Cell cultureHuman umbilical vein en

Cell culture
Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were
cultured as previously described [10, 11]. Tumor cell lines
including A549, H1299 and HCC827 were obtained from
ATCC and cultured in DMEM supplemented with 10 % fetal
bovine serum (FBS) (Invitrogen) [12]. Tumor–endothelial coculture
experiments were performed in six-well plates with
8-micron transwell inserts (BD Biosciences). Tumor cells
were seeded in the top inserts with EC monolayers co-cultured
in the bottom wells [13, 14]. MicroRNA mimics, inhibitors or
mouse full-length HIF-1a expressing plasmid were transfected
with Lipofectamine 2000 (Invitrogen). MicroRNA
mimics and inhibitors were synthesized and obtained from
GenePharma. Expression of miR-494 and HIF-1a after
transfection were shown in Supplemental Fig. 1D–E.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เพาะเลี้ยงเซลล์มีเซลล์บุผนังหลอดเลือดหลอดเลือดดำ umbilical มนุษย์ (HUVECs)อ่างที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [10, 11] บรรทัดของเซลล์เนื้องอกรวม A549, H1299 และ HCC827 ได้รับมาจากATCC และอ่างใน DMEM เสริม ด้วย 10% และทารกในครรภ์วัวซีรั่ม (FBS) (Invitrogen) [12] Coculture เนื้องอก – บุผนังหลอดเลือดดำเนินการทดลองในแผ่นดีหกด้วยtranswell 8 ไมครอนแทรก (เวลาออก BD) เซลล์เนื้องอกseeded ในแทรกด้านบนกับ EC monolayers อ่างร่วมในบ่อล่าง [13, 14] MicroRNA เลียน inhibitors หรือเมาส์จัด HIF-1a แสดง plasmid ถูก transfectedมี Lipofectamine 2000 (Invitrogen) MicroRNAเลียนแบบ inhibitors ถูกสังเคราะห์ และได้รับจากGenePharma นิพจน์ของมีร์-494 HIF-1a หลังtransfection ได้แสดงในเพิ่มเติม Fig. 1D อี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเพาะเลี้ยงเซลล์มนุษย์สะดือเส้นเลือดเซลล์บุผนังหลอดเลือด (HUVECs) มีการเพาะเลี้ยงตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้[10, 11] เซลล์เนื้องอกรวมทั้ง A549, H1299 และ HCC827 ที่ได้รับจาก ATCC และเพาะเลี้ยงใน DMEM เสริมด้วย 10% ของทารกในครรภ์ซีรั่มวัว(FBS) (Invitrogen) [12] coculture เนื้องอก endothelial ทดลองดำเนินการในแผ่นหกดีกับแทรก transwell 8 ไมครอน (BD ชีววิทยาศาสตร์) เซลล์มะเร็งเมล็ดในแทรกชั้นนำที่มี monolayers EC ร่วมเพาะเลี้ยงในบ่อด้านล่าง[13, 14] microRNA เลียนแบบสารยับยั้งหรือเมาส์ยาวเต็มรูปแบบ HIF-1a แสดงพลาสมิดที่ถูก transfected กับ Lipofectamine 2000 (Invitrogen) microRNA เลียนแบบและสารยับยั้งการสังเคราะห์และการที่ได้รับจากGenePharma การแสดงออกของ miR-494 และ HIF-1a หลังจากtransfection ที่แสดงในรูปที่เพิ่มเติม 1D-E

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์วัฒนธรรม
หลอดเลือดดำสายสะดือมนุษย์ ( กลุ่ม )
เลี้ยงตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 10 , 11 ] เนื้องอกเซลล์
รวมทั้ง a549 h1299 hcc827 , และได้รับจาก
ATCC และเพาะเลี้ยงในอาหารที่มี dmem 10% fetal bovine serum
( FBS ) ( Invitrogen ) [ 12 ] เนื้องอกเยื่อบุและคู่ชนิดชอบร้อน
ทดลองในจานหกดี
8-micron transwell แทรก ( BD BIOSCIENCES )
เนื้องอกถูก seeded ในแทรกด้านบนกับ EC monolayers Co เลี้ยง
ในบ่อล่าง [ 13 , 14 ) MIC เลียนแบบ สารยับยั้ง หรือเมาส์แบบเต็มตัว
hif-1a แสดงพลาสมิดเป็น transfected
กับ lipofectamine 2000 ( Invitrogen ) MIC
และสังเคราะห์เลียนแบบสารยับยั้งและได้รับจาก
genepharma . และการแสดงออกของ mir-494 hif-1a หลังจาก
คได้ถูกแสดงในรูปเสริม1D – E