพมีเปลี่ยนเงื่อนไข chromatographic เพื่อหาเสถียรภาพของวิธีการนำเสนอ มีศึกษาอิทธิพลของค่า pH ของเฟสเคลื่อนที่ และส่วนประกอบร้อยละของระยะเคลื่อนวิเคราะห์เม็ดมีคำนวณน้ำหนักเฉลี่ยของเม็ดแป้ง clobazam ยี่สิบ (10 มิลลิกรัม) จำนวนเท่ากับเม็ดหนึ่งเม็ดผงหนัก และถูกโอนย้ายไปหนาว volumetric 100 มล หลังจากนี้ประมาณ 70 ml และ acetonitrile (คนละครึ่ง v/v), ส่วนผสมที่ผสม vortex สำหรับ 15 นาที การแก้ปัญหาทำให้การทำเครื่องหมาย ด้วยตัวทำละลายเดียวกัน และ centrifuged ที่ 4000 รอบต่อนาทีใน 10 นาที โซลูชันถูกยัดเยียดให้วิธีการวิเคราะห์หลังจากเจือจางสี่เท่าและกรองผ่าน 0.45 μm polypropylene เข็มตัว (Teknokroma สเปน)การกู้คืนวิธีการเพิ่มมาตรฐานที่ใช้ประเมินการฟื้นสัมพันธ์ของ clobazam จากฟอร์มขนาด เพิ่มความเข้มข้นมาตรฐานของ clobazam โซลูชันเป็นผลมาจากตัวอย่างแท็บเล็ต และวิเคราะห์ พื้นที่สูงสุดที่ส่งผลให้ถูกเปรียบเทียบกับวิธีมาตรฐานที่ระดับความเข้มข้นเดียวกัน และมีคำนวณการฟื้นสัมพันธ์ลดความเครียดกรด และพื้นฐานการเหนี่ยวนำให้ลดโซลูชั่น Clobazam ประกอบด้วย μg 500 ml ใน 1 M HCl, 2 M HCl 0.1 M NaOH ได้รับอนุญาตให้ยืนที่ 60 องศาเซลเซียสหรืออุณหภูมิห้อง สำหรับการวิเคราะห์ HPLC, 0.5 ml ของโซลูชันได้โอนเข้าเป็น 10 ml volumetric หนาว และเกินของกรดหรือฐานถูก neutralized NaOH กับ HCl ตามลำดับ หลังจาก diluting ถึงเครื่องหมายด้วยระยะเคลื่อน การแก้ปัญหาถูกฉีดระบบ HPLC ตั้งสูงสุดถูกเปรียบเทียบกับตัวอย่างลิ้มที่ค่าความเข้มข้นเริ่มต้นเดียวกัน กระบวนการเดียวกันถูกทำโดยใช้ผงเม็ดแทนผงจำนวนมาก clobazam มีดำเนินการทดลองทั้งหมดใน triplicateไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ทำให้เกิดการลดประสิทธิภาพโซลูชั่น Clobazam 3% H2O2 (500 μg/ml) เตรียมจากยาจำนวนมาก หรือผงเม็ดที่ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องหรือ 60 องศาเซลเซียส หลังจากยี่สิบครั้งเจือจางด้วยระยะเคลื่อน การแก้ปัญหา resulted ถูกฉีดระบบ HPLC และบริเวณจุดสูงสุดเมื่อเทียบกับสารละลายมาตรฐานที่ความเข้มข้นเดียวกันย่อยสลาย photolyticเพื่อศึกษาผลของแสงของสารยาเสพติด 100 mg ผงจำนวนมาก และผงของแท็บเล็ตยัง ได้แพร่กระจายในแก้วชม และสัมผัสการมองเห็น หรือ แสง UV โดยตรง ระยะห่างระหว่างแหล่งกำเนิดแสงและตัวอย่าง 20 ซม. สำหรับวิเคราะห์ HPLC ผง 5 มก.หนัก และละลายในระยะเคลื่อน 10 ml และฉีดระบบ HPLC หลังเจือจาง 20 ครั้ง Clobazam โซลูชั่นในน้ำ (500 μg/ml) เตรียมจากผงขนาดใหญ่ หรือแท็บเล็ตผงถูกยังสัมผัสมองเห็น หรือ แสง UV โซลูชันถูกทำให้เจือจางในเฟสเคลื่อนที่ให้ความเข้มข้นที่อ้างว่าของ μg 25 ml และ 20 μl มีหัวฉีดสำหรับวิเคราะห์ HPLC มีคำนวณเปอร์เซ็นต์ของ clobazam ก่อนหน้าใช้โซลูชันมาตรฐานลิ้มที่ความเข้มข้นเดียวกันการลดความร้อนเพื่อหาความมั่นคงความร้อน ผงจำนวนมาก clobazam และผงเม็ดถูก incubated ในเตาอบแห้งที่ 80° C 5 วัน ยัง โซลูชั่นอควี clobazam จำนวนมากผงและผงเม็ดถูก incubated ในเตาอบแห้งที่ 80° C สำหรับ 5 วัน โซลูชันที่เตรียมจากตัวอย่างเหล่านี้ถูกฉีดระบบ HPLC และเปรียบเทียบกับสารละลายมาตรฐานเพื่อคำนวณเปอร์เซ็นต์ของการลดประสิทธิภาพแยกผลิตภัณฑ์สลายตัวพื้นฐานของ clobazamผลิตภัณฑ์ย่อยสลายเกิดขึ้นใน 0.1 M NaOH หลัง h 5 ที่ 60° C เป็นผลึกสีขาว ผลึกได้แยก และแห้งใน desiccator สูญญากาศ ความบริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์นี้ถูกพิสูจน์ โดยการแก้ไขตัวอย่างระบบ HPLC injecting ประมาณ 7.5 นาทีเมื่อเก็บรักษาผลิตภัณฑ์ได้ โครงสร้างของผลิตภัณฑ์นี้ถูก elucidated โดย 1H NMR มวล ความ IR แรมสเป็คตรา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธี
เคมี
