The samples were centrifuged at 14.000 × g for 2 min and 1 ?l of the clear supernatant was spotted in duplicate onto the MALDI target (MTP 384 target polished steel plate; Bruker Daltonik GmbH, Bremen, Germany)and air-dried at room temperature. Then, each spot was overlaid with 1 ?l of saturated ?-cyano-4-hydroxycinnamic acid (HCCA)matrix solution in organic solvent (50% acetonitrile and 2.5% trifluo-roacetic acid, both v/v) and air-dried completely prior to MALDI-TOFMS measurement on UltrafleXtreme MS (Bruker Daltonik GmbH,Bremen, Germany). Spectral data were taken in the m/z range of2.000 Da to 20.000 Da, and each was a result of the accumulation of at least 1000 laser shots obtained from ten different regions ofthe same sample spot. These data were analysed with the Flex Analysis software (Version 3.4). Prior to analysis, the mass spec-trometer was externally calibrated with a peptide mix of bombesin,angiotensin I, glu-fibrinopeptide B, adrenocorticotropic hormone(ACTH) (18-39), ubiquitin, and cytochrome c. Spectra with peaksoutside the allowed average were not considered. Modified spectrawere loaded into the MALDI BioTyperTM3.1 Version (Bruker Dal-tonik GmbH, Bremen, Germany). Pictures of sample-matrix crystalswere taken by built-in camera.
? กลุ่มตัวอย่างที่ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 14.000 กรัม× 2 นาทีและ 1 ลิตรใสชัดเจนก็เห็นในที่ซ้ำกันไปยังเป้าหมาย MALDI (MTP 384 แผ่นเหล็กขัดเป้าหมาย Bruker Daltonik GmbH, เบรเมน, เยอรมนี) และอากาศแห้งที่อุณหภูมิห้อง . จากนั้นแต่ละจุดได้รับการบุด้วย 1? ลิตรอิ่มตัว? -cyano-4-hydroxycinnamic กรด (HCCA) สารละลายเมทริกซ์ในตัวทำละลายอินทรีย์ (acetonitrile 50% และกรด trifluo-roacetic 2.5% ทั้ง v / v) และอากาศแห้งอย่างสมบูรณ์ ก่อนที่จะมีการวัด MALDI-TOFMS ใน UltrafleXtreme MS (Bruker Daltonik GmbH, เบรเมน, เยอรมนี) ข้อมูลสเปกตรัมถูกถ่ายในช่วงม. / Z of2.000 ดา 20.000 ดาและแต่ละคนเป็นผลมาจากการสะสมอย่างน้อย 1,000 ภาพเลเซอร์ที่ได้รับจากสิบภูมิภาคที่แตกต่างกัน ofthe จุดตัวอย่างเดียวกัน ข้อมูลเหล่านี้ถูกนำมาวิเคราะห์ด้วยซอฟต์แวร์วิเคราะห์ Flex (เวอร์ชั่น 3.4) ก่อนที่จะมีการวิเคราะห์มวลจำเพาะ-trometer ได้รับการสอบเทียบภายนอกด้วยส่วนผสมของเปปไทด์ bombesin, angiotensin ผม Glu-fibrinopeptide B, ฮอร์โมน adrenocorticotropic (ACTH) (18-39), ubiquitin และ cytochrome ค Spectra กับ peaksoutside เฉลี่ยได้รับอนุญาตไม่ได้พิจารณา ดัดแปลง spectrawere โหลดลงใน MALDI BioTyperTM3.1 รุ่น (Bruker Dal-Tonik GmbH, เบรเมน, เยอรมนี) รูปภาพของตัวอย่างเมทริกซ์ crystalswere ถ่ายด้วยกล้องในตัว
การแปล กรุณารอสักครู่..
จำนวนระดับที่ 14.000 × G 2 นาทีและ 1 ผมของนำที่ชัดเจนปรากฎในสำเนาไปยังเป้าหมาย ( เป้าหมายที่ขัดมา ดิเล่นแต่แผ่นเหล็ก BRUKER daltonik GmbH , เบรเมน , เยอรมัน ) และอากาศแห้งที่อุณหภูมิห้อง แล้ว แต่ละจุดที่ถูกหุ้มด้วย 1 ผมอิ่มตัว ? - cyano-4-hydroxycinnamic acid ( hcca ) เมทริกซ์โซลูชั่นในตัวทำละลายอินทรีย์ ( ไน 50% และ 25 % trifluo roacetic กรดทั้ง v / v ) และอากาศแห้งสนิทก่อนที่จะวัด maldi-tofms บน ultraflextreme MS ( BRUKER daltonik GmbH , เบรเมน , เยอรมัน ) ข้อมูลสเปกตรัมถ่าย M / Z ช่วง of2.000 ดาไป 20.000 ดา และแต่ละคือผลของการสะสมของอย่างน้อย 1000 ยิงเลเซอร์ที่ได้จาก 10 ภูมิภาคต่าง ๆของตัวอย่างเดียวกันจุดข้อมูลเหล่านี้มาวิเคราะห์ด้วยโปรแกรมวิเคราะห์ Flex ( รุ่น 4 ) ก่อนที่จะวิเคราะห์มวลสเป็ค trometer คือภายนอกเทียบกับเปปไทด์ ผสมความขยันขันแข็งแบบฉัน , ซึ่ง fibrinopeptide B , แผนกลยุทธ์ ( ACTH ) ( 18-39 ) ข้างนอก และไซโตโครม ซี ให้กับ peaksoutside อนุญาตเฉลี่ยจะไม่พิจารณาspectrawere แก้ไขโหลดเข้ามา ดิ biotypertm3.1 รุ่น ( BRUKER ดัล tonik GmbH , เบรเมน , เยอรมัน ) ภาพตัวอย่างที่ถ่ายโดยเมทริกซ์ crystalswere ในตัวกล้อง
การแปล กรุณารอสักครู่..