2.4. Blood sampling and separation

2.4. Blood sampling and separation of leukocytes
Blood samples (6 fish/group) were collected from the caudal vein 1, 2, 3 and
4 weeks after start of feeding. Heparin was used as an anticoagulant. Individual
fish were sampled only once to avoid the influence on the assays due to multiple
bleeding and handling stress on the fish.
Leukocytes for assay were separated from each blood sample by densitygradient centrifugation. One ml of histopaque 1.119 (Sigma) containing 100 µl
of Bacto haemagglutination buffer, pH 7.3 (Difco, USA) was dispensed into
siliconised tubes. One ml of a mixture of histopaque 1.077 and haemagglutination buffer was layered on the top. One ml of blood sample was then layered
carefully on the top of the gradient. Sample preparations were centrifuged at
700 G for 30 min at 4 °C. After centrifugation, plasma was collected and stored
at −20 °C for future analysis. Separated leukocytes were gently removed and
dispensed into siliconised tubes, containing phenol red free Hank's Balanced
Salt Solution (HBSS). Cells were then washed in HBSS and adjusted to 107
viable cells/ml.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 การสุ่มตัวอย่างและแยกของ leukocytes เลือดตัวอย่างเลือด (6 ปลา/กลุ่ม) ได้รวบรวมจาก caudal หลอดเลือดดำ 1, 2, 3 และ4 สัปดาห์หลังจากเริ่มให้อาหาร มีใช้เฮพารินเป็น anticoagulant มี แต่ละคนปลามีตัวอย่างเพียงครั้งเดียวเพื่อหลีกเลี่ยงอิทธิพลใน assays เนื่องจากหลายมีเลือดออก และการจัดการความเครียดในปลาLeukocytes สำหรับวิเคราะห์ถูกแยกจากแต่ละตัวอย่างเลือด โดย densitygradient centrifugation Ml หนึ่งของ histopaque 1.119 (ซิกมา) ประกอบด้วย 100 µlบัฟเฟอร์ Bacto haemagglutination, pH 7.3 (Difco สหรัฐอเมริกา) มีคำถามท่อ siliconised Ml หนึ่งส่วนผสมของ histopaque 1.077 haemagglutination บัฟเฟอร์มีชั้นด้านบน แล้วมีชั้นหนึ่งมิลลิลิตรของตัวอย่างเลือดด้านบนไล่ระดับกันอย่างระมัดระวัง เตรียมตัวอย่างถูก centrifuged ที่700 กรัมสำหรับ 30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส หลังจาก centrifugation พลาสมาถูกรวบรวม และจัดเก็บที่ −20 ° C สำหรับการวิเคราะห์ในอนาคต เบา ๆ ออก leukocytes แยก และคำเป็นท่อ siliconised ประกอบด้วยสีแดงวางฟรีแฮงก์ของสมดุลเกลือโซลูชัน (HBSS) เซลล์ถูกล้างใน HBSS แล้วปรับ 107ได้เซลล์/มล.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 การเก็บตัวอย่างเลือดและการแยกตัวของเม็ดเลือดขาว
ตัวอย่างเลือด (6 ปลา / กลุ่ม) ที่ถูกเก็บรวบรวมจากหลอดเลือดดำหาง 1, 2, 3 และ
4 สัปดาห์หลังจากการเริ่มต้นของการให้อาหาร เฮถูกใช้เป็นสารกันเลือดแข็ง บุคคล
ปลาตัวอย่างเพียงครั้งเดียวเพื่อหลีกเลี่ยงการมีอิทธิพลต่อการตรวจเนื่องจากหลาย ๆ
มีเลือดออกและความเครียดการจัดการปลา.
เม็ดเลือดขาวสำหรับการทดสอบที่ถูกแยกออกจากกันตัวอย่างเลือดโดยการหมุนเหวี่ยง densitygradient หนึ่งมิลลิลิตร Histopaque 1.119 (Sigma) ที่มี 100 ไมโครลิตร
ของ buffer haemagglutination Bacto พีเอช 7.3 (Difco, USA) ได้รับการจ่ายเป็น
หลอด siliconised หนึ่งมิลลิลิตรส่วนผสมของ Histopaque 1.077 และบัฟเฟอร์ haemagglutination ถูกชั้นบน หนึ่งมิลลิลิตรตัวอย่างเลือดตอนนั้นชั้น
อย่างรอบคอบด้านบนของการไล่ระดับสี เตรียมตัวอย่างถูกหมุนเหวี่ยงที่
700 กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ° C หลังจากการหมุนเหวี่ยง, พลาสม่าถูกเก็บรวบรวมและจัดเก็บไว้
ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสสำหรับการวิเคราะห์ในอนาคต เม็ดเลือดขาวแยกกันถูกถอดออกอย่างอ่อนโยนและ
จ่ายเป็นหลอด siliconised มีฟีนอลสีแดงฟรีแฮงค์สมดุล
โซลูชั่นเกลือ (HBSS) เซลล์ที่ถูกล้างแล้วใน HBSS และปรับให้ 107
เซลล์ที่มีชีวิต / ml

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . ตัวอย่างเลือดและการแยกเม็ดเลือดขาวในเลือด (
6 ปลา / กลุ่ม ) ถูกเก็บจากเส้นเลือดดำ ระดับ 1 , 2 , 3 และ 4 สัปดาห์หลังเริ่มให้อาหาร
. ยาถูกใช้เป็นเลือด ปลาแต่ละตัว
จำนวนเพียงครั้งเดียวเพื่อหลีกเลี่ยงอิทธิพลหรือเนื่องจากหลาย
เลือดออกและการจัดการความเครียดในปลา
ชนิดที่ใช้แยกจากแต่ละตัวอย่างเลือด โดย densitygradient การปั่นเหวี่ยง 1 มิลลิลิตร histopaque 1.119 ( ซิกม่า ) ( 100 µลิตร Bacto haemagglutination
ของบัฟเฟอร์ pH 7.3 ( difco , USA ) คือจ่ายเข้าไปในท่อ siliconised
. หนึ่งมิลลิลิตร ผสมและ histopaque 1.077 haemagglutination บัฟเฟอร์ชั้นด้านบน ตัวอย่างเลือดหนึ่งมิลลิลิตร แล้วชั้น
อย่างที่ด้านบนของการไล่ระดับสี . การเตรียมจำนวนไฟฟ้าที่
700 กรัม 30 นาที ที่อุณหภูมิ 4 องศา หลังการปั่นเหวี่ยง พลาสมา คือ รวบรวม และจัดเก็บที่อุณหภูมิ 20 ° C
−สำหรับการวิเคราะห์ในอนาคต แยกเม็ดเลือดขาวออกเบา ๆและ
จ่ายลงในหลอดที่มี siliconised , ฟีนอลสีแดงฟรีแฮงค์สมดุล
เกลือ ( hbss ) เซลล์ แล้วล้างใน hbss และปรับเปลี่ยน 107
ได้เซลล์ / มล.