ผงกลุ่ม clobazam ได้ให้ความกรุณาโดยนักปราชญ์เภสัชกรรม บริษัท (เตหะรานประเทศอิหร่าน) acetonitrile เกรด HPLC และวิเคราะห์เกรดโพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟตที่ซื้อมาจากเมอร์ค (Darmastadt, เยอรมนี) แท็บเล็ต Clobazam (10 มก.) มาจากดร Abidi เภสัชกรรมห้องปฏิบัติการ, เตหะราน, อิหร่านและที่ได้รับจากร้านขายยาท้องถิ่น. เครื่องมือวัดวิเคราะห์ได้ดำเนินการโดยใช้ระบบโครมาจากน้ำ (ฟอร์ด, ประเทศสหรัฐอเมริกา) ซึ่งประกอบด้วยรุ่น 515 ปั๊ม Isocratic, รุ่น 710 autosampler บวกและรุ่น 480 เครื่องตรวจจับรังสี UV-Vis ระบบการประมวลผลข้อมูลเป็น 1.5 เท่ารุ่นของหลายช่องทาง Chrom และซอฟต์แวร์สำหรับสเป็คโค สำหรับการศึกษาความร้อนเตาอบอากาศแห้ง (MELAG, เยอรมนี) ถูกนำมาใช้ หลอดไฟ 100 W ทังสเตนและความดันต่ำโคมไฟปรอท 100 วัตต์ถูกใช้เป็นที่มองเห็นหรือแหล่งที่มาของแสงยูวีตามลำดับ. สเปกตรัม 1H-NMR ที่ได้รับใน CDCl3 ใช้ Bruker FT-500 Spectrometer (Bruker, Rheinstetten, เยอรมนี) การเปลี่ยนแปลงทางเคมี (δ) เทียบกับ tetramethylsilane มาตรฐานภายในที่ได้รับรายงานในส่วนต่อล้านส่วน (ppm) สเปกตรัมมวลก็ประสบความสำเร็จใน Agilent 5975C Spectrometer ที่ได้รับคลื่นความถี่ IR โดยใช้เล 550-FT Spectrophotometer (เล, บ้าน, WI, USA). ความบริสุทธิ์สูงสุดของกลุ่มตัวอย่างที่เป็นผลมาจากการย่อยสลายความเครียดได้รับการตรวจสอบโดยใช้ Agilent 1100 ระบบ HPLC (Agilent Technologies, ประเทศสหรัฐอเมริกา) พร้อมกับ ปั๊มสี่, degasser ออนไลน์อัตโนมัติตัวอย่างเตาอบคอลัมน์และอาร์เรย์ไดโอด (PDA) เครื่องตรวจจับคู่กับซอฟท์แว ChemStation รุ่น B.04.01 (Agilent Technologies, ประเทศสหรัฐอเมริกา) สำหรับการวิเคราะห์ความบริสุทธิ์สูงสุดสเปกตรัมได้รับการแก้ไขในการดูดซึมพื้นหลังที่เกิดจากเฟสเคลื่อนที่หรือสารเมทริกซ์โดยการลบสเปกตรัมอ้างอิงที่เหมาะสม สเปกตรัมได้รับการประเมินในช่วง 225-254 นาโนเมตรและโหมดของ "การจับคู่ที่ดีที่สุดของทั้งสเปกตรัม" ได้รับเลือกเป็นโหมดของการฟื้นฟู. เงื่อนไข Chromatographic คอลัมน์ Nova-ปาก C18 (150 มิลลิเมตร× 3.9 มม 4 ไมโครเมตร น้ำ, ฟอร์ด, ประเทศสหรัฐอเมริกา) ที่ใช้สำหรับการแยกสาร เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย 50 mM KH2PO4 (pH 8.5) และ acetonitrile ในอัตราส่วน 50:50 (v / v) และสูบที่อุณหภูมิห้องที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร / นาที ความยาวคลื่นของเครื่องตรวจจับรังสียูวีที่ถูกตั้งไว้ที่ 230 นาโนเมตร เฟสเคลื่อนที่ได้รับการกำจัดก๊าซโดยการกรองผ่าน 0.45 ไมครอนกรองและ sonication 5 นาที. สต็อกโซลูชั่นมาตรฐาน50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรสารละลายมาตรฐานหุ้นของ clobazam ถูกจัดทำขึ้น acetonitrile การแก้ปัญหาการสอบเทียบ clobazam ที่ 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2, 5, 10 และ 20 ไมโครกรัม / มล. ได้จัดทำขึ้นโดยการโอนส่วนลงตัวต่างๆของการแก้ปัญหา clobazam (50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) เป็นชุดของ 10 มิลลิลิตรขวดปริมาตรและเสร็จสิ้นปริมาณ กับเครื่องหมายด้วยเฟสเคลื่อนที่. เส้นตรงหกชุดของการแก้ปัญหามาตรฐานการสอบเทียบของ clobazam ได้จัดทำขึ้นเฟสเคลื่อนที่ในช่วง 0.1-20 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร การแก้ปัญหาที่ถูกนำมาวิเคราะห์เป็นไปตามเงื่อนไขที่ดีที่สุดโครมาและบริเวณยอดเขาที่ถูกพล็อตในช่วงความเข้มข้น clobazam ข้อมูลสถิติจะถูกคำนวณ. ความแม่นยำและความถูกต้องสามความเข้มข้นแตกต่างกันของ clobazam (0.2, 2 และ 20 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) อยู่ในช่วงการสอบเทียบได้จัดทำและวิเคราะห์ในเพิ่มขึ้นสามเท่าในช่วงวันหนึ่งและสามวันติดต่อกัน ค่าสัมประสิทธิ์ของความแปรปรวน (CV) และค่าความผิดพลาดได้รับการพิจารณาเพื่อหาความแม่นยำและความถูกต้องของวิธีวิเคราะห์. ความทนทานในการหาข้อมูลความทนทานของวิธีที่เสนอเงื่อนไขโครมามีการเปลี่ยนแปลง อิทธิพลของค่าพีเอชของเฟสเคลื่อนที่และองค์ประกอบร้อยละของเฟสเคลื่อนที่ได้ศึกษา. การวิเคราะห์ของยาเม็ดน้ำหนักเฉลี่ยของยี่สิบผงละเอียด clobazam เม็ด (10 มิลลิกรัม) ที่คำนวณได้ ปริมาณของเทียบเท่าผงแท็บเล็ตหนึ่งแท็บเล็ตได้รับการชั่งน้ำหนักและโอนเข้า 100 มลขวดปริมาตร หลังจากที่เพิ่มขึ้นของประมาณ 70 ml ของน้ำและ acetonitrile (50:50, v / v) ซึ่งมีส่วนผสมเป็นน้ำวนผสมเป็นเวลา 15 นาที