2.2.2. Phylloplane colonizing bacte

2.2.2. Phylloplane colonizing bacteria (PCB)
A field survey was conducted during 2010 and 2011 across different
brinjal growing regions of Karnataka (data not shown).
Leaves from healthy brinjal plants were collected, maintained in
a humidity chamber (relative humidity > 70%) and transferred to
the laboratory within 48 h of collection. Leaf washing technique
was followed to isolate the phylloplane bacterial strains. Five
leaves from each plant were washed with 25 mL of saline solution
(0.85%). Bacteria colonized on leaf surface were dislodged using a
sterile brush during washing. The suspension was transferred to
50 mL tubes and centrifuged at 6800g for 10 min. The pellet was
dissolved in 1 mL of saline solution and used for bacterial isolation
following serial dilution technique (up to 10–7) on Nutrient agar
(NA). After incubation at 35 ± 2 C for 36 h, morphologically different
bacterial colonies appearing on the media were selected and
pure cultured on NA slants.
Bacterial inocula were prepared by growing the bacterial isolates
in Luria Bertani (LB) broth for 24 h on a rotary shaker
(150 rpm) at 35 ± 2 C. Bacterial cells were pelleted by centrifuging
at 6800g for 10 min, further washed three times with sterile distilled
water. Final concentration of bacteria was adjusted spectrophotometrically
to 0.45 OD at A610 nm.
Phylloplane colonization assay was carried out using 25 day-old
brinjal seedlings. Briefly, brinjal seedlings were grown in pots
(9 cm diameter) containing sterilized potting mixture (soil: sand:
farm yard manure @ 2:1:1 by volume) with one seedling/pot up
to 25 days in growth chamber with 26/22 C day/night temperature,
13/11 h light/dark cycles at 65% relative humidity. The light
intensity at the plant level was 200 W/m2
. Bacterial suspension
was spray inoculated on completely open brinjal leaves till runoff.
Treated plants were incubated for 14 days and leaf samples were
harvested and analyzed for bacterial colonization. Treated and control
leaves were cut into 10 mm diameter discs using sterilized
cork borer. Discs were washed initially with sterile distilled water
and adhering bacteria were dislodged using a sterile brush. Bacterial
concentration in suspension was determined by serial dilution
technique and expressed as cfu/cm2 leaf surface area.
Phylloplane colonizing bacteria were identified through morphological
analysis, biochemical characteristics according to the
methods outlined in the Bergey’s Manual of Systemic Bacteriology
(Krieg and Holt, 1984) and Microbiology – A laboratory manual
(Cappuccino and Sherman, 2014). The PCR amplification of partial
16S rRNA gene and sequencing was done following standard methods.
The DNA sequence obtained was compared with 16S rRNA
gene sequences in the NCBI database using the BLAST search algorithm
(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) to determine the
closest known relatives. The nucleotide sequence was deposited
