Inhibition of acetylcholinesterase

Inhibition of acetylcholinesterase enzyme (AChE) was evaluated by TLC in accordance with the methodology described by Elmann, which was later adapted by Rhee et al. (2001). This bioassay consists in the application of the sample to TLC plates and spraying the plate with Ellman’s reagent, which was prepared by mixing
5,5-dithiobis-2-nitrobenzoic acid (DTNB) and a buffer solution of acetylthiocholine iodide (ATCI). The TLC plate was subsequently sprayed with AChE enzyme (3U/mL). After 3 min, enzyme inhibition was observed by the presence of white spots on the yellow plate. The TLC enzyme test is basically qualitative but is still significantly
sensitive. The following solutions were prepared for this test: (1) 50 mM Tris–HCl pH 8 (buffer); (2) 50 mM Tris–HCl pH 8 containing 0.1 M NaCl and 0.02 M MgCl2·6H2O; (3) 1 mM Ellman’s reagent; and (4) 1 mM ACTI. The lyophilized enzyme AChE was diluted in buffer solution (1) to prepare a 1000U/mL enzyme solution. 5 L aliquots
of compounds 1–7 (4 mg/mL) were initially applied to TLC plates (DC-Alufolien, silica gel 60 F254, 0.2 mm Merck). The plate was then sprayed with solutions (3) and (4). After 3 min, which is the time necessary for the solution to completely dry, the plate was sprayed with AChE (3U/mL). After approximately 10 min, the appearance of
white spots was observed and their diameters were immediately measured. Physostigmine was used as positive control.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ยับยั้งเอนไซม์ acetylcholinesterase (AChE) ถูกประเมิน โดย TLC ตามวิธีที่อธิบายไว้ โดย Elmann ซึ่งภายหลังถูกดัดแปลงโดย Rhee et al. (2001) Bioassay นี้ประกอบด้วยแอพลิเคชันของตัวอย่างแผ่น TLC และพ่นแผ่นกับรีเอเจนต์ของ Ellman ซึ่งถูกเตรียม โดยผสมกรด 5.5-dithiobis-2-nitrobenzoic (DTNB) และการแก้ไขปัญหาบัฟเฟอร์ของ acetylthiocholine ไอโอไดด์ (ATCI) แผ่น TLC มาฉีดพ่น ด้วยเอนไซม์ AChE (3U/มล.) หลังจาก 3 นาที ยับยั้งเอนไซม์ถูกตรวจสอบ โดยสถานะของจุดสีขาวบนแผ่นสีเหลือง การทดสอบเอนไซม์ TLC เชิงคุณภาพโดยทั่วไป แต่ยังมีสำคัญ วิธีแก้ไขปัญหาต่อไปนี้ถูกเตรียมไว้สำหรับการทดสอบนี้: (1) 50 มม.ตรี – HCl pH 8 (บัฟเฟอร์); (2) มม. 50 ทริสเรทติ้ง – HCl pH 8 ประกอบด้วย 0.1 M NaCl และ 0.02 M MgCl2·6H2O (3) มม. 1 Ellman รีเอเจนต์ และ (4) 1 มม. ACTI เอนไซม์ lyophilized ปวดถูกผสมในบัฟเฟอร์โซลูชั่น (1) การเตรียมแก้ไขปัญหาเอนไซม์ 1000U/mL 5 L aliquotsสาร 1 – 7 (4 mg/mL) ได้เริ่มใช้แผ่น TLC (DC-Alufolien ซิลิก้าเจล 60 F254, 0.2 mm เมอร์ค) จานได้แล้วฉีดพ่น ด้วยโซลูชั่น (3) และ (4) หลังจาก 3 นาที ซึ่งเป็นเวลาที่จำเป็นสำหรับการแก้ปัญหาการแห้งสนิท จานถูกพ่น ด้วยปวด (3U/มล.) หลังจากประมาณ 10 นาที ลักษณะที่ปรากฏของมีสังเกตจุดสีขาว และปัจจุบันของพวกเขาได้วัดทันที Physostigmine ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การยับยั้งเอนไซม์ลาสิกขา ( ปวด ) ประเมินโดย TLC ตามวิธีการที่อธิบายโดย elmann ซึ่งภายหลังถูกดัดแปลงโดย Rhee et al . ( 2001 ) วิธีนี้ประกอบด้วยการใช้ตัวอย่าง TLC จานและพ่นแผ่นกับเอลเมิ่นเป็นรีเอเจนต์ที่เตรียมโดยการผสม
55-dithiobis-2-nitrobenzoic acid ( dtnb ) และสารละลายบัฟเฟอร์ของ acetylthiocholine ไอโอไดด์ ( ผลิตภัณฑ์ ) โดย TLC plate และพ่นด้วยเอนไซม์ปวด ( 3U / ml ) หลังจาก 3 นาที โดยการยับยั้งเอนไซม์พบว่ามีจุดสีขาวบนจานเหลือง และทดสอบ TLC เอนไซม์โดยทั่วไปเชิงคุณภาพแต่ยังสูงกว่า
ไวต่อความรู้สึก การแก้ปัญหาต่อไปนี้เตรียมสำหรับการทดสอบนี้( 1 ) 50 มม. โดย– HCl pH 8 ( บัฟเฟอร์ ) ; ( 2 ) 50 มม. โดย– HCl Ph 8 ที่ 0.1 M NaCl และ 0.02 M ชุดด้วย 6h2o ; ( 3 ) 1 มิลลิเมตร เ ล์แมนเป็นรีเอเจนต์ ; และ ( 4 ) 1 มิลลิเมตรเร็ . เอนไซม์โปรตีนที่ปวดเจือจางในสารละลายบัฟเฟอร์ ( 1 ) เตรียม 1000u / ml เอนไซม์โซลูชั่น 5  ผมเฉยๆ
สารประกอบ 1 – 7 ( 4 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) ในขั้นแรกใช้แผ่น TLC ( DC alufolien ซิลิกาเจล 60 f254 0.2 มม. เมอร์ค )จาน แล้วพ่นด้วยโซลูชั่น ( 3 ) และ ( 4 ) หลังจากนั้น 3 นาที ซึ่งเป็นเวลาที่จำเป็นสำหรับโซลูชันแห้งสนิท แผ่นถูกพ่นด้วยปวด ( 3U / ml ) หลังจากประมาณ 10 นาที สังเกตลักษณะของ
จุดขาว และเส้นผ่าศูนย์กลางของตนได้ทันทีได้ physostigmine ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวก .