The fabrication of silicon carbide and carbon scaffolds obtained from these plant precursors Entandrophragma
cylindricum, Laminaria ochroleuca and Juncus maritimus consisted on their pyrolysis or thermal decomposition
to obtain the carbon scaffold and the further reactive infiltration of them with molten silicon at 1550ºC to obtain
the silicon carbide scaffolds. Parameters and atmosphere conditions have been optimized depending on the
precursor of origin and described before
The secondary-electron imaging of the microstructure of the C and SiC scaffolds obtained was performed using
a scanning electron microscope (SEM) (Philips XL30; CACTI, University of Vigo). This technique was also used
in the biocompatibility studies to analyze the morphology of the cells during their spreading and proliferation, for
each time of culture. The structural characterization was carried out with X-ray diffraction (XRD) and Infrared
Fourier transformed spectroscopy (FT-IR). The XRD technique was used to identify the crystalline components
and phases. The equipment used was a Siemens D-5000 Diffractometer (CACTI, University of Vigo). Functional
groups in the IR range were identified using a FTIR Bomem MB-100 spectrometer (CACTI, University of Vigo).
Samples were sterilized with the application of several 15 min ultrasound baths, starting with milli-Q water,
followed by 70% ethanol and acetone and autoclaved at 121ºC for 20 min. Solvents from the materials were firstly
extracted to evaluate their potential release of cytotoxic particles by rolling the samples immersed in MEM-alpha
(Sigma, USA) with 10% of Fetal Bovine serum (FBS; Invitrogen, USA) and 1% of Antibiotic/Antimicotic solution
during 90 hours at 37ºC and in rolling. A surface area of material to volume ratio of 2 cm2/ mL was used. The
extracted solvents were then diluted with fresh cellular growth medium to obtain dilutions of 0, 20, 30, 50 and
100% of the extract. The same procedure was followed with phenol solution at 6.4g/l and with supplemented
growth medium as positive and negative controls, respectively. Finally different dilutions, including controls, were
incubated for 24 hours with monolayers of the pre-osteoblastic cell line MC3T3-E1 (ECACC, U.K.) and cellular
viability was evaluated by means of the Cell Proliferation Kit I from Roche Molecular Biochemicals (MTT assay).
For direct contact assays a cell suspension of MC3T3-E1 of 1.7 × 105 cells ml 1 in 100 l of MEM-alpha
supplemented with 10% fetal bovine serum was added directly on the surface of the sterilized samples. Previously,
the scaffolds were placed in 96-well tissue culture plates. Cells were cultured up to 28 days in a humidified
atmosphere with 5% CO2 and at 37 C. To induce the differentiation 1 day after seeding, ascorbic acid 2-phosphate
(2 mM) and glycerol 2-phosphate (10 mM) were added to the MEM-alpha, and 7 days after the cell seeding
melatonin solution (50 nM) was also added. The culture medium was renewed every 2–3 days.
Cell morphology was analyzed by SEM Philips XL30 as described elsewhere [20]. The cellular cytoskeleton
was observed by confocal laser scanning microscopy (CLSM) Bio-Rad MRC 1024 where cells were fixed with a
solution of paraformaldehyde as described elsewhere [20] and Alexa fluor 488 phalloidin and propidium iodide
solutions were added to visualize the cellular cytoskeletal actin filaments and cell nuclei, respectively. Cells
proliferation was evaluated by the MTT Assay as described elsewhere
ผลิตของซิลิกอนคาร์ไบด์และโครงคาร์บอนที่ได้จากพืชเหล่านี้ไม่ยุ่ง Entandrophragma
cylindricum, ochroleuca Laminaria และ maritimus Juncus ประกอบในการไพโรไลซิของพวกเขาหรือการสลายตัว
จะได้รับนั่งร้านคาร์บอนและการแทรกซึมปฏิกิริยาต่อไปของพวกเขาด้วยซิลิกอนที่หลอมละลายที่1550ºCที่จะได้รับ
ซิลิกอนคาร์ไบด์ โครง พารามิเตอร์และสภาพบรรยากาศที่ได้รับการปรับปรุงขึ้นอยู่กับ
สารตั้งต้นของการกำเนิดและอธิบายก่อนที่จะ
ถ่ายภาพรองอิเล็กตรอนของโครงสร้างจุลภาคของซีและโครง SiC ได้ถูกดำเนินการโดยใช้
กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด (SEM) (ฟิลิปส์ XL30; CACTI, มหาวิทยาลัย Vigo ) เทคนิคนี้ก็ยังใช้
ในการศึกษา biocompatibility การวิเคราะห์ลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเซลล์ในช่วงการแพร่กระจายและการแพร่กระจายของพวกเขาสำหรับ
ช่วงเวลาของแต่ละวัฒนธรรม ลักษณะโครงสร้างได้รับการดำเนินการกับ X-ray diffraction (XRD) และอินฟาเรด
ฟูริเยร์เปลี่ยนสเปกโทรสโก (FT-IR) เทคนิค XRD ถูกใช้ในการระบุส่วนประกอบผลึก
และขั้นตอน อุปกรณ์ที่ใช้เป็นซีเมนส์ D-5000 มาตรการเลี้ยวเบน (CACTI มหาวิทยาลัยโก้) การทำงาน
กลุ่มในช่วง IR ถูกระบุโดยใช้ FTIR Bomem MB-100 สเปกโตรมิเตอร์ (CACTI มหาวิทยาลัยโก้).
