HARDV (isolate CS75, Beatrice Hill

HARDV (isolate CS75, Beatrice Hill NT, 1975), WACV (isolate CS1056, Samford QLD, 1981) and ALMV
(isolate MRM4059, Mitchell River QLD, 1966) were obtained from the Berrimah Veterinary Laboratory,
Darwin, Northern Territory. Viruses were propagated in BSR cells (a subclone of the baby hamster kidney
BHK-21 cell line) grown in supplemented basal medium Eagle (Gibco) at 37 °C. Three to four days post
infection, at the first signs of the cytopathic effect (CPE), the infected cell culture supernatant from 4 to 6 ×
150 cm2 flasks was collected, and a crude viral pellet obtained by ultracentrifugation at 70,000 ×g for 1 h in a
Beckman 70Ti rotor. The pellet was resuspended in Buffer RLT (Qiagen) containing β-mercaptoethanol and
total RNA extracted from the crude virus pellet using the RNeasy Mini Kit (Qiagen).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

HARDV (แยก CS75 เบียทริฮิลล์ NT, 1975), WACV (แยก CS1056, Samford QLD, 1981) และ ALMV(แยก MRM4059, QLD Mitchell ริเวอร์ 1966) ได้รับจากห้องปฏิบัติการสัตวแพทย์ Berrimahดาร์วิน นอร์ทเทิร์น มีการเผยแพร่ไวรัสในเซลล์ BSR (เป็น subclone ของไตเด็กหนูแฮมสเตอร์BHK-21 เซลล์บรรทัด) ปลูกเสริมโรคปานกลางอินทรี (Gibco) ที่ 37 องศาเซลเซียส ลงวันที่ 3-4ติดเชื้อ ที่สัญญาณแรกของ cytopathic ผล (CPE), วัฒนธรรมเซลล์ติดเชื้อ supernatant จาก 4 กับ 6 ×150 cm2 นำรวบรวม และเม็ดไวรัสเป็นน้ำมันที่ได้รับ โดย ultracentrifugation ที่ 70000 ซื้อ g สำหรับ h 1 ในการBeckman 70Ti ใบพัด เม็ดถูก resuspended ใน RLT บัฟเฟอร์ (Qiagen) ประกอบด้วยβ-mercaptoethanol และอาร์เอ็นเอทั้งหมดที่สกัดจากเม็ดดิบไวรัสใช้ชุดมินิของ RNeasy (Qiagen)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

HARDV (แยก CS75, เบียทริฮิลล์ NT, 1975), WACV (แยก CS1056, Samford QLD, 1981) และ ALMV
(แยก MRM4059 มิตเชลล์แม่น้ำ QLD, 1966) ที่ได้รับจาก Berrimah สัตวแพทย์ปฏิบัติการ,
ดาร์วินเหนือดินแดน ไวรัสที่ถูกแพร่กระจายในเซลล์ BSR (subclone ของหนูแฮมสเตอร์ทารกไต
เซลล์ BHK-21) ที่ปลูกในกลางฐานเสริม Eagle (Gibco) ที่ 37 ° C สามถึงสี่วันโพสต์
ติดเชื้อที่สัญญาณแรกของผล cytopathic (CPE), ใสเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ติดเชื้อ 4-6 ×
150 cm2 ขวดถูกเก็บรวบรวมและเม็ดไวรัสน้ำมันดิบที่ได้จากการ ultracentrifugation ที่ 70,000 ×กรัมเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ใน
โรเตอร์ Beckman 70TI เม็ดถูก resuspended ในบัฟเฟอร์ RLT (Qiagen) ที่มีβ-mercaptoethanol และ
RNA รวมสกัดจากเม็ดไวรัสดิบโดยใช้ RNeasy มินิ Kit (Qiagen)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

hardv ( แยก cs75 Beatrice ฮิลล์ NT , 1975 ) wacv ( แยก cs1056 แซมเฟิร์ต , QLD , 1981 ) และ almv
( แยก mrm4059 Mitchell River , QLD , 1966 ) ที่ได้รับจาก berrimah สัตวแพทย์ห้องปฏิบัติการ
ดาร์วินเหนือดินแดน ไวรัสแพร่กระจายใน BSR เซลล์ ( subclone ของเด็กหนูแฮมสเตอร์ไต
bhk-21 ไพรที ) ปลูกเสริมแรกเริ่มนกอินทรีขนาดกลาง ( gibco ) ที่อุณหภูมิ 37 องศาสามถึงสี่วันโพสต์
การติดเชื้อ ที่สัญญาณแรกของผล cytopathic ( CPE ) , นำเซลล์ที่ติดเชื้อจาก 4 ถึง 6 ×
150 cm2 ขวดเก็บรวบรวมและเม็ดดิบไวรัสได้โดย ultracentrifugation ที่ 70000 ×กรัมเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ใน
เบคแมน 70ti ใบพัด . เม็ดอยู่ในบัฟเฟอร์ resuspended RLT ( QIAGEN และบีตา - mercaptoethanol
) ที่มีอาร์เอ็นเอทั้งหมดสกัดจากน้ำมันเม็ดโดยใช้ไวรัสชุดมินิ rneasy ( เพิ่ม )