From September 2000 to August 2004 all children born in Scania were offered testing for genetic risk of T1D at birth in the DiPiS project [Diabetes Prediction in Scania] with the aim of de- termining genetic as well as environmental risk factors before and after pregnancy that may trigger T1D. A total of 35,658 out of
48,058 children born during that period were HLA-typed in the DiPiS project Step 1. HLA-genotyping was performed on dried blood spots described in more detail in (Larsson et al., 2004). Filter samples (3 mm in diameter) of DBS were punched into 96-well PCR plates and transferred to DELFIA streptavidin-coated micro- titration plates (Perkin Elmer Life Sciences, Boston, MA, USA) and diluted with DELFIA hybridisation buffer. After incubation and denaturation the single-stranded DNA was hybridised with the following probes (Perkin Elmer Life Sciences): the first set contains Eu-DQB1n0602/3, Sm-DQB1n0603/4 and the second one contains Eu-DQB1n0302, Sm-DQB1n0301 and Tb-DQB1n02. The samples positive for DQB1n02 were further analysed for DQA1n0201 and
05 alleles to separate DR3 from subjects with DR7. HLA-DQA1 typing used Sm-DQA1n05 and Tb-DQA1n0201 probes. After washing and addition of DELFIA enhancement solution, the Eu and Sm fluorescence was counted in a Victor2 MultiLabel Counter (Perkin Elmer Life Sciences). The Tb signal-to-noise ratio was cal- culated using MultiCalc (Perkin Elmer Life Sciences).
From September 2000 to August 2004 all children born in Scania were offered testing for genetic risk of T1D at birth in the DiPiS project [Diabetes Prediction in Scania] with the aim of de- termining genetic as well as environmental risk factors before and after pregnancy that may trigger T1D. A total of 35,658 out of48,058 children born during that period were HLA-typed in the DiPiS project Step 1. HLA-genotyping was performed on dried blood spots described in more detail in (Larsson et al., 2004). Filter samples (3 mm in diameter) of DBS were punched into 96-well PCR plates and transferred to DELFIA streptavidin-coated micro- titration plates (Perkin Elmer Life Sciences, Boston, MA, USA) and diluted with DELFIA hybridisation buffer. After incubation and denaturation the single-stranded DNA was hybridised with the following probes (Perkin Elmer Life Sciences): the first set contains Eu-DQB1n0602/3, Sm-DQB1n0603/4 and the second one contains Eu-DQB1n0302, Sm-DQB1n0301 and Tb-DQB1n02. The samples positive for DQB1n02 were further analysed for DQA1n0201 and05 alleles to separate DR3 from subjects with DR7. HLA-DQA1 typing used Sm-DQA1n05 and Tb-DQA1n0201 probes. After washing and addition of DELFIA enhancement solution, the Eu and Sm fluorescence was counted in a Victor2 MultiLabel Counter (Perkin Elmer Life Sciences). The Tb signal-to-noise ratio was cal- culated using MultiCalc (Perkin Elmer Life Sciences).
การแปล กรุณารอสักครู่..