ตัวอย่างที่ได้รับการฆ่าเชื้อด้วยการประยุกต์ใช้หลาย 15 นาทีอาบอัลตราซาวนด์ที่เริ่มต้นด้วยน้ำพัน-Q
ตามด้วยเอทานอล 70% และ อะซีโตนและเบาที่121ºC 20 นาที ตัวทำละลายจากวัสดุที่ได้รับในตอนแรก
ที่สกัดเพื่อประเมินศักยภาพของพวกเขาเปิดตัวของอนุภาคที่เป็นพิษโดยการรีดตัวอย่างแช่อยู่ใน MEM-alpha
(Sigma, ประเทศสหรัฐอเมริกา) กับ 10% ของซีรั่มของทารกในครรภ์วัว (FBS; Invitrogen, ประเทศสหรัฐอเมริกา) และ 1% ของยาปฏิชีวนะ / Antimicotic วิธีการแก้ปัญหา
ในช่วง 90 ชั่วโมงที่37ºCและกลิ้ง บริเวณพื้นผิวของวัสดุต่อปริมาณของ 2 cm2 / mL ถูกนำมาใช้
ตัวทำละลายสกัดถูกเจือจางแล้วกับสื่อการเจริญเติบโตของเซลล์สดที่จะได้รับการเจือจางของ 0, 20, 30, 50 และ
100% ของสารสกัด ขั้นตอนเดียวกันตามมาด้วยสารละลายฟีนอลที่ 6.4g / ลิตรและมีการเสริม
สื่อการเจริญเติบโตเป็นตัวควบคุมบวกและลบตามลำดับ เจือจางที่แตกต่างกันในที่สุดรวมทั้งการควบคุมถูก
บ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงกับ monolayers ของเซลล์สร้างกระดูกก่อน MC3T3-E1 (ECACC สหราชอาณาจักร) และโทรศัพท์มือถือ
ที่มีศักยภาพได้รับการประเมินโดยวิธีการของการเพิ่มจำนวนเซลล์ชุด I จากโรชโมเลกุลชีวเคมี (การทดสอบ MTT) .
สำหรับการตรวจการสัมผัสโดยตรงเซลล์แขวนลอยของ MC3T3-E1 1.7 × 105 เซลล์มล 1 ใน 100 ลิตรของ MEM-alpha
เสริมด้วย 10% ของทารกในครรภ์ในซีรั่มวัวถูกบันทึกโดยตรงบนพื้นผิวของตัวอย่างผ่านการฆ่าเชื้อ ก่อนหน้านี้
โครงถูกวางไว้ใน 96 หลุมจานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ เซลล์ที่ถูกเลี้ยงได้ถึง 28 วันในความชื้น
บรรยากาศที่มี CO2 5% และที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในการเหนี่ยวนำให้เกิดความแตกต่าง 1 วันหลังเพาะวิตามินซี 2 ฟอสเฟต
(2 มิลลิ) และกลีเซอรอล 2 ฟอสเฟต (10 มม) ถูกเพิ่มเข้าไป MEM-alpha และ 7 วันหลังจากที่เซลล์เพาะ
แก้ปัญหาเมลาโทนิ (50 นาโนเมตร) นอกจากนี้ยังถูกเพิ่มเข้ามา อาหารเลี้ยงเชื้อที่ได้รับการต่ออายุทุก 2-3 วัน.
สัณฐานวิทยาของเซลล์ได้รับการวิเคราะห์โดย SEM Philips XL30 ตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น [20] โครงร่างของเซลล์
ได้รับการตรวจสอบโดยใช้กล้องจุลทรรศน์เลเซอร์สแกน confocal (CLSM) Bio-Rad MRC 1024 ที่เซลล์ได้รับการแก้ไขด้วย
วิธีการแก้ปัญหาของ paraformaldehyde ตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น [20] และ Alexa Fluor 488 phalloidin และ propidium ไอโอไดด์
โซลูชั่นถูกเพิ่มเพื่อให้มองเห็นโปรตีน cytoskeletal โทรศัพท์มือถือ เส้นใยและนิวเคลียสของเซลล์ตามลำดับ เซลล์
งอกได้รับการประเมินโดย Assay MTT ตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น
การแปล กรุณารอสักครู่..
