Depending on the stage of development of the egg, either a small piece of tissue from the embryo was cut away with scissors and placed into a 2 mL Eppendorf tube or, if no tissue could be accessed, a small piece of membrane or blood vessel was cut out with scissors and placed in a 2 mL Eppendorf tube. 350 μL of tissue digest buffer, comprising of 20 mM Tris pH 8.0 (Sigma, MO, USA), 2.5 mM EDTA (Invitrogen, CA, USA), 5 mM CaCl2 (Sigma), 20 mM DTT (Thermo Fisher Scientific, MA, USA), 1% SDS (Invitrogen), and proteinase K powder (Amresco, OH, USA), was added to each tube containing the sample. All tubes were then placed on a rotating oven and digested overnight (∼12 h) at 55 °C.
ขึ้นอยู่กับระยะของการพัฒนาของไข่ ชิ้นส่วนเล็ก ๆ ของเนื้อเยื่อจากตัวอ่อนถูกตัดออก ด้วยกรรไกร และอยู่ในมล 2 หลอด Eppendorf หรือ ถ้าเนื้อเยื่อไม่สามารถเข้าถึงได้ ชิ้นส่วนเล็ก ๆ ของเยื่อหรือเส้นเลือดถูกตัดออก ด้วยกรรไกร และวางใน mL 2 Eppendorf หลอด ΜL 350 ของย่อยเนื้อเยื่อ บัฟเฟอร์ ประกอบของ 20 มม.ทริสเรทติ้ง 8.0 (ซิก MO สหรัฐอเมริกา), 2.5 mM EDTA (Invitrogen, CA, USA), 5 mM CaCl2 (ซิกมา), 20 มม. DTT (เทอร์โม Fisher วิทยาศาสตร์ MA, USA), 1% SDS (Invitrogen), และผง proteinase K (Amresco, OH สหรัฐอเมริกา), ถูกเพิ่มเข้าไปแต่ละหลอดประกอบด้วยตัวอย่าง หลอดทั้งหมดแล้ววางบนเตาหมุน และเจ่าแอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์ (∼12 h) ที่ 55 องศาเซลเซียส
การแปล กรุณารอสักครู่..

ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับขั้นตอนของการพัฒนาของไข่ทั้งชิ้นเล็ก ๆ ของเนื้อเยื่อจากตัวอ่อนที่ถูกตัดออกไปด้วยกรรไกรและวางลงใน 2 มิลลิลิตรหลอด Eppendorf หรือถ้าเนื้อเยื่อไม่สามารถเข้าถึงได้เป็นชิ้นเล็ก ๆ ของเมมเบรนหรือเส้นเลือดเป็น ตัดออกด้วยกรรไกรและวางไว้ใน 2 มิลลิลิตรหลอด Eppendorf 350 ไมโครลิตรของเนื้อเยื่อย่อยบัฟเฟอร์ประกอบด้วย 20 mM Tris พีเอช 8.0 (Sigma, MO, USA), 2.5 มิลลิ EDTA (Invitrogen, CA, USA), 5 มิลลิ CaCl2 (ซิกม่า), 20 มิลลิ DTT (Thermo Fisher Scientific, MA, สหรัฐอเมริกา), 1% SDS (Invitrogen) และโปร K ผง (AMRESCO, OH, USA) ถูกบันทึกอยู่ในหลอดแต่ละที่มีตัวอย่าง หลอดทั้งหมดถูกวางไว้ในเตาอบหมุนและย่อยในชั่วข้ามคืน (~12 ต่อชั่วโมง) ที่ 55 ° C
การแปล กรุณารอสักครู่..

ขึ้นอยู่กับขั้นตอนของการพัฒนาของไข่ ทั้งชิ้นเล็ก ๆของเนื้อเยื่อจากตัวอ่อนที่ถูกตัดด้วยกรรไกร และวางลงใน 2 ml หลอดเพนดอร์ฟ หรือ ถ้าไม่มีเนื้อเยื่อสามารถเข้าถึงชิ้นเล็ก ๆของเยื่อหรือเส้นเลือดถูกตัดออกด้วยกรรไกรและวางไว้ในเพนดอร์ฟ 2 ml หลอด 350 μ L ของบัฟเฟอร์ย่อยเนื้อเยื่อประกอบด้วย 20 มิลลิเมตร โดย pH 8.0 ( Sigma , โม , สหรัฐอเมริกา ) , 2 .5 mM EDTA ( Invitrogen , CA , USA ) , 5 มม. CaCl2 ( Sigma ) , 20 - 20 ( เทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ , MA , USA ) , 1% SDS ( Invitrogen ) และ K ( , โปรตีนผง amresco , โอ้ , USA ) , ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละหลอดบรรจุตัวอย่าง ทุกหลอดแล้ววางไว้บนเตาอบหมุนและย่อยข้ามคืน ( ∼ 12 H ) ที่ 55 องศา
การแปล กรุณารอสักครู่..