with NCBI database and accession number was obtained.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2.2. บนอาณานิคมแบคทีเรีย (PCB)ในฟิลด์การทำสำรวจระหว่าง 2553 และ 2554 ผ่านแตกต่างbrinjal เติบโตภูมิภาคของกรณาฏกะ (ไม่แสดงข้อมูล)ใบจากพืชสุขภาพ brinjal ถูกเก็บรวบรวม เก็บรักษาไว้ในความชื้นที่หอค้า (ความชื้นสัมพัทธ์ > 70%) และโอนย้ายไปห้องปฏิบัติการภายใน 48 ชั่วโมงของคอลเลกชัน เทคนิคการซักผ้าใบตามมาแยกสายพันธุ์แบคทีเรียบน ห้าออกจากพืชแต่ละชนิดถูกล้าง ด้วยน้ำเกลือ 25 mL(0.85%) แบคทีเรียที่อาณานิคมบนพื้นผิวของใบไม้ถูก dislodged โดยใช้การแปรงที่ปลอดเชื้อในระหว่างซักผ้า ระงับการโอนย้ายไป50 mL หลอด และจากที่ 6800g 10 นาที เป็นเม็ดละลายในน้ำเกลือ 1 มิลลิลิตร และใช้สำหรับแยกเชื้อแบคทีเรียต่ออนุกรมเจือจางเทคนิค (ได้ถึง 10-7) บนอาหารวุ้น(นา) หลังจากบ่มที่ 35 ± 2 C สำหรับ 36 h, morphologically แตกต่างกันเลือกโคโลนีแบคทีเรียที่ปรากฏบนสื่อ และบริสุทธิ์ล้างบน slants นาแบคทีเรีย inocula ณที่เจริญเติบโตของแบคทีเรียที่แยกได้ในซุป Luria Bertani (ปอนด์) สำหรับการหมุนปั่นตลอด 24 ชั่วโมง(150 rpm) ที่ 35 ± 2 C. เซลล์แบคทีเรียเป็นสัตว์ โดยสิ่งที่ 6800g 10 นาที การล้าง 3 ครั้ง ด้วยหมันกลั่นน้ำ ความเข้มข้นสุดท้ายของเชื้อแบคทีเรียปรับปรุง spectrophotometricallyไป OD 0.45 ที่ A610 nmทดสอบบนล่าอาณานิคมถูกดำเนินการโดยใช้อายุ 25 วันกล้าไม้ brinjal สั้น ๆ brinjal ต้นกล้าที่ปลูกในกระถาง(เส้นผ่าศูนย์กลาง 9 ซม.) ที่ประกอบด้วยการฆ่าเชื้อแตกผสม (ดิน: ทราย:ฟาร์มปุ๋ยหลา@ 2:1:1 โดยปริมาตร) กับต้นกล้า/หม้อหนึ่งค่า25 วันในการเจริญเติบโตอุณหภูมิกลางวันกลางคืน 26/22 Cไฟ h 13 11/เข้ม รอบที่ความชื้นสัมพัทธ์ 65% แสงความเข้มในระดับโรงงานเป็น 200 W/m2. ระงับเชื้อแบคทีเรียเป็นสเปรย์ inoculated บนใบสมบูรณ์เปิด brinjal จนไหลบ่าพืชบำบัดได้รับการกก 14 วัน และเก็บตัวอย่างใบไม้เก็บเกี่ยว และวิเคราะห์สำหรับแบคทีเรียล่าอาณานิคม รักษา และควบคุมใบถูกตัดเป็นเส้นผ่านศูนย์กลาง 10 มม.แผ่นที่ใช้ในการฆ่าเชื้อมอดไม้ก๊อก ดิสก์ถูกล้างในเบื้องต้น ด้วยน้ำกลั่นที่ปลอดเชื้อและแบคทีเรียเกาะติดได้ dislodged โดยใช้แปรงเป็นหมัน แบคทีเรียกำหนดความเข้มข้นในระบบกันสะเทือน โดยเจือจาง serialเทคนิค และแสดงเป็นพื้นที่ผิวใบ cfu/cm2ระบุบนอาณานิคมแบคทีเรียผ่านทางสัณฐานวิเคราะห์ ลักษณะทางชีวเคมีตามวิธีการระบุไว้ในคู่มือ Bacteriology ระบบของ Bergey(Krieg และโฮลท์ 1984) และจุล ชีววิทยาห้องปฏิบัติการด้วยตนเอง(คาปูชิโน่และ Sherman, 2014) กระบือบางส่วนทำยีน 16S rRNA และลำดับตามวิธีการมาตรฐานลำดับดีเอ็นเอที่ได้รับการเปรียบเทียบ 16S rRNAลำดับยีนในฐานข้อมูล NCBI ใช้อัลกอริทึมค้นหาระเบิด(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) เพื่อตรวจสอบการใกล้ญาติพี่น้องทราบ ฝากลำดับนิวคลีโอไทด์มี NCBI ได้รับเลขทะเบียนและฐานข้อมูล

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2.2 Phylloplane อาณานิคมแบคทีเรีย (PCB)
การสำรวจข้อมูลได้ดำเนินการในช่วงปี 2010 และ 2011 แตกต่างกันทั่ว
พื้นที่ปลูกมะเขือเปราะกรณาฏกะ (ไม่ได้แสดงข้อมูล).
ใบจากพืชมะเขือเปราะมีสุขภาพดีได้เก็บรักษาไว้ใน
ห้องที่มีความชื้น (ความชื้นสัมพัทธ์> 70%) และการโอน การ
ตรวจทางห้องปฏิบัติการภายใน 48 ชั่วโมงของการเก็บ เทคนิคการซักผ้าใบ
ตามมาเพื่อแยก phylloplane แบคทีเรีย ห้า
ใบจากแต่ละโรงงานถูกล้างด้วย 25 มลน้ำเกลือ
(0.85%) แบคทีเรียอาณานิคมบนพื้นผิวใบหลุดออกโดยใช้
แปรงผ่านการฆ่าเชื้อระหว่างการซักผ้า การระงับการถูกย้ายไป
50 มลหลอดและหมุนเหวี่ยงที่ 6800g เป็นเวลา 10 นาที เม็ดถูก
กลืนหายไปใน 1 มิลลิลิตรของสารละลายน้ำเกลือและใช้สำหรับการแยกเชื้อแบคทีเรีย
ดังต่อไปนี้เทคนิคการเจือจางอนุกรม (ถึง 10-7) บน Nutrient agar
(NA) หลังจากการบ่มที่อุณหภูมิ 35 ± 2 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 36 ชั่วโมงที่แตกต่างกันของสัณฐานวิทยาของ
แบคทีเรียที่ปรากฏในสื่อได้รับการคัดเลือกและ
บริสุทธิ์เลี้ยงบน NA slants.