ตั้งแต่เดือนกันยายน 2000 ถึงสิงหาคม 2004 เด็กทุกคนที่เกิดใน Scania ถูกนำเสนอสำหรับการทดสอบความเสี่ยงทางพันธุกรรมของ T1D ที่เกิดในโครงการ DiPiS [ทำนายโรคเบาหวานใน Scania] โดยมีวัตถุประสงค์ของ de- termining ทางพันธุกรรมเช่นเดียวกับปัจจัยความเสี่ยงด้านสิ่งแวดล้อมก่อนและหลังการตั้งครรภ์ว่า อาจก่อให้เกิด T1D รวมของ 35,658 จาก
48,058 เด็กที่เกิดในช่วงระยะเวลาที่มี HLA-พิมพ์ในโครงการ DiPiS ขั้นตอนที่ 1 HLA-genotyping ได้ดำเนินการในจุดเลือดแห้งอธิบายในรายละเอียดใน (ลาร์สสัน et al., 2004) ตัวอย่างกรอง (3 มม) ดีบีเอสได้รับการเจาะเข้าไปในแผ่น 96 หลุม PCR และโอนไปยัง Delfia streptavidin เคลือบแผ่นไมโครไตเตรท (Perkin Elmer วิทยาศาสตร์เพื่อชีวิต, บอสตัน, สหรัฐอเมริกา) และเจือจางด้วยบัฟเฟอร์ hybridisation Delfia หลังจากการบ่มและ denaturation ดีเอ็นเอเดียวควั่นถูก hybridised กับยานสำรวจดังต่อไปนี้ (Perkin Elmer Life Sciences): ชุดสายแรกมี Eu-DQB1n0602 / 3, Sm-DQB1n0603 / 4 และเป็นคนที่สองมี Eu-DQB1n0302, Sm-DQB1n0301 และ TB-DQB1n02 ตัวอย่างที่ดีสำหรับ DQB1n02 วิเคราะห์ต่อไปสำหรับ DQA1n0201 และ
05 อัลลีลที่จะแยก DR3 จากวิชาที่มี DR7 HLA-DQA1 พิมพ์ใช้ Sm-DQA1n05 และฟิวส์ TB-DQA1n0201 หลังจากล้างและนอกเหนือจากการแก้ปัญหาการเพิ่มประสิทธิภาพของ Delfia, สหภาพยุโรปและเอสเอ็มชั้น uorescence ถูกนับใน Victor2 MultiLabel เคาน์เตอร์ (Perkin Elmer Life Sciences) อัตราส่วน Tb สัญญาณต่อเสียงรบกวนเป็น cal- culated ใช้ MultiCalc (Perkin Elmer Life Sciences)
การแปล กรุณารอสักครู่..
ระหว่างเดือนกันยายน 2543 ถึง สิงหาคม 2547 เด็กทุกคนเกิดใน Scania ได้รับการทดสอบความเสี่ยงทางพันธุกรรมของ t1d ที่เกิดใน dipis โครงการเบาหวานในการทำนาย Scania ] ที่มีจุดมุ่งหมายของการ de - termining พันธุกรรมเป็นปัจจัยเสี่ยงทางสิ่งแวดล้อม ก่อนและหลังการตั้งครรภ์ที่อาจเรียก t1d รวม 35658 ออกจาก
48058 เด็กเกิดในช่วงระยะเวลาที่ hla พิมพ์ลงในโครงการ dipis ขั้นตอนที่ 1 เขตการตมีการอธิบายในรายละเอียดเพิ่มเติมในจุดเลือดแห้ง ( ลาร์สสัน et al . , 2004 ) ตัวอย่างกรอง ( 3 มม. ) ของ DBS ถูกต่อยเป็น 96 ดี PCR แผ่นและย้ายไป delfia streptavidin เคลือบแผ่น ( เพอร์กินเอลเมอร์ไมโคร - การไทเทรต วิทยาศาสตร์เพื่อชีวิต , Boston , MA ,สหรัฐอเมริกา ) และเจือจางด้วย delfia ไฮบริไดเซชันบัฟเฟอร์ หลังจากบ่มแล้ว ( เดี่ยวเกลียวดีเอ็นเอ hybridised กับ probes ต่อไปนี้ ( เพอร์กินเอลเมอร์ชีวิตวิทยาศาสตร์ ) : จึงตัดสินใจเดินทางประกอบด้วย eu-dqb1n0602 / 3 sm-dqb1n0603 / 4 และตัวที่สองมี eu-dqb1n0302 sm-dqb1n0301 tb-dqb1n02 , และ . ตัวอย่างที่ดีสำหรับ dqb1n02 ได้วิเคราะห์และ dqa1n0201
สำหรับ05 พบแยก dr3 จากวิชาที่มี dr7 . คนพิมพ์และใช้ sm-dqa1n05 tb-dqa1n0201 เครื่องมือตรวจสอบ หลังจากล้างและการเพิ่มประสิทธิภาพ โซลูชั่น delfia , สหภาพยุโรปและ SM fl uorescence ถูกนับใน victor2 multilabel เคาน์เตอร์ ( เพอร์กินเอลเมอร์ชีวิตวิทยาศาสตร์ ) ผลการทดสอบสัญญาณโดยแคล - culated multicalc ( เพอร์กินเอลเมอร์ โดยใช้วิทยาศาสตร์
ชีวิต )
การแปล กรุณารอสักครู่..