1. Ant collection & separation from

1. Ant collection & separation from nest soil
First, locate a fire ant nest in the field and shovel the upper portion of the mound into a bucket that was rimmed with Teflon paint. Following the methods described in Banks et al. (1981), separate the ants from the nest earth by slowly flooding the bucket with water (one drop every w2 seconds). This takes several hours thus the extraction so- lution can be prepared in the mean time (below). Once completely flooded, the ants form a raft at the surface of the water (Banks et al., 1981).
2. Preparing the extraction solution
Obtain a clean glass recipient of appropriate size (e.g., 500 mL, depending on the amount of obtained ants). We recommend using a wide-mouth recipient (e.g., beaker or glass tumbler) rather than a narrow-mouth recipient (e.g., Erlenmeyer) because it is easier to put the ants inside in a single move. Add into the glass recipient a small quantity (ca. 1 mL per gram of ant) of distilled water or preferred buffer solution and a larger amount (ca. 5 mL per gram of ant) of a strong apolar solvent such as hexane (hexane was preferred because it is less volatile than ether or chloro- form). The extraction mixture should clearly separate into two phases, and the volume of organic solvent should be enough to completely immerse the ants.
3. Venom extraction
Wearing protective rubber gloves, transfer the raft of floating ants into the extraction solution. Alternatively a cleaner extract can be obtained if the ants are first transferred into another recipient for several hours during which they dry and clean themselves. Transferring the ants requires utmost care, because accidents can result in escaped ants, stings and solvent spillage. When the ants enter the organic solvent, they instinctively discharge their venom while sinking – perhaps because of their aggressive nature – and rapidly die. These two phases are easily sep- arated into individual tubes using pipettes or a separatory funnel (mind to use glass tubes for organic solvent). The tubes can be frozen at 20 C for long-term storage. The upper, organic phase contains venom alkaloids and cutic- ular hydrocarbons. Venom alkaloids can be separated from the cuticular hydrocarbons by washing this organic phase with additional hexane through a silica column and then eluting the alkaloids with acetone (further described in Chen and Fadamiro 2009). The lower, aqueous phase con- tains water-soluble proteins. These proteins can be extracted by either precipitation, or lyophilizing this phase and resuspending it in a solution of preference. A video was produced illustrating the extraction procedure http:// youtu.be/dWo-4uxpZK4; all steps are summarized in Fig. 1
Supplementary video related to this article can be found
at http://dx.doi.org/10.1016/j.toxicon.2012.12.009.
We performed the described extraction procedures on whole nests of S. invicta collected on the campus of the Federal University of Rio de Janeiro. Species identification followed Pitts et al. (2005) using the following diagnostic characters: absence of post-petiolar process, complete mandibular costulae, presence of a frontal medial streak, well developed median clypeal tooth, and males being distinctly black. Voucher specimens are deposited in the Adolph Hempel Entomological Collection of Instituto Bio- lógico de Sao Paulo, SP, Brazil. Hexane was purchased from Merck. Protein quantification was made by the method of Bradford (1976), using bovine serum albumin as standard. The extracted venom alkaloids were air-dried and weighed using a digital precision scale (Bioprecisa FA – 2104N TDS Instrumental Tecnológico).