วิธีการแก้ปัญหาที่ได้รับการปรับลดการทำเครื่องหมายกับตัวทำละลายที่เหมือนกันและหมุนเหวี่ยงที่ 4000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาที วิธีการแก้ปัญหาที่ถูกยัดเยียดให้วิธีการวิเคราะห์หลังจากเจือจางครั้งที่สี่และการกรองผ่านตัวกรองเข็มฉีดยาโพรพิลีน 0.45 ไมครอน (Teknokroma, สเปน). การกู้คืนวิธีมาตรฐานนอกจากนี้ถูกนำมาใช้ในการประเมินการฟื้นตัวของญาติของ clobazam จากรูปแบบยา ความเข้มข้นของมาตรฐาน clobazam ถูกเพิ่มเพื่อแก้ปัญหาที่เกิดจากการตัวอย่างแท็บเล็ตและวิเคราะห์ ส่งผลให้พื้นที่สูงสุดเมื่อเทียบกับสารละลายมาตรฐานในระดับความเข้มข้นเดียวกันและการฟื้นตัวของญาติที่คำนวณ. การย่อยสลายความเครียดและความเสื่อมโทรมของกรดเหนี่ยวนำให้เกิดฐานการแก้ปัญหา Clobazam มี 500 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรใน 1 M HCl, 2 M HCl และ 0.1 M NaOH ได้รับอนุญาต ที่จะยืนที่อุณหภูมิห้องหรือ 60 องศาเซลเซียส สำหรับการวิเคราะห์ HPLC, 0.5 มล. ของการแก้ปัญหาที่ถูกย้ายเข้าไปในขวดปริมาตร 10 มิลลิลิตรและส่วนเกินของกรดหรือฐานถูกลบล้างด้วย NaOH หรือ HCl ตามลำดับ หลังจากที่เจือจางกับเครื่องหมายด้วยเฟสเคลื่อนที่, การแก้ปัญหาถูกฉีดกับระบบ HPLC บริเวณจุดสูงสุดเมื่อเทียบกับกลุ่มตัวอย่างที่เตรียมสดใหม่ในราคาที่ความเข้มข้นเริ่มต้นเดียวกัน ขั้นตอนเดียวกันได้รับการดำเนินการโดยใช้ผงแท็บเล็ตแทนผงกลุ่ม clobazam การทดลองทั้งหมดถูกดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่า. ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ย่อยสลายเหนี่ยวนำให้เกิดการแก้ปัญหา Clobazam 3% H2O2 (500 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) ที่เตรียมจากยาเสพติดเป็นกลุ่มหรือผงแท็บเล็ตจะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องหรือ 60 องศาเซลเซียส หลังจากยี่สิบครั้งเจือจางกับเฟสเคลื่อนที่, การแก้ปัญหาผลที่จะได้รับการฉีดระบบ HPLC และบริเวณจุดสูงสุดเมื่อเทียบกับสารละลายมาตรฐานที่ความเข้มข้นเดียวกัน. การย่อยสลาย photolytic เพื่อศึกษาผลกระทบของแสงในสารยาเสพติด 100 มิลลิกรัมของผงจำนวนมาก และผงแท็บเล็ตได้รับการแพร่กระจายในแก้วนาฬิกาและสัมผัสโดยตรงกับที่มองเห็นหรือแสงยูวี ระยะห่างระหว่างแหล่งกำเนิดแสงและตัวอย่างคือ 20 ซม. สำหรับการวิเคราะห์ HPLC, 5 มิลลิกรัมของผงได้รับการชั่งน้ำหนักและเลือนหายไปในระยะ 10 ml โทรศัพท์มือถือและฉีดกับระบบ HPLC หลังจาก 20 ครั้งเจือจาง โซลูชั่น Clobazam ในน้ำ (500 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) ที่เตรียมจากผงเป็นกลุ่มหรือผงแท็บเล็ตยังได้สัมผัสกับมองเห็นหรือแสงยูวี วิธีการแก้ปัญหาที่ได้รับการปรับลดในเฟสเคลื่อนที่เพื่อให้มีความเข้มข้นอ้างจาก 25 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรและ 20 ไมโครลิตรถูกฉีดสำหรับการวิเคราะห์ HPLC ร้อยละของ clobazam ยังคงได้รับการคำนวณโดยใช้สารละลายมาตรฐานที่ปรุงสดใหม่ที่มีความเข้มข้นเดียวกัน. การย่อยสลายความร้อนในการหาเสถียรภาพทางความร้อน, ผงกลุ่ม clobazam และผงแท็บเล็ตถูกบ่มในเตาอบแห้งที่อุณหภูมิ 80 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 วัน นอกจากนี้สารละลายของผงกลุ่ม clobazam และผงแท็บเล็ตถูกบ่มในเตาอบแห้งที่อุณหภูมิ 80 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 วัน วิธีการแก้ปัญหาที่เตรียมจากตัวอย่างเหล่านี้ถูกฉีดกับระบบ HPLC และเมื่อเทียบกับสารละลายมาตรฐานในการคำนวณเปอร์เซ็นต์ของการย่อยสลาย. การแยกผลิตภัณฑ์ย่อยสลายพื้นฐานของ clobazam ผลิตภัณฑ์ย่อยสลายที่เกิดขึ้นใน 0.1 M NaOH หลังจาก 5 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียสเป็นสีขาว คริสตัล ผลึกถูกแยกออกและแห้งในสูญญากาศเดซิ ความบริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์นี้ได้รับการพิสูจน์โดยการฉีดสารละลายตัวอย่างกับระบบ HPLC เวลาการเก็บรักษาของผลิตภัณฑ์เป็นประมาณ 7.5 นาที โครงสร้างของผลิตภัณฑ์นี้ได้รับการอธิบายโดยใช้ 1H-NMR ของมวลและ IR สเปกตรัม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีการสารเคมี

โคลบาแซมผงขนาดใหญ่ก็กรุณาให้บริการโดย บริษัท ฮาคิม เภสัชกรรม ( อิหร่านเตหะราน ) ไนเกรด HPLC วิเคราะห์และระดับโพแทสเซียม dihydrogen ฟอสเฟตถูกซื้อจากเมอร์ค ( darmastadt , เยอรมัน ) โคลบาแซมชนิดเม็ด ( 10 มิลลิกรัม ) จาก ดร. abidi ห้องปฏิบัติการเภสัชกรรม , เตหะราน , อิหร่าน และได้รับจากร้านขายยาท้องถิ่น วัด

ผลจากการวิเคราะห์โดยใช้ระบบโครมจากน้ำ ( Milford , USA ) ประกอบด้วยรุ่น 515 Isocratic ปั๊ม รุ่น 710 บวก autosampler และแบบ UV Vis 480 และเครื่องตรวจจับ ระบบการประมวลผลข้อมูลเป็นเวอร์ชั่น 1.5x ของโคลม&หลาย spec สำหรับโครมาโตกราฟี การศึกษาความร้อนเตาอบอากาศแห้ง ( melag , เยอรมนี ) คือใช้100 วัตต์หลอดไฟทังสเตน และปรอทความดันต่ำหลอดไฟ 100 วัตต์ที่ใช้มองเห็น หรือไฟยูวีตามลำดับ

