Materials and Methods
Materials and reagents
Cell culture dishes, plates, centrifuge tubes, and other plastic ware were purchased from BD
Biosciences (Lincoln Park, NJ); Dulbecco modified Eagle medium (DMEM), Ham F-12, amphotericin
B, and gentamicin were from Invitrogen (Grand Island, NY). Fetal bovine serum
(FBS) was from Hyclone (Logan, UT). RNeasy Plus Mini RNA extraction kit from Qiagen (Valencia,
CA); Ready-To-Go-Primer First-Strand Beads were from GE Healthcare (Piscataway,
NJ); TaqMan gene expression assays and real-time PCR master mix were from Applied Biosystems
(Foster City, CA). DCFDA—Cellular Reactive Oxygen Species Detection Assay Kit, rabbit
polyclonal antibody against human malondialdehyde (MDA), 8-hydroxy-2-deoxyguanosine
(8-OHdG), 4-hydroxy-2-nonenal (HNE), aconitase-2, glutathione peroxidase-1 (GPX1), and
mouse monoclonal antibody against superoxide dismutase-1 (SOD1) were purchased from
Abcam (Cambridge, MA). Rabbit polyclonal antibody against human heme oxygenase-1
(HMOX1) and cyclooxygenase-2 (COX2) were from Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz,
CA). β-actin antibody was from BioLegend (San Diego, CA). Fluorescein Alexa-Flour 488-conjugated
secondary antibodies (donkey anti-rabbit, or goat anti-mouse IgG) were from Molecular
Probes (Eugene, OR).
วัสดุและวิธีการวัสดุและ reagentsอาหารวัฒนธรรมเซลล์ แผ่น เครื่องหมุนเหวี่ยงท่อ และอื่น ๆ เครื่องพลาสติกซื้อจาก BDเวลาออก (ลินคอล์นพาร์ค NJ); นกขนาดกลาง (DMEM), แฮม F-12, amphotericin ปรับเปลี่ยนดุลเบกโกB และ gentamicin ถูกจาก Invitrogen (เกาะแกรนด์ NY) เซรั่มวัวและทารกในครรภ์(FBS) ได้จาก Hyclone (โลแกน UT) ชุดสกัด RNeasy พลัสมินิอาร์เอ็นเอจาก Qiagen (ValenciaCA); เม็ดแรกสาระพร้อมไปไปพื้นได้จาก GE สุขภาพ (ปิสกาตาเวย์NJ); TaqMan ยีนนิพจน์ assays และผสมผสานหลัก PCR แบบเรียลไทม์ได้จาก Biosystems ใช้(เมืองฟอสเตอร์ CA) DCFDA — โทรศัพท์มือถือปฏิกิริยาออกซิเจนชนิดตรวจ Assay Kit กระต่ายแอนติบอดี polyclonal กับมนุษย์ malondialdehyde (MDA), 8-hydroxy-2-deoxyguanosine(8-OHdG), 4-hydroxy-2-nonenal (HNE), aconitase-2 กลูตาไธโอน peroxidase-1 (GPX1), และซื้อจากแอนติบอดี monoclonal เมาส์กับซูเปอร์ออกไซด์ dismutase-1 (SOD1)Abcam (เคมบริดจ์ MA) แอนติบอดี polyclonal กระต่ายกับมนุษย์ heme oxygenase-1(HMOX1) และ cyclooxygenase-2 (COX2) จากเทคโนโลยีชีวภาพซานตาครูซ (ซานตาครูซCA) Βแอกตินแอนติบอดีถูกจาก BioLegend (San Diego, CA) Fluorescein Alexa-แป้ง 488 กลวงแอนตี้รอง (ลาป้องกันกระต่าย หรือแพะป้องกันเมาส์ IgG) ได้จากโมเลกุลคลิปปากตะเข้ (Eugene, OR)
การแปล กรุณารอสักครู่..