We estimated the number ants used based on their total wet weight (each fire ant weights on average 0.8 mg). We thus deduced that each ant yields approximately 10 mg of alkaloids and 50–100 ng of protein.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

1. มดเรียกเก็บและแยกจากดินรังครั้งแรก ค้นหารังมดไฟในฟิลด์ และ shovel ส่วนบนของ mound ที่เป็นกลุ่มที่ถูก rimmed ด้วยเทฟลอนสี ตามวิธีการที่อธิบายในธนาคารและ al. (1981), แยกมดจากรังดินช้าน้ำท่วมถังน้ำ (หนึ่งหล่นทุกวินาที w2) นี้ใช้เวลาหลายชั่วโมงจึง สามารถเตรียมการสกัดเพื่อ-lution ในเวลาเฉลี่ย (ด้านล่าง) เมื่อน้ำท่วมทั้งหมด มดในรูปแบบแพที่พื้นผิวของน้ำ (ธนาคาร et al., 1981)2. เตรียมการแก้ปัญหาแยกรับรับทำความสะอาดกระจกขนาดที่เหมาะสม (เช่น 500 mL ขึ้นอยู่กับจำนวนของมดได้รับ) เราแนะนำให้ใช้ผู้รับทั้งปาก (เช่น บีกเกอร์หรือแก้วจอก) แทนที่จะรับปากแคบ (เช่น Erlenmeyer) เนื่องจากง่ายต่อการใส่มดภายในในการย้ายที่เดียว ใส่ลงไปรับแก้วปริมาณ (ca. 1 มล.ต่อกรัมของมด) น้ำกลั่น หรือบัฟเฟอร์ที่ต้องการโซลูชัน และจำนวนมาก (ca. 5 มล.ต่อกรัมของมด) ของตัวทำละลาย apolar แข็งแรงเช่นเฮกเซน (เฮกเซนถูกต้องเนื่องจากมีการระเหยน้อยกว่าอีเทอร์หรือ chloro ฟอร์ม) ส่วนผสมสกัดควรชัดเจนแยกเป็น 2 ขั้นตอน และปริมาณของตัวทำละลายอินทรีย์ควรจุ่มทั้งมดเพียงพอ3. พิษสกัดสวมถุงมือยางป้องกัน โอนย้ายแพของลอยมดเป็นโซลูชันสกัด อีกวิธีหนึ่งคือ แยกทำความสะอาดได้ถ้ามดมีก่อนโอนย้ายไปยังผู้รับอีกหลายชั่วโมงซึ่งจะแห้ง และทำความสะอาดตัวเอง มดถ่ายโอนต้องดูแลมากที่สุด เพราะอุบัติเหตุอาจทำให้มดหลบหนี ไร้ และมีตัวทำละลาย เมื่อมดการป้อนตัวทำละลายอินทรีย์ พวกเขา instinctively ถ่ายพิษของพวกเขาขณะจม – อาจจะเนื่องจากธรรมชาติของพวกเขาก้าวร้าว – และตายอย่างรวดเร็ว ระยะที่สองเหล่านี้ได้ง่าย ๆ arated กันยายนในแต่ละท่อโดยใช้ pipettes หรือกรวย separatory (จิตใจจะใช้หลอดแก้วสำหรับตัวทำละลายอินทรีย์) หลอดสามารถแช่แข็งที่ 20 C สำหรับการเก็บระยะยาว ระยะบน อินทรีย์ประกอบด้วยพิษ alkaloids และไฮโดรคาร์บอน cutic ular สามารถแยกจากไฮโดรคาร์บอน cuticular พิษ alkaloids ซักระยะนี้อินทรีย์ ด้วยเฮกเซนเพิ่มเติมผ่านคอลัมน์ซิแล้ว eluting alkaloids ที่ มีอะซีโตน (เพิ่มเติมอธิบายในเฉินและ Fadamiro 2009) ระยะล่าง อควีคอน tains ที่ละลายในโปรตีนที่ โปรตีนเหล่านี้สามารถถูกแยก ทางทั้ง ฝน หรือ lyophilizing ระยะนี้ resuspending ในโซลูชันของชอบ มีผลิตวิดีโอแสดงการสกัดขั้นตอน http:// youtu.be/dWo-4uxpZK4 ขั้นตอนทั้งหมดจะสรุปใน Fig. 1สามารถพบวิดีโอส่งเสริมการขายที่เกี่ยวข้องกับบทความนี้ที่ http://dx.doi.org/10.1016/j.toxicon.2012.12.009เราดำเนินการขั้นตอนการแยกอธิบายบนรังทั้งของ S. invicta รวบรวมในมหาวิทยาลัยของสหพันธ์มหาวิทยาลัยของริโอเดอจาเนโร ระบุชนิดตาม Pitts et al. (2005) โดยใช้อักขระวินิจฉัยต่อไปนี้: การขาดงานของกระบวนการ petiolar หลัง costulae สมบูรณ์ข้อต่อขากรรไกร ของอับด้านใกล้กลางหน้าผาก พัฒนาดีฟัน clypeal มัธยฐาน และชายที่เป็นสีดำอย่างเห็นได้ชัด ฝากไว้เป็นตัวอย่างสำคัญใน Adolph Hempel Entomological คอลเลกชันของ Instituto ไบ-lógico เดอเซาเปาลู SP บราซิล เฮกเซนที่ซื้อจากบริษัทเมอร์ค ทำโปรตีนนับ โดยแบรดฟอร์ด (1976), วิธีการใช้วัว serum albumin เป็นมาตรฐาน Alkaloids พิษแยกได้ air-dried และชั่งน้ำหนักโดยใช้เครื่องชั่งดิจิตอลความแม่นยำ (Bioprecisa FA – 2104N TDS บรรเลง Tecnológico)เราประเมินมดหมายเลขที่ใช้ตามน้ำหนักเปียกของพวกเขาทั้งหมด (มดไฟแต่ละน้ำหนักเฉลี่ย 0.8 มิลลิกรัม) เราจึง deduced ที่มดแต่ละทำให้ประมาณ 10 มิลลิกรัมของ alkaloids และ ng 50 – 100 ของโปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

1.
คอลเลกชันมดและแยกจากดินรังแรกค้นหารังมดไฟในสนามและพลั่วส่วนบนของเนินดินลงในถังที่ขอบด้วยสีเทฟลอน ตามวิธีการที่อธิบายไว้ในธนาคาร et al, (1981) แยกมดจากโลกรังโดยน้ำท่วมช้าถังที่มีน้ำ (หนึ่งหยดทุกวินาที w2) นี้จะใช้เวลาหลายชั่วโมงจึง lution สกัดทีเราจะต้องเตรียมในเวลาเฉลี่ย (ด้านล่าง) เมื่อถูกน้ำท่วมอย่างสมบูรณ์ในรูปแบบแพมดที่พื้นผิวของน้ำที่ (ธนาคาร et al., 1981).
2 การเตรียมการแก้ปัญหาการสกัดขอรับผู้รับแก้วสะอาดขนาดที่เหมาะสม (เช่น 500 มิลลิลิตรขึ้นอยู่กับปริมาณของมดที่ได้รับ)
เราขอแนะนำให้ใช้ผู้รับกว้างปาก (เช่นถ้วยแก้วหรือแก้วน้ำแก้ว) มากกว่าที่จะเป็นผู้รับแคบปาก (เช่น Erlenmeyer) เพราะมันเป็นเรื่องง่ายที่จะนำมดภายในในการย้ายเดียว เพิ่มลงในผู้รับแก้วปริมาณน้อย (แคลิฟอร์เนีย 1 มิลลิลิตรต่อกรัมของมด) น้ำกลั่นหรือสารละลายบัฟเฟอร์ที่ต้องการและจำนวนเงินที่มีขนาดใหญ่ (แคลิฟอร์เนีย 5 มิลลิลิตรต่อกรัมของมด) ของตัวทำละลาย apolar ที่แข็งแกร่งเช่นเฮกเซน (เฮกเซนเป็น ต้องการเพราะมันเป็นสิ่งที่ผันผวนน้อยกว่ารูปแบบอีเทอร์หรือ chloro-) ส่วนผสมที่สกัดชัดเจนควรแยกออกเป็นสองขั้นตอนและปริมาณของตัวทำละลายอินทรีย์ควรจะสมบูรณ์พอที่จะแช่มด.
