2.3. Determination of phylogenetic

2.3. Determination of phylogenetic group
E. coli isolates could be classified into four phylogenetic
groups using a multiplex polymerase chain reaction (PCR)
assay . Different isolates were assigned to the corresponding
groups based on three genetic markers, namely chuA, yjaA
and TspE4.C2. Multiplex PCR reaction volumes consisted of
0.4 pmol of each primer (BGI, Beijing, China), 10 ml of 2
PCR Master Mix (Qiagen), 2 ml of DNA template (100 ng/ml)
and 6 ml DEPC water. The procedure of amplification was as
follows: initial denaturation at 95 C for 15 min; 30 cycles of
5 s denaturation at 95 C, 10 s annealing at 59 C, 30 s
extension at 72 C; and final extension for 5 min at 72 C.
Amplicons were separated by electrophoreses in 2% (wt/vol)
agarose gel stained with ethidium bromide (0.5 mg/ml) and
visualized under ultraviolet illuminator gel documentation
system (Syngene, NIFSAT).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 การกำหนดกลุ่ม phylogeneticE. coli ที่แยกได้สามารถแบ่งได้เป็นสี่ phylogeneticกลุ่มโดยใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส multiplex (PCR)วิเคราะห์ แยกแตกต่างกันถูกกำหนดให้สอดคล้องกับกลุ่มตามสามพันธุเครื่องหมาย คือชัว yjaAและ TspE4.C2 Multiplex PCR ปฏิกิริยาไดรฟ์ข้อมูลประกอบด้วยpmol 0.4 แต่ละพื้น (BGI ปักกิ่ง จีน), 10 ml 2ผสมหลัก PCR (Qiagen), 2 ml ของดีเอ็นเอแม่แบบ (100 ng/ml)และน้ำ DEPC 6 ml ขยายกระบวนการที่เป็นดังต่อไปนี้: denaturation เริ่มต้นที่ 95 C สำหรับ 15 นาที รอบ 30 ของ5 s denaturation ที่ 95 C, 10 s การอบเหนียวที่ 59 C, 30 s72 C และสุดท้ายส่วนขยายสำหรับ 5 นาทีที่ 72 C.Amplicons ถูกคั่นโดย electrophoreses 2% (wt/vol)agarose เจลสีกับโบรไมด์ ethidium (0.5 mg/ml) และvisualized ภายใต้รังสีอัลตราไวโอเลต illuminator เจเอกสารระบบ (Syngene, NIFSAT)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 ความมุ่งมั่นของกลุ่มสายวิวัฒนาการ
อี coli สายพันธุ์สามารถจำแนกออกเป็นสี่สายวิวัฒนาการ
กลุ่มโดยใช้วิธี Polymerase chain reaction ทวีคูณ (PCR)
การทดสอบ สายพันธุ์ที่แตกต่างกันได้รับมอบหมายให้สอดคล้อง
กลุ่มขึ้นอยู่กับสามเครื่องหมายทางพันธุกรรมคือ Chua, yjaA
และ TspE4.C2 PCR Multiplex ปฏิกิริยาเล่มประกอบด้วย
0.4 pmol ของแต่ละไพร (BGI, ปักกิ่ง, จีน), 10 มิลลิลิตร 2 หรือไม่?
PCR Master Mix (Qiagen) 2 มิลลิลิตรของแม่ดีเอ็นเอ (100 ng / ml)
และ 6 มลน้ำ DEPC ขั้นตอนของการขยายเป็น
ดังนี้ denaturation เริ่มต้นที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที; 30 รอบ
5 S denaturation ที่ 95 C, การอบ 10 วินาทีที่ 59 C, 30 วินาที
ส่วนขยายที่ 72 C; และการขยายสุดท้ายเวลา 5 นาทีที่ 72 ซี
Amplicons ถูกแยกออกโดย electrophoreses 2% (น้ำหนัก / ปริมาตร)
เจล agarose ย้อมด้วย ethidium bromide (0.5 mg / ml) และ
มองเห็นภายใต้แสงไฟช่วยอัลตราไวโอเลตเอกสารเจล
ระบบ (Syngene, NIFSAT)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การกำหนดกลุ่ม
E . coli สายพันธุ์ ซึ่งสามารถแบ่งได้เป็น 4 กลุ่ม ซึ่งการมัลติเพล็กซ์
ปฏิกิริยาลูกโซ่ )
( . . . ต่างสายพันธุ์เป็นมอบหมายให้สอดคล้องกัน
กลุ่มขึ้นอยู่กับสามเครื่องหมายพันธุกรรมคือ Chua , และ yjaa
tspe4.c2 . ปฏิกิริยา multiplex PCR ) ประกอบด้วย
0.4 pmol ของแต่ละสี ( BGI , ปักกิ่ง , จีน ) , 10 ml 
2ต้นแบบผสม PCR ( เพิ่ม ) , 2 ml ของแม่แบบดีเอ็นเอ ( 100 ng / ml )
depc และน้ำ 6 ml . ขั้นตอนของการขยายเป็น
ดังนี้ : เริ่มต้นที่ 95 ( เป็นเวลา 15 นาที ; 30 รอบ
5 S ( 95 C 10 อบอ่อนที่อุณหภูมิ 59 องศาเซลเซียส 30 S
ส่วนขยายที่ 72 C ; และส่งเสริมสุดท้ายสำหรับ 5 นาทีที่ 72 C .
amplicons แยกกันโดย electrophoreses 2 % โดยน้ำหนัก / Vol )
เจลเปื้อนทิเดียมโบรไมด์ ( 05 มก. / มล. และมองเห็นภายใต้แสงไฟยูวี )

( syngene เจลเอกสารระบบ nifsat

, )