GIF binds GM-CSF and IL-2 via mutua

GIF binds GM-CSF and IL-2 via mutually exclusive epitopes
Previous studies demonstrated that GIF inhibits the biological activities of both ovine GM-CSF and ovine IL-2 in soft bone marrow cell colony and T-cell proliferation assays, respectively20. To characterize the interaction between GIF and its two target cytokines kinetically and in terms of binding affinity we employed bio-layer interferometry (BLI) using biotinylated GIF immobilized onto streptavidin-coated BLI sensors. Our measurements reveal that GIF binds GM-CSF and IL-2 with high affinities yet with quite distinct kinetic binding profiles (Fig. 5a,b). On one hand, binding of GM-CSF to GIF is characterized by rather slow association kinetics and very slow dissociation kinetics leading to a KD=27 nM, whereas IL-2 binds to GIF with ∼60-fold higher affinity (KD=0.47 nM) that can be recapitulated by fast association kinetics and moderately slow dissociation kinetics (Fig. 5a,b).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

GIF ผูก GM CSF และ IL-2 ผ่าน epitopes ร่วมกันการศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่า GIF ยับยั้งกิจกรรมทางชีวภาพของน้ำไขสันหลัง GM ที่แกะและแกะ IL-2 ในอาณานิคมเซลล์กระดูกอ่อน และเซลล์ T แพร่กระจาย assays, respectively20 กับลักษณะการโต้ตอบระหว่าง GIF และไซโตไคน์สองเป้าหมาย สร้าง และในแง่ ของความสัมพันธ์ผูกพันเราจ้างงานใช้ biotinylated GIF ตรึงลงบนเซ็นเซอร์บลิบเคลือบ streptavidin interferometry ไบเลเยอร์ (ลิ) การวัดของเราเปิดเผยว่า GIF ผูก GM CSF และ IL-2 กับ affinities สูง ยัง มีการผูก kinetic แตกโปรไฟล์ (รูป 5a, b) หนึ่งในมือ ผูกของ CSF GM ถึง GIF เป็นลักษณะสมาคมค่อนข้างช้าจลนพลศาสตร์และจลนพลศาสตร์ dissociation ช้ามากไป KD = 27 nM ขณะ IL-2 ผูกกับ GIF มีความสัมพันธ์สูงพับ ∼60 (KD = 0.47 nM) ที่สามารถ recapitulated โดยสมาคมรวดเร็วจลนพลศาสตร์ และค่อนข้างช้า dissociation จลนพลศาสตร์ (รูป 5a, b)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

GIF ผูก GM-CSF และ IL-2 ผ่าน epitopes พิเศษร่วมกัน
ศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่า GIF ยับยั้งฤทธิ์ทางชีวภาพของทั้งสองแกะ GM-CSF และแกะ IL-2 ในกระดูกอ่อนเซลล์ไขกระดูกและการขยายอาณานิคมของ T-cell ตรวจ, respectively20 ลักษณะการทำงานร่วมกันระหว่างสอง GIF และ cytokines เป้าหมาย kinetically และในแง่ของความใกล้ชิดผูกพันเราลูกจ้างชีวภาพชั้นอินเตอร์เฟอ (BLI) โดยใช้ GIF biotinylated ตรึงบนเซ็นเซอร์ BLI สเตเคลือบ การวัดของเราแสดงให้เห็นว่า GIF ผูก GM-CSF และ IL-2 กับความพอใจสูงยังมีที่แตกต่างกันค่อนข้างโปรไฟล์ผูกพันเกี่ยวกับการเคลื่อนไหว (รูป. 5A b) หนึ่งในมือที่มีผลผูกพันของ GM-CSF ถึง GIF เป็นลักษณะจลนพลศาสตร์สมาคมค่อนข้างช้าและจลนพลศาสตร์การแยกตัวออกช้ามากนำไปสู่การ KD = 27 นาโนเมตรในขณะที่ IL-2 ผูกกับ GIF กับ ~60 เท่าความสัมพันธ์ที่สูงขึ้น (KD = 0.47 นาโนเมตร ) ที่สามารถ recapitulated โดยจลนพลศาสตร์สมาคมรวดเร็วและจลนพลศาสตร์การแยกตัวออกช้าปานกลาง (รูป. 5A b)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลก็ gm-csf IL-2 ผู้ป่วยพิเศษร่วมกันและผ่านทางการศึกษาก่อนหน้านี้พบว่า ผลการยับยั้งฤทธิ์ทางชีวภาพของทั้ง ovine gm-csf ovine IL-2 และนุ่มในเซลล์ไขกระดูกจากอาณานิคมและการใช้ respectively20 , . เพื่อวิเคราะห์ปฏิสัมพันธ์ระหว่างผลและสองเป้าหมายการศึกษาจลนศาสตร์ และในแง่ของการผูกความสัมพันธ์เราใช้ไบโอชั้นอินเตอร์เฟอโรเมทรี ( BLI ) โดยใช้ไลผลตรึงบน streptavidin เคลือบ BLI เซ็นเซอร์ วัดของเรา เปิดเผยว่า ผลก็ gm-csf IL-2 กับ affinities สูงและยังค่อนข้างแตกต่างจากการจับโปรไฟล์ ( รูปที่ 43 , B ) ในมือข้างหนึ่งผูก gm-csf เพื่อ GIF เป็นลักษณะแบบค่อนข้างช้าและช้ามากแบบสมาคมการสู่ Kd = 27   nm ส่วน 2 ผูกเพื่อ GIF กับ∼ 60 เท่าสูงกว่า 4% ( Kd = 0.47   nm ) ที่สามารถ recapitulated โดยจลนพลศาสตร์รวดเร็วและสมาคมช้าพอสมควร ( รูปที่ 43 การจลนศาสตร์ , B )