1h-nmr คลื่นความถี่ได้ใน cdcl3 ใช้ BRUKER ft-500 Spectrometer ( BRUKER Rheinstetten , เยอรมนี ) เคมีกะ ( δ ) เทียบกับเตตร้าเมทิลไซเลนเป็นมาตรฐานภายใน มีรายงานในส่วนในล้านส่วน ( ppm )มวลสเปกตรัมสําเร็จในด้านสเปก 5975c . อินฟราเรดสเปกตรัมได้โดยใช้ nicolet 550-ft Spectrophotometer ( nicolet เมซ , วี , USA )

ยอดความบริสุทธิ์ของตัวอย่างที่เกิดจากความเครียด การตรวจสอบโดยใช้ระบบ ( Agilent เทคโนโลยี Agilent 1100 HPLC , USA ) , ติดตั้งปั๊มซึ่งเป็น degasser ออนไลน์รถยนต์ตัวอย่างคอลัมน์เตาอบ ,โฟโตไดโอดเรย์ ( PDA ) และเครื่องตรวจจับคู่กับ chemstation ซอฟแวร์รุ่น b.04.01 ( Agilent Technologies , USA ) สำหรับยอดความบริสุทธิ์การวิเคราะห์สเปกตรัมกำลังแก้ไขพื้นหลังการดูดซึมเกิดจากสารประกอบเฟสหรือแบบเคลื่อนที่ โดยการลบสเปกตรัมอ้างอิงที่เหมาะสมสเปกตรัมมีการประเมินในช่วง 225 – 254 nm และโหมดของการแข่งขันที่ดีที่สุดของสเปกตรัมทั้งหมด " ได้รับเลือกเป็นโหมดปกติ


