Electrophoresis was carried out in a vertical
slab gel apparatus (Miniprotean III, Bio-Rad)
according to the tricine buffer system described by
Shagger and Von (1987) using a 16.5% polyacrylamide
slab gel containing 0.1% (w/v) SDS with a
stacking gel of 4% polyacrylamide. Samples were
pre-incubated with 4% (w/v) SDS, 12% (v/v) glycerol,
2% (v/v) -mercaptoethanol, 0.025% (w/v)
bromophenol blue, and 50 mM Tris, pH 6.8, for
about 5 min at 95 °C. Gels were run at room
temperature, and visualized by staining for 30 min
with 0.1% (w/v) Coomassie Brilliant Blue R-250,
40% methanol (v/v) with 7% (v/v) acetic acid and
destained in dilute acetic acid. The following
proteins were used as molecular mass markers:
carbonic anhydrase (30 000), trypsin inhibitor
(21 100), cytochrome (12 400) and aprotinin
(6500).
Electrophoresis ได้ดำเนินการในแนวตั้ง
เครื่องเจลแผ่น (Miniprotean III, Bio-Rad)
ตามระบบบัฟเฟอร์ tricine อธิบายโดย
Shagger ฟอน (1987) โดยใช้ polyacrylamide% 16.5
แผ่นเจลที่มี 0.1% (w / v) เอกสารข้อมูลความปลอดภัยด้วย
ซ้อนเจลอะคริเลต 4% ตัวอย่าง
ก่อนบ่มกับ 4% (w / v) SDS, 12% (v / v) กลีเซอรอล,
2% (v / v)? -mercaptoethanol, 0.025% (w / v)
Bromophenol สีฟ้าและ 50 มิลลิเมตร Tris, ค่า pH 6.8 สำหรับ
ประมาณ 5 นาทีที่ 95 ° C เจลได้ทำงานที่ห้อง
อุณหภูมิและมองเห็นโดยการย้อมสีเป็นเวลา 30 นาที
กับ 0.1% (w / v) Coomassie สดใสสีฟ้า R-250,
เมทานอล 40% (v / v) มี 7% (v / v) กรดอะซิติกและ
destained ใน เจือจางกรดอะซิติก ต่อไปนี้
โปรตีนที่ถูกนำมาใช้เป็นเครื่องหมายมวลโมเลกุล:
คาร์ anhydrase (30 000) ยับยั้ง trypsin
(21 100), ไซโตโครม (12 400) และ Aprotinin
(6500)
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)