วัสดุและวิธีการวัสดุและสารเคมีอาหารเซลล์, จาน, หลอด centrifuge และเครื่องพลาสติกอื่น ๆ ที่ซื้อมาจาก BD ชีววิทยาศาสตร์ (ลินคอล์นพาร์ค, นิวเจอร์ซีย์); Dulbecco ปรับเปลี่ยนขนาดกลางอีเกิล (DMEM) แฮม F-12, amphotericin B และ gentamicin จาก Invitrogen (แกรนด์ไอส์แลนด์นิวยอร์ก) ซีรั่มของทารกในครรภ์วัว(FBS) จาก Hyclone (โลแกน, ยูทาห์) RNeasy พลัสชุดมินิอาร์เอ็นเอสกัดจาก Qiagen (บาเลนเซีย, CA); Ready-To-Go-รองพื้นลูกปัดแรก Strand จาก GE Healthcare (พิสแคต, นิวเจอร์ซีย์); TaqMan ตรวจการแสดงออกของยีนและ real-time PCR ผสมต้นแบบมาจากแอพพลายด์(ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย) DCFDA-เซลลูลาร์รีแอกทีฟออกซิเจนสายพันธุ์การตรวจวิเคราะห์ชุดกระต่ายแอนติบอดีโพลีกับมนุษย์ Malondialdehyde (ภาคตะวันออกเฉียงเหนือ), 8 ไฮดรอกซี-2-deoxyguanosine (8-OHdG) 4 ไฮดรอกซี-2-nonenal (hne) aconitase-2, peroxidase กลูตาไธโอน -1 (GPX1) และแอนติบอดีเมาส์กับsuperoxide dismutase-1 (SOD1) ที่ซื้อมาจากAbcam (เคมบริดจ์, แมสซาชูเซต) แอนติบอดีโพลีกระต่ายกับมนุษย์ heme oxygenase-1 (HMOX1) และ cyclooxygenase-2 (COX2) จากซานตาครูซชีวภาพ (ซานตาครูซ, CA) แอนติบอดีเบต้าโปรตีนจาก BioLegend (ซานดิเอโก) Fluorescein Alexa-Flour 488-ผันแอนติบอดีรอง(ลาต่อต้านกระต่ายหรือแพะต่อต้านเมาส์ IgG) มาจากโมเลกุลพร็อบ(Eugene, OR)
การแปล กรุณารอสักครู่..

วัสดุและวิธีการวัสดุและสารเคมี
เซลล์วัฒนธรรมอาหาร , จาน , ขายขาด และสินค้าพลาสติกอื่นๆ ซื้อมาจาก BD
BIOSCIENCES ( Lincoln Park , NJ ) ; ดัลเบโค่แก้ไขนกอินทรีขนาดกลาง ( dmem ) f-12 แฮม , ยา :
b และเจนตามัยซินจาก Invitrogen ( เกาะแกรนด์ , นิวยอร์ก ) แม่วัวเซรั่ม
( FBS ) คือจาก hyclone ( โลแกน , ยูทาห์ )rneasy พลัสมินิ RNA แยกชุดจาก QIAGEN ( วาเลนเซีย
CA ) ; พร้อมที่จะไปรองพื้นก่อนเกลียวลูกปัดจาก GE Healthcare ( พอร์ทแลนด์ ,
NJ ) ; taqman การแสดงออกของยีนและ PCR แบบเรียลไทม์ได้ ต้นแบบผสมเลือดจาก Applied Biosystems
( Foster City ( CA ) dcfda ปฏิกิริยาชนิดออกซิเจนในเซลล์การใช้แอนติบอดีต่อชุดกระต่าย
O มนุษย์ ( 2 )8-hydroxy-2-deoxyguanosine
( 8-ohdg ) 4-hydroxy-2-nonenal ( hne ) aconitase-2 กลูตาไธโอน peroxidase-1 ( gpx1 ) เมาส์ , โมโนโคลนอลแอนติบอดีและสารท dismutase-1
( sod1 ) ซื้อมาจาก
ABCAM ( Cambridge , MA ) กระต่ายใช้แอนติบอดีต่อท่านมนุษย์ oxygenase-1
( hmox1 ) และ cyclooxygenase-2 ( cox2 ) จาก ซานตา ครูซ ( Santa Cruz ,
( CA )บีตา - actin แอนติบอดีจาก biolegend ( San Diego , CA ) ี่ Alexa แป้ง 488 conjugated
) มัธยม ( ลาป้องกันกระต่าย หรือ แพะ IgG anti mouse ) จากโมเลกุล
โพรบ ( ยูจีน , หรือ )
การแปล กรุณารอสักครู่..