3
สกัดพิษสวมถุงมือยางป้องกันการถ่ายโอนแพมดลอยลงในสารละลายสกัด อีกวิธีหนึ่งคือสารสกัดทำความสะอาดสามารถรับได้ถ้ามดจะถูกโอนครั้งแรกในผู้รับอื่นเป็นเวลาหลายชั่วโมงในระหว่างที่พวกเขาแห้งและทำความสะอาดตัวเอง การถ่ายโอนมดต้องใช้ความระมัดระวังสูงสุดเนื่องจากอุบัติเหตุจะส่งผลให้มดหนีเหล็กและการรั่วไหลของตัวทำละลาย เมื่อมดใส่อินทรีย์ตัวทำละลายที่พวกเขาปล่อยพิษสัญชาตญาณของพวกเขาในขณะที่จม - บางทีอาจเป็นเพราะลักษณะเชิงรุกของพวกเขา - อย่างรวดเร็วและตาย ทั้งสองขั้นตอนจะได้อย่างง่ายดาย ก.ย. arated เข้าไปในท่อบุคคลที่ใช้ปิเปตหรือช่องทาง separatory (ใจที่จะใช้หลอดแก้วตัวทำละลายอินทรีย์) หลอดสามารถแช่แข็งที่? 20? C สำหรับการจัดเก็บระยะยาว บนเฟสอินทรีย์มีอัลคาลอยพิษและสารไฮโดรคาร์บอน ular cutic- อัลคาลอยพิษสามารถแยกจากไฮโดรคาร์บอน cuticular โดยการล้างนี้เฟสอินทรีย์ด้วยเฮกเซนเพิ่มเติมผ่านคอลัมน์ซิลิกาแล้ว eluting ลคาลอยด์ที่มีอะซีโตน (อธิบายต่อไปใน Chen และ Fadamiro 2009) ต่ำกว่าเฟสน้ำ tains ทำาโปรตีนที่ละลายน้ำได้ โปรตีนเหล่านี้สามารถสกัดโดยการตกตะกอนอย่างใดอย่างหนึ่งหรือ lyophilizing ระยะนี้และ resuspending มันในการแก้ปัญหาของการตั้งค่า วิดีโอที่ถูกผลิตที่แสดงขั้นตอนการสกัดที่ http: // youtu.be/dWo-4uxpZK4; ทุกขั้นตอนมีรายละเอียดในรูป 1
วิดีโอเพิ่มเติมที่เกี่ยวข้องกับบทความนี้สามารถพบได้ที่ http://dx.doi.org/10.1016/j.toxicon.2012.12.009. เราดำเนินการขั้นตอนการสกัดที่อธิบายในรังทั้งหมดของเอส Invicta รวบรวมไว้ในวิทยาเขตของ มหาวิทยาลัยสหพันธ์ Rio de Janeiro การระบุสายพันธุ์ตามพิตส์ et al, (2005) โดยใช้ตัวอักษรในการวินิจฉัยต่อไปนี้: กรณีที่ไม่มีขั้นตอนการโพสต์ petiolar, ขากรรไกรล่าง costulae สมบูรณ์การปรากฏตัวของแนวตรงกลางหน้าผากพัฒนาดีฟันเฉลี่ย clypeal และเพศเป็นสีดำอย่างเห็นได้ชัด ตัวอย่างคูปองจะถูกฝากไว้ใน Adolph เพิลกีฏวิทยาการเก็บรวบรวม Instituto Bio- LOGICO เดเซาเปาลู, SP, ประเทศบราซิล เฮกเซนที่ซื้อมาจากเมอร์ ปริมาณโปรตีนที่ถูกสร้างขึ้นโดยวิธีการของแบรดฟอนี้ (1976) โดยใช้ซีรั่มอัลบูมิวัวเป็นมาตรฐาน ลคาลอยด์ที่สกัดพิษมีอากาศแห้งและชั่งน้ำหนักโดยใช้ระดับความแม่นยำแบบดิจิตอล (เอฟเอ Bioprecisa - 2104N TDS เครื่องมือTecnológico). เราคาดมดจำนวนที่ใช้ขึ้นอยู่กับน้ำหนักเปียกของพวกเขารวม (น้ำหนักแต่ละมดไฟโดยเฉลี่ย 0.8 มก.) เราจึงอนุมานได้ว่าแต่ละอัตราผลตอบแทนมดประมาณ 10 มิลลิกรัมลคาลอยด์และ 50-100 นาโนกรัมของโปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

