DNA cloning and sequencingThe PCR a

DNA cloning and sequencing
The PCR amplicons were ligated into pGEM-T Easy Vector (Promega, Madison, WI) using T4 DNA ligase.The recombinant plasmids were transformed into competent cells (Escherichia coli DH5α strain), and then the recombinant plasmids were screened using the bluewhite colonies system. The colonies suspected to contain the insert gene were cultured, and the plasmid DNA was extracted using the Invisorb® Spin Plasmid Mini kit (STRATEC molecular GmbH, Berlin, Germany) according to the manufacturer’s instructions. The purified plasmids were sequenced by 1st Base Laboratories, Malaysia.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การโคลนดีเอ็นเอและการจัดลำดับPCR amplicons ได้ควบเป็นเวกเตอร์กลาย (Promega เมดิสัน WI) pGEM-T ใช้ T4 DNA ligase Recombinant plasmids ถูกเปลี่ยนเป็นเซลล์มีอำนาจ (ต้องใช้ DH5α Escherichia coli), และจากนั้น การที่ recombinant plasmids ได้ฉายโดยใช้ระบบอาณานิคม bluewhite อาณานิคมสงสัยว่า มียีนแทรกได้อ่าง และดีเอ็นเอ plasmid ถูกสกัดโดยใช้ชุด Invisorb ®หมุน Plasmid มินิ (STRATEC GmbH โมเลกุล เบอร์ลิน เยอรมนี) ได้ตามคำแนะนำของผู้ผลิต Plasmids บริสุทธิ์ถูกเรียงลำดับตาม 1 ฐานปฏิบัติ มาเลเซีย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โคลนดีเอ็นเอและลำดับ
amplicons PCR ถูกผูกเข้า pGEM-T ง่ายเวกเตอร์ (Promega, Madison, WI) โดยใช้ดีเอ็นเอ T4 ligase.The พลาสมิด recombinant ถูกเปลี่ยนเป็นเซลล์ที่มีความสามารถ (สายพันธุ์ Escherichia coli DH5α) แล้วพลาสมิด recombinant ถูกคัดกรองโดยใช้ bluewhite ระบบอาณานิคม โคโลนีที่สงสัยว่าจะมียีนที่แทรกมาเลี้ยงและพลาสมิดดีเอ็นเอถูกสกัดโดยใช้Invisorb®หมุนชุดมินิพลาสมิด (STRATEC โมเลกุล GmbH, Berlin, Germany) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต พลาสมิดบริสุทธิ์มีลำดับขั้นตอนที่ 1 โดยห้องปฏิบัติการฐานมาเลเซีย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดีเอ็นเอการโคลนและ PCR amplicons ลำดับ
ถูกผูกเป็นเวกเตอร์ที่ง่าย pgem-t ( promega เมดิสัน , WI ) โดยใช้พลาสมิดดีเอ็นเอไลเกส T4 . คอมถูกเปลี่ยนเป็นเซลล์ที่มีความสามารถ ( Escherichia coli DH5 αสายพันธุ์ ) และจากนั้นมีพลาสมิดพาหะโดยใช้บลูไวท์อาณานิคมระบบ อาณานิคมสงสัยมีแทรกยีนที่ถูกเพาะเลี้ยงและดีเอ็นเอที่สกัดโดยใช้พลาสมิด invisorb ®ปั่นพลาส Mini Kit ( stratec โมเลกุล GmbH , เบอร์ลิน , เยอรมนี ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ทำให้พลาสมิดเป็นลำดับที่ 1 โดยห้องปฏิบัติการ , ฐานมาเลเซีย