การผลิตของคาร์ไบด์ซิลิคอนและโครงคาร์บอนที่ได้จากพืชเหล่านี้การ entandrophragma
cylindricum ลามินาเรีย และ juncus มาริไทมัส คือ , ochroleuca ในไพโรไลซิส หรือการย่อยสลายของตนเพื่อขอรับ
ความร้อนคาร์บอนนั่งร้านและปฏิกิริยาของพวกเขากับหล่อเพิ่มเติมของซิลิคอนที่ 1550 º C ขอรับ
ซิลิคอนคาร์ไบด์ นั่งร้านพารามิเตอร์และสภาพบรรยากาศมีถูกปรับขึ้นอยู่กับสารตั้งต้นของแหล่งกำเนิดและอธิบายไว้ก่อน
ภาพอิเล็กตรอนทุติยภูมิของโครงสร้างจุลภาคของ C และ SIC ได้มีการใช้นั่งร้าน : กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด ( SEM ) ( Philips xl30 ; cacti , มหาวิทยาลัย Vigo ) เทคนิคนี้ใช้
กันได้ทางชีวภาพในการศึกษาวิเคราะห์สัณฐานวิทยาของเซลล์ในระหว่างการกระจายและการสำหรับ
แต่ละครั้งของวัฒนธรรม มีลักษณะโครงสร้างเป็นดำเนินการกับการเลี้ยวเบนของรังสีเอ็กซ์และอินฟราเรดสเปกโทรสโกปี ( FT-IR )
ฟูเรียร์แปลง . เทคนิค XRD ถูกใช้เพื่อระบุองค์ประกอบ
ผลึกและขั้นตอนอุปกรณ์ที่ใช้เป็น d-5000 ซีเมนส์ดิฟแฟรกโทมิเตอร์ ( cacti , มหาวิทยาลัย Vigo )
กลุ่มการทำงานในช่วงอินฟราเรดที่ถูกระบุว่าใช้ FTIR bomem mb-100 Spectrometer ( cacti , มหาวิทยาลัย Vigo ) .
ทำการฆ่าเชื้อด้วยการอัลตราซาวนด์อาบน้ำหลาย 15 นาที เริ่มด้วย milli-q น้ำ
ตามด้วย 70% แอลกอฮอล์และอะซิโตนและสังเคราะห์ที่ 121 º C เป็นเวลา 20 นาทีตัวทำละลายจากวัสดุมีวัตถุประสงค์เพื่อประเมินศักยภาพของพวกเขาปล่อย
สกัดพิษของอนุภาคโดยกลิ้งตัวอย่างแช่
อัลฟ่าเมม ( Sigma , USA ) ร้อยละ 10 ของแม่วัวเลือด ( FBS ; Invitrogen , USA ) และ 1% ของยาปฏิชีวนะ / antimicotic โซลูชั่น
ในระหว่าง 90 ชั่วโมง 37 º C และกลิ้ง มีพื้นที่ผิวของวัสดุปริมาตร 2 ตร. ซม. / ml มีค่าใช้
สกัดตัวทำละลายแล้วเจือจางด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อมือถือสดเพื่อให้ได้วิธีการ 0 , 20 , 30 , 50 และ
100% สารสกัด . ขั้นตอนเดียวกันตามมาด้วยฟีนอล โซลูชั่นที่ 6.4g/l และเสริม
growth medium เป็นตัวควบคุมบวกและลบตามลำดับ สุดท้ายวิธีการที่แตกต่างกันรวมถึงการควบคุม ,
บ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงกับ monolayers ของ pre osteoblastic เซลล์เส้น mc3t3-e1 ( ecacc , UK ) และโทรศัพท์เคลื่อนที่สามารถประเมินโดย
หมายถึงเซลล์ proliferation ฉันชุดจากโรช อัลลิซิน ( MTT assay ) โมเลกุล .
เพื่อติดต่อโดยตรงหรือเซลล์แขวนลอยของ mc3t3-e1 21 × 105 เซลล์มิลลิลิตร 1 ใน 100 ลิตร
อัลฟ่า แหม่มเสริมด้วยเซรั่มเพิ่ม 10% fetal bovine โดยตรงบนพื้นผิวของตัวอย่าง ก่อนหน้านี้
โครงอยู่ใน 96 ดีจานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ เซลล์เพาะเลี้ยงได้ถึง 28 วันใน humidified
บรรยากาศ CO2 ร้อยละ 5 และที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เพื่อทำให้เกิดความแตกต่าง 1 วัน น้ำหนัก 2-phosphate
กรดแอสคอร์บิค( 2 มม. ) และกลีเซอรอล 2-phosphate ( 10 มม. ) ถูกเพิ่มให้กับแหม่ม อัลฟ่า และ 7 วันหลังจากที่เซลล์เพาะ
เมลาโทนิน โซลูชั่น ( 50 nm ) ยังเพิ่ม วัฒนธรรมอาหารถูกต่ออายุทุก 2 - 3 วัน
รูปร่างของเซลล์โดยใช้ SEM ฟิลิปส์ xl30 ตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น [ 20 ] เซลล์ขาดตอน
สังเกตได้จากการสแกนด้วยเลเซอร์ / clsm ) ไบโอ ราด MRC 1024 ที่เซลล์มีการแก้ไขด้วย
แก้ไขพาราฟอร์มาลดิไฮด์ตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น [ 20 ] และ Alexa Fluor 488 phalloidin และโซลูชั่น propidium ไอโอไดด์
เพิ่มจะเห็นเซลล์เซลล์นิวเคลียสและไซโตร กเลตัล actin filaments ) เซลล์
การประเมินโดย MTT assay ตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น ๆ
การแปล กรุณารอสักครู่..