2.2. Blood samplesCultures of mater

2.2. Blood samples
Cultures of maternal peripheral lymphocytes and umbilical
cord blood lymphocytes were prepared in universal containers by
adding 11 drops of whole blood to 5 ml of chromosome medium B
(Biochrom KG, Berlin, Germany). These were incubated at 37 8C for
72 h. Cells were allowed to proliferate for at least two mitotic
cycles in the presence of BrdU. The final concentration of BrdU was
5 mg/ml. A final concentration of CPT-11 of 50 ng/ml was added at
the beginning of the culture period. After 70 h, 0.5 mg/ml of
colcemide was added for 2 h, and cultures were harvested at the
end of the incubation period. All cultures were kept in the dark to
prevent or minimize photolysis of BrdU. The chromosome
preparations were stained using a modified Fluorescence Plus
Giemsa (FPG) technique [25,28].
Scoring was performed in a blind fashion, and cells were
counted at the first mitotic division (where both chromatids
were heavily stained, Fig. 1), at the second mitotic division (where
one chromatid of each chromosome was heavily stained, Fig. 2),
and at third and subsequent mitotic divisions (where part of both
chromatids of each chromosome were lightly stained, Fig. 3). Mean
SCE levels were only evaluated in suitable second division
metaphases (20 metaphases), as it is only possible to observe
and estimate them at this stage. In order to establish PRI, 200 cells
were counted for each culture, and the following formula was
used: PRI = (M1 + 2M2 + 3M3+)/N, where M1 is the percentage of
cells at first division, M2 is the percentage of cells at second
division, and M3+ is the percentage of cells at third and subsequent
divisions, while N is the total number of cells counted
(M1 + M2 + M3+). Moreover, the MIs for 2000 activated lymphocytes
were determined for all cultures.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2 ตัวอย่างเลือด
วัฒนธรรมของ lymphocytes แม่อุปกรณ์ต่อพ่วงและ umbilical
สายเลือด lymphocytes ถูกเตรียมไว้ในภาชนะสากลโดย
เพิ่ม 11 หยดเลือดเต็ม 5 ml ของโครโมโซมขนาดกลาง B
(Biochrom KG เบอร์ลิน เยอรมนี) เหล่านี้ถูก incubated ที่ 8C 37 สำหรับ
72 h. เซลล์ได้รับอนุญาตให้ proliferate น้อยสอง mitotic
รอบในต่อหน้าของ BrdU มีความเข้มข้นสุดท้ายของ BrdU
5 mg/ml เพิ่มความเข้มข้นสุดท้ายของ CPT-11 ของ 50 ng/ml ที่
จุดเริ่มต้นของวัฒนธรรม หลังจาก 70 h, 0.5 mg/ml ของ
colcemide เข้ามาใน 2 h และวัฒนธรรมถูกเก็บเกี่ยวในการ
จุดสิ้นสุดของระยะฟักตัว วัฒนธรรมทั้งหมดถูกเก็บไว้ในมืดเพื่อ
ป้องกัน หรือลด photolysis BrdU โครโมโซม
เตรียมมีสีการใช้ตัวแก้ไข Fluorescence บวก
เทคนิค Giemsa (FPG) [25,28]
ทำ Scoring ในแฟชั่นตาบอด และเซลล์ถูก
นับที่ส่วน mitotic แรก (ที่ chromatids ทั้ง
ถูกหนักสี Fig. 1), ที่สองส่วน mitotic (ที่
chromatid หนึ่งของแต่ละโครโมโซมมีมากสี Fig. 2),
และ ที่สาม และต่อ ๆ ไปส่วน mitotic (ซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของทั้งสอง
chromatids ของแต่ละโครโมโซมได้เบา ๆ สี Fig. 3) หมายความว่า
ระดับ SCE ได้ประเมินเฉพาะในส่วนที่สองเหมาะ
metaphases (20 metaphases), มันจะสามารถทำได้สังเกต
และประเมินพวกเขาในขั้นนี้ เพื่อที่จะสร้าง PRI, 200 เซลล์
นับได้ในแต่ละวัฒนธรรม และสูตรต่อไปนี้
ใช้: PRI = (M1 2 เมตร 2 3M 3) / N, M1 อยู่เปอร์เซ็นต์ของ
เซลล์ที่ส่วนแรก M2 คือ เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่สอง
หาร และ M3 คือ เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่สาม และต่อ ๆ ไป
ส่วน ในขณะที่ N คือ จำนวนของเซลล์นับ
(M1 M2 M3) นอกจากนี้ MIs สำหรับ 2000 ที่เรียกใช้ lymphocytes
ถูกกำหนดสำหรับวัฒนธรรมทั้งหมด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 ตัวอย่างเลือด
วัฒนธรรมของเซลล์เม็ดเลือดขาวที่ต่อพ่วงมารดาและสะดือ
สาย lymphocytes เลือดที่เตรียมในภาชนะบรรจุที่สากลโดย
การเพิ่ม 11 หยดเลือดทั้ง 5 ml ของกลางโครโมโซม B
(Biochrom KG, เบอร์ลิน, เยอรมนี) เหล่านี้ถูกบ่มที่ 37 8C สำหรับ
72 ชั่วโมง เซลล์ที่ได้รับอนุญาตให้ขยายเวลาอย่างน้อยสองทิคส์
รอบในการปรากฏตัวของ BrdU ความเข้มข้นสุดท้ายของ BrdU เป็น
5 mg / ml ความเข้มข้นสุดท้ายของ CPT-11 จาก 50 ng / ml ถูกเพิ่มเข้ามาที่
จุดเริ่มต้นของระยะเวลาการเลี้ยง หลังจาก 70 ชั่วโมง, 0.5 mg / ml ของ
colcemide ถูกบันทึกเป็นเวลา 2 ชั่วโมงและวัฒนธรรมที่ได้รับการเก็บเกี่ยวใน
ตอนท้ายของระยะฟักตัว ทุกวัฒนธรรมถูกเก็บไว้ในที่มืดเพื่อ
ป้องกันหรือลด photolysis ของ BrdU โครโมโซม
เตรียมมีการย้อมโดยใช้การแก้ไขเรืองแสงพลัส
Giemsa (FPG) เทคนิค [25,28]
เกณฑ์การให้คะแนนได้รับการดำเนินการในแฟชั่นตาบอดและเซลล์ถูก
นับที่แบ่งทิคส์ครั้งแรก