1 . คอลเลกชัน&มดแยกจากรังดิน
ครั้งแรก หาไฟรังมดในสนามและพลั่วส่วนบนของเนินเข้าไปในถังที่ถูกม่านด้วยเทฟลอนสี ตามวิธีการที่อธิบายไว้ในธนาคาร et al . ( 1981 ) , แยกมดรังโลกโดยค่อยๆท่วมถังด้วยน้ำ ( หยดทุก W2 seconds )นี้ใช้เวลาหลายชั่วโมงจึงสกัด - lution สามารถเตรียมในเวลาเฉลี่ย ( ด้านล่าง ) เมื่อถูกน้ำท่วม , มดรูปแบบแพที่พื้นผิวของน้ำ ( ธนาคาร et al . , 1981 )
2 การเตรียมการสกัดสารละลาย
ขอรับแก้วที่สะอาดได้รับขนาดที่เหมาะสม ( เช่น 500 มิลลิลิตร ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับปริมาณของ ( มด ) เราแนะนำให้ใช้เป็นผู้รับปากกว้าง ( เช่นบีกเกอร์หรือจอกแก้ว ) มากกว่าเป็นผู้รับปากแคบ ( เช่น เออร์เลนเมเยอร์ ) เพราะมันเป็นเรื่องง่ายที่จะใส่มดภายในในการย้ายเดียว เพิ่มลงในแก้ว รับปริมาณน้อย ( ประมาณ 1 มิลลิลิตรต่อกรัมของมด ) ของน้ำกลั่นหรือสารละลายบัฟเฟอร์ที่ต้องการและจำนวนมาก ( CA5 มิลลิลิตร / กรัมของมด ) แข็งแรง apolar ตัวทำละลายเช่นเฮกเซน ( เฮกเซนเป็นที่ต้องการ เพราะมันระเหยน้อยกว่าอีเทอร์หรือคลอโร - แบบฟอร์ม ) ส่วนผสมสกัดชัดเจนควรแยกเป็นสองส่วน และปริมาตรของตัวทำละลายอินทรีย์น่าจะสมบูรณ์พอที่จะแช่มด .
3 พิษสกัด
ใส่ถุงมือยางป้องกันโอนแพของมดลอยลงในสารละลายสกัด หรือแยกทำความสะอาดได้หากมดก่อนโอนเข้าอีกผู้รับหลายชั่วโมงในระหว่างที่พวกเขาแห้งและทำความสะอาดตัวเอง การถ่ายโอนมดต้องดูแลอย่างเต็มที่ เพราะอุบัติเหตุอาจส่งผลให้มดหนี , stings และตัวทำละลายการรั่วไหล เมื่อมดระบุตัวทำละลายอินทรีย์พวกเขา instinctively ปล่อยพิษของพวกเขาในขณะที่จม ( บางทีอาจเป็นเพราะธรรมชาติของพวกเขาและก้าวร้าวอย่างรวดเร็วและตาย เหล่านี้สองขั้นตอนง่าย ก.ย. - arated เข้าไปในท่อหรือปล่องใช้ปิเปตแต่ละตัว ( จะใช้หลอดแก้วสำหรับตัวทำละลายอินทรีย์ ) หลอดสามารถแช่แข็งที่  20  C สำหรับการจัดเก็บระยะยาว บนอินทรีย์ระยะประกอบด้วยอัลคาลอยด์พิษและ cutic - ular ไฮโดรคาร์บอน . อัลคาลอยด์พิษสามารถแยกออกจากลำตัวไฮโดรคาร์บอนซักขั้นตอนนี้อินทรีย์เฮกเซนเพิ่มเติมผ่านคอลัมน์ซิลิกาและ hexane ที่อัลคาลอยด์ด้วยอะซีโตน ( อธิบายเพิ่มเติมใน เฉิน และ fadamiro 2009 ) ลดลง , เฟสน้ำคอน - tains ละลายโปรตีน