inocula แบคทีเรียที่ถูกจัดทำขึ้นโดยการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย
ใน Luria Bertani (ปอนด์) น้ำซุปเป็นเวลา 24 ชั่วโมงในโรตารี เครื่องปั่น
(150 รอบต่อนาที) ที่ 35 เซลล์± 2 องศาเซลเซียสแบคทีเรียถูกเหวี่ยงเม็ดโดย
ที่ 6800g เป็นเวลา 10 นาทีล้างอีกสามครั้งด้วยกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ
น้ำ ความเข้มข้นสุดท้ายของเชื้อแบคทีเรียที่มีการปรับ spectrophotometrically
0.45 OD ที่ A610 นาโนเมตร.
Phylloplane ล่าอาณานิคมการทดสอบได้รับการดำเนินการโดยใช้ 25 วันอายุ
ต้นกล้ามะเขือเปราะ สั้น ๆ , ต้นกล้ามะเขือเปราะที่ปลูกในกระถาง
(9 ซม. เส้นผ่าศูนย์กลาง) ที่มีการฆ่าเชื้อผสมปลูก (ดิน: ทราย:
ฟาร์มหลาปุ๋ยคอก @ 2: 1: 1 โดยปริมาตร) กับต้นกล้า / หม้อขึ้น
ถึง 25 วันในห้องที่มีการเจริญเติบโตที่ 26/22 C อุณหภูมิ Day / Night,
13/11 H แสง / มืดรอบความชื้นสัมพัทธ์ 65% แสง
ความเข้มในระดับโรงงานเป็น 200
W ระงับแบคทีเรีย
ถูกสเปรย์เชื้อบนใบมะเขือเปราะเปิดสมบูรณ์จนไหลบ่า.
พืชได้รับการรักษาที่ถูกบ่มเป็นเวลา 14 วันและตัวอย่างใบ
เก็บเกี่ยวและวิเคราะห์แบคทีเรีย ได้รับการรักษาและการควบคุม
ใบถูกตัดเป็นแผ่นขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 10 มิลลิเมตรใช้ฆ่าเชื้อ
หนอนเจาะไม้ก๊อก แผ่นแรกถูกล้างด้วยน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ
แบคทีเรียและยึดมั่นถูกขับไล่โดยใช้แปรงผ่านการฆ่าเชื้อ แบคทีเรีย
ความเข้มข้นในการระงับถูกกำหนดโดยการเจือจางอนุกรม
เทคนิคและแสดงเป็น / cm2 พื้นที่ผิวใบ cfu.
Phylloplane แบคทีเรียอาณานิคมถูกระบุผ่านทางสัณฐานวิทยา
การวิเคราะห์ลักษณะทางชีวเคมีเป็นไปตาม
วิธีการที่ระบุไว้ในคู่มือ Bergey ของระบบในแบคทีเรีย
(Krieg และโฮลท์, 1984) และจุลชีววิทยา - คู่มือการตรวจทางห้องปฏิบัติการ
(คาปูชิโนและเชอร์แมน 2014) ขยาย PCR ของบางส่วน
ของยีน 16S rRNA ลำดับและได้ทำตามวิธีมาตรฐาน.
ลำดับดีเอ็นเอที่ได้มาเปรียบเทียบกับ 16S rRNA
ลำดับยีนในฐานข้อมูล NCBI โดยใช้วิธีการค้นหาระเบิด
(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov /Blast.cgi) เพื่อตรวจสอบ
ญาติที่รู้จักกันที่ใกล้เคียงที่สุด ลำดับเบสที่ถูกวาง
กับ NCBI ฐานข้อมูลและการภาคยานุวัติจำนวนที่ได้รับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2.2 . phylloplane colonizing แบคทีเรีย ( PCB )สำรวจภาคสนาม ทำการศึกษาในช่วงปี 2010 และ 2011 ในต่างพื้นที่ปลูก brinjal รัฐกรณาฏกะ ( ข้อมูลไม่แสดง )ใบพืชมีสุขภาพดีจาก brinjal รวบรวมไว้ในความชื้น ( ห้องความชื้น > 70% ) และย้ายไปห้องปฏิบัติการภายใน 48 ชั่วโมงของคอลเลกชัน เทคนิคล้างใบตามมาเพื่อแยก phylloplane แบคทีเรียสายพันธุ์ ห้าใบจากแต่ละโรงงานมีการล้างด้วยน้ำเกลือ 25 มิลลิลิตร( 0.85 % ) แบคทีเรียบนผิวใบย้ายเมืองขึ้นโดยใช้แปรงฆ่าเชื้อในการซักผ้า ระงับย้ายไป50 ml หลอดไฟฟ้าที่ 6800g นาน 10 นาที เม็ด คือละลายในน้ำเกลือ 1 มิลลิลิตร และใช้สำหรับการแยกแบคทีเรียต่อไปนี้เทคนิคเจือจางอนุกรม ( ถึง 10 ( 7 ) ใน NUMB3RS( นา ) หลังจากบ่มที่อุณหภูมิ 35 ± 2 C เป็นเวลา 36 ชั่วโมงจากที่แตกต่างกันแบคทีเรียโคโลนีที่ปรากฏบนสื่อที่ถูกเลือกและบริสุทธิ์เลี้ยงในนา slants .แบคทีเรีย inocula เตรียมเพาะแบคทีเรียไอโซเลทในลุเรียแบร์ตานิ ( LB ) ซุป 24 H ในเครื่องปั่น โรตารี่( 150 รอบต่อนาที ) ที่ 35 ± 2 . เซลล์แบคทีเรียที่ถูกสารอัดเม็ด โดยที่ 6800g 10 นาที อีกซักสามครั้งกับงานกลั่นน้ำ ความเข้มข้นสุดท้ายของแบคทีเรียนี้ปรับไฟฟ้าจากที่ a610 nm .phylloplane อาณานิคมโดยทำการใช้ 25 วันเก่าbrinjal ต้นกล้า สั้น , ปลูก brinjal ต้นกล้าในกระถาง( 9 ซม. ) ที่มี ฆ่าเชื้อผสม potting ดิน : ทราย :มูลลานฟาร์ม @ 2:1:1 โดยปริมาตร ) กับต้น / กระถางขึ้นวันที่ 25 กับ 26 / 22 ห้องของ C อุณหภูมิกลางวัน / กลางคืน13 / 11 H แสง / มืดรอบที่ความชื้นสัมพัทธ์ 65 เปอร์เซ็นต์ . แสงความเข้มระดับโรงงาน 200 W / m2. แบคทีเรีย ระงับเป็นสเปรย์ หัวเชื้อที่สมบูรณ์เปิด brinjal ใบจนน้ำท่าพืชที่ถูกบ่มเป็นเวลา 14 วันและตัวอย่างใบการเก็บเกี่ยวและการใช้แบคทีเรีย การรักษาและควบคุมใบมาตัดเป็นแผ่นขนาดเส้นผ่านศูนย์กลาง 10 มม. ใช้ฆ่าเชื้อมอดเจาะไม้ก๊อก ดิสก์ถูกล้างด้วยน้ำกลั่นในการเป็นหมันแบคทีเรียถูกย้าย และคุณธรรมในการใช้แปรงที่เป็นหมัน แบคทีเรียสมาธิในการพิจารณาจากทากทะเลเทคนิคและแสดงเป็น cfu / cm2 ผิวใบบริเวณphylloplane colonizing แบคทีเรียถูกระบุถึงลักษณะการวิเคราะห์ชีวเคมีตามไปวิธีการที่ระบุไว้ในคู่มือของแบคทีเรียกลุ่มเบอร์กี้( ครีก และ โฮลท์ , 1984 ) และห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยา และคู่มือ( คาปูชิโน่ และ เชอร์แมน ปี 2014 ) การตรวจแบบบางส่วนลำดับเบส 16S rRNA ยีน และกระทำตามวิธีการมาตรฐานดีเอ็นเอลำดับเบส 16S rRNA ที่ได้มา เมื่อเทียบกับลำดับของยีนใน ncbi ฐานข้อมูลโดยใช้อัลกอริทึมการค้นหาระเบิด( http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/blast.cgi ) เพื่อหาใกล้รู้จักญาติ ฝากที่ลำดับนิวคลีโอไทด์กับฐานข้อมูล และการ ncbi เบอร์ได้