และเงื่อนไขเป็น c18 โนวาปาร์คคอลัมน์ ( 150 มม.  ×  3.9 มม. 4 μ M , น้ำ , ฟอร์ด , USA ) ใช้สำหรับ การแยกทางโครมาโทกราฟี เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย 50 mm kh2po4 ( pH 8.5 ) และไน ในอัตราส่วน 50 :50 ( v / v ) และสูบที่อุณหภูมิห้อง ที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร / นาที ความยาวคลื่นของรังสี UV เครื่องตรวจจับไว้ที่ 230 nm . ระยะที่เคลื่อนที่ได้ degassed โดยการกรองผ่าน 0.45 μ M กรองและ sonication สำหรับโซลูชั่น 5 นาที


สินค้ามาตรฐาน 50 μ g / ml สินค้ามาตรฐานโซลูชั่นของโคลบาแซมถูกเตรียมในไน . ปรับแต่งโซลูชั่นของโคลบาแซมที่ 0.1 , 0.2 , 0.5 , 1 , 2 , 510 และ 20 กรัม / มิลลิลิตรμเตรียมย้ายเฉยๆต่างๆของโคลบาแซมโซลูชั่น ( 50 μ g / ml ) เป็นชุดของ 10 มล. ปริมาตรขวดและกรอกเสียงไป มาร์ค กับ เฟสเคลื่อนที่เป็นเส้นตรง
.

6 ชุดสอบเทียบมาตรฐานโซลูชั่นของโคลบาแซมเตรียมในเฟสเคลื่อนที่ในช่วงของ 0.1-20 μกรัม / มิลลิลิตรโซลูชั่นที่เหมาะสม และวิเคราะห์ตามสภาพและพื้นที่สูงสุดวางแผนมากกว่าโคลบาแซมความเข้มข้น ข้อมูลทางสถิติได้ ความแม่นยำและความถูกต้อง

สามแตกต่างกันความเข้มข้นของโคลบาแซม ( 0.2 , 2 และ 20 μ g / ml ) ในช่วงเตรียมการสอบเทียบและวิเคราะห์ทั้งสามใบใน 1 วันและ 3 วันติดต่อกันสัมประสิทธิ์ของการแปรผัน ( CV ) และค่าความคลาดเคลื่อนมีความตั้งใจที่จะหา ความแม่นยำและความถูกต้องของวิธีการวิเคราะห์


หาความทนทานของวิธีการที่เสนอเงื่อนไข และมีการเปลี่ยนแปลงไป อิทธิพลของค่าความเป็นกรด - ด่างของเฟสเคลื่อนที่และยังเปอร์เซ็นต์องค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่ พบว่า การวิเคราะห์ของเม็ด

น้ำหนักเฉลี่ย 20 ผงละเอียดโคลบาแซมเม็ด ( 10 มิลลิกรัม ) คำนวณได้ . ปริมาณผงเม็ดเทียบเท่ากับหนึ่งเม็ดหนักและโอนย้ายไปยัง 100 มล. ปริมาตรขวด หลังจากเพิ่มประมาณ 70 มิลลิลิตรของน้ำและไน ( 50 , V / V ) ส่วนผสมจะถูกน้ำวนผสมเป็นเวลา 15 นาทีสารละลายที่เจือจางให้มาร์คด้วยตัวทำละลายเดียวกันและระดับที่ 4000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีแก้ปัญหาภายใต้การวิเคราะห์วิธีการหลังจากสี่ครั้ง ( และการกรองผ่าน 0.45 μมเข็มกรองโพรพิลีน ( teknokroma , สเปน )


นอกจากนี้มาตรฐานการกู้คืนเป็นวิธีประเมินการฟื้นตัวของโคลบาแซมจากญาติ ใช้แบบฟอร์มความเข้มข้นมาตรฐานของโคลบาแซมเพิ่ม เพื่อแก้ปัญหาที่เกิดจากเม็ดตัวอย่างและวิเคราะห์ ผลสูงสุด พื้นที่เมื่อเทียบกับโซลูชั่นมาตรฐานในระดับความเข้มข้นเดียวกันและการกู้คืนเมื่อคำนวณการย่อยสลาย

