AbstractThe plant enzyme horseradis

Abstract
The plant enzyme horseradish peroxidase (HRP) is used in several important industrial and medical applications, of which especially biosensors and diagnostic kits describe an emerging field. Although there is an increasing demand for high amounts of pure enzyme preparations, HRP is still isolated from the plant as a mixture of different isoenzymes with different biochemical properties. Based on a recent next generation sequencing approach of the horseradish transcriptome, we produced 19 individual HRP isoenzymes recombinantly in the yeast Pichia pastoris. After optimizing a previously reported 2-step purification strategy for the recombinant isoenzyme HRP C1A by substituting an unfavorable size exclusion chromatography step with an anion exchange step using a monolithic column, we purified the 19 HRP isoenzymes with varying success. Subsequent basic biochemical characterization revealed differences in catalytic activity, substrate specificity and thermal stability of the purified HRP preparations. The preparations of the isoenzymes HRP A2A and HRP A2B were found to be highly interesting candidates for future applications in diagnostic kits with increased sensitivity.

Keywords
Horseradish peroxidase; Pichia pastoris; Glycosylation; Protein purification; Negative chromatography; Monolith

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทคัดย่อเอนไซม์พืชมะรุม peroxidase (HRP) ถูกนำมาใช้ในงานอุตสาหกรรมและการแพทย์ที่สำคัญหลายอย่างซึ่งโดยเฉพาะไบโอเซนเซอร์และชุดตรวจวินิจฉัยอธิบายสนามใหม่
ถึงแม้จะมีความต้องการที่เพิ่มขึ้นสำหรับจำนวนเงินที่สูงของการเตรียมเอนไซม์บริสุทธิ์ HRP ยังคงถูกแยกออกจากโรงงานเป็นส่วนผสมของ isoenzymes ที่แตกต่างกันมีคุณสมบัติที่แตกต่างกันทางชีวเคมี ขึ้นอยู่กับวิธีการจัดลำดับรุ่นต่อไปที่ผ่านมาจากพืชชนิดหนึ่งยีนที่เราผลิต 19 แต่ละ HRP isoenzymes recombinantly ในยีสต์ Pichia pastoris หลังจากที่เพิ่มประสิทธิภาพได้รายงานไปแล้ว 2 ขั้นตอนกลยุทธ์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับ isoenzyme recombinant HRP C1A โดยการแทนขั้นตอนที่โคยกเว้นขนาดที่ไม่เอื้ออำนวยกับการแลกเปลี่ยนไอออนขั้นตอนโดยใช้คอลัมน์เสาหินเราบริสุทธิ์ 19 HRP isoenzymes กับความสำเร็จที่แตกต่างกัน ลักษณะทางชีวเคมีที่เกิดขึ้นภายหลังขั้นพื้นฐานเปิดเผยความแตกต่างในการเร่งปฏิกิริยาจำเพาะพื้นผิวและเสถียรภาพทางความร้อนของการเตรียม HRP บริสุทธิ์ เตรียมของ isoenzymes HRP A2A และ HRP A2B พบว่ามีผู้สมัครที่น่าสนใจอย่างมากสำหรับการใช้งานในอนาคตในชุดตรวจวินิจฉัยที่มีความไวที่เพิ่มขึ้น. คำมะรุม peroxidase; Pichia pastoris; glycosylation; โปรตีนบริสุทธิ์; โคลบ หินใหญ่ก้อนเดียว

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เอนไซม์ horseradish peroxidase นามธรรม
พืช ( HRP ) ใช้ในอุตสาหกรรมสำคัญหลายประการและการประยุกต์ใช้ทางการแพทย์ ซึ่งโดยเฉพาะตามการอธิบายที่เกิดขึ้นใหม่และชุดสนาม แม้จะมีความต้องการที่เพิ่มขึ้นสำหรับปริมาณสูงของการเตรียมเอนไซม์บริสุทธิ์ , HRP ยังแยกจากพืชเป็นส่วนผสมของของที่แตกต่างกันด้วยคุณสมบัติทางชีวเคมีที่แตกต่างกันตามแนวทางของรุ่นถัดไปของลำดับล่าสุด มะรุม ทราน ริปโตม เราผลิต 19 บุคคล HRP ของ recombinantly ในยีสต์ pichia pastoris .หลังจากการรายงานก่อนหน้านี้ ขั้นตอนที่ 2 การใช้กลยุทธ์สำหรับความรู้สึก HRP c1a จากเสียเปรียบขนาดยกเว้นขั้นตอนกับการแลกเปลี่ยนไอออน chromatography ขั้นตอนการใช้คอลัมน์แบบเราบริสุทธิ์ชที่ 19 ของความสำเร็จ ภายหลังการพบความแตกต่างในพื้นฐานทางชีวเคมี ฤทธิ์ ,วัสดุเพาะและเสถียรภาพทางความร้อนของบริสุทธิ์ HRP การเตรียม . การเตรียมการของ HRP A2A HRP a2b และพบว่ามีผู้สมัครที่น่าสนใจอย่างมากสำหรับการใช้งานในอนาคตของชุดตรวจวินิจฉัยที่มีความไวเพิ่มขึ้น

,
. peroxidase ; pichia pastoris glycosylation โปรตีน chromatography ฟอก ; ; ; ลบ ; โมโนลิธ