เครียดกรดและเบสการสลาย
โคลบาแซมโซลูชั่นที่มี 500 μ g / ml ใน 1 M HCl , HCl 2 M และ 01 M NaOH ได้รับอนุญาตให้ยืนที่อุณหภูมิห้อง หรือ 60 องศา สำหรับการวิเคราะห์ HPLC , 0.5 มิลลิลิตรของสารละลายที่ถ่ายโอนลงใน 10 มล. ปริมาตรขวด และส่วนเกินของกรดหรือเบสได้เป็นกลางด้วย NaOH หรือ HCl ตามลำดับ หลังจากเจือจางกับเครื่องหมายกับเฟสเคลื่อนที่ สารละลายที่ฉีดกับระบบ HPLC .พื้นที่สูงสุดเมื่อเทียบกับตัวอย่างที่เตรียมสดเหมือนกันค่าความเข้มข้นเริ่มต้น กระบวนการเดียวกันคือการใช้แท็บเล็ตผงแทนโคลบาแซมเป็นกลุ่มผง ทั้งหมดทดลองทั้งสามใบ ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ที่เกิดการย่อยสลาย

โคลบาแซมโซลูชั่น 3% H2O2 ( 500 μ g / ml ) ที่เตรียมจากผงหรือเม็ดเป็นกลุ่มยาไว้ที่อุณหภูมิห้อง หรือ 60 องศาหลังจากยี่สิบครั้งเจือจางกับเฟสเคลื่อนที่ ผลโซลูชั่นถูกฉีดกับระบบ HPLC และพื้นที่สูงสุดเมื่อเทียบกับโซลูชั่นมาตรฐานที่ความเข้มข้นเดียวกัน


photolytic การย่อยสลาย เพื่อศึกษาผลของแสงบนยา 100 มิลลิกรัมของผงขนาดใหญ่ และยัง แท็บเล็ตผงถูกแพร่กระจายในนาฬิกาแก้ว โดยตรง สัมผัส มองเห็น หรือแสงยูวี .ระยะทางระหว่างแหล่งกำเนิดแสงและจำนวน 20 cm สำหรับการวิเคราะห์ HPLC , 5 มิลลิกรัมของผงหนักและละลายใน 10 ml เฟสเคลื่อนที่เข้าไปในระบบ HPLC และหลังจาก 20 ครั้ง เจือจาง โซลูชั่นโคลบาแซมในน้ำ ( 500 μ g / ml ) ที่เตรียมจากผงเป็นกลุ่มหรือแท็บเล็ตผงยังถูกมองเห็นหรือแสง UV .สารละลายที่เจือจางในเฟสเคลื่อนที่ให้มีความเข้มข้น 25 μ g / ml และ 20 μผมฉีดสำหรับการวิเคราะห์ปริมาณซูโครส ร้อยละของยังคงโคลบาแซมถูกคำนวณโดยใช้เตรียมสดมาตรฐานสารละลายที่ความเข้มข้นเดียวกัน


หาการย่อยสลายความร้อนความร้อนเสถียรภาพโคลบาแซมผงเป็นกลุ่มและแท็บเล็ตผงถูกบ่มในเตาอบแห้งที่อุณหภูมิ 80 องศา C เป็นเวลา 5 วันนอกจากนี้ สารละลายของผงและเม็ดผงเป็นกลุ่มโคลบาแซมถูกบ่มในเตาอบแห้งที่อุณหภูมิ 80 องศา C เป็นเวลา 5 วัน เตรียมสารละลายจากตัวอย่างเหล่านี้ถูกส่งในระบบ HPLC และเมื่อเทียบกับโซลูชั่นมาตรฐานในการคำนวณเปอร์เซ็นต์การย่อยสลาย

แยกขั้นพื้นฐานของการย่อยสลายผลิตภัณฑ์ของผลิตภัณฑ์ที่เกิดขึ้นในการย่อยสลายโคลบาแซม
01 M NaOH หลังจากที่ 5 H 60 °องศาเซลเซียสเป็นคริสตัลสีขาว คริสตัลถูกแยกออกจากกันและแห้งในสูญญากาศเดซิกเคเตอร์ . ความบริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์นี้ถูกพิสูจน์โดยการฉีดสารละลายตัวอย่างระบบ HPLC . ในเวลาของผลิตภัณฑ์เท่ากับ 7.5 นาที โครงสร้างของผลิตภัณฑ์นี้ถูกอธิบายโดยการ 1h-nmr สื่อมวลชน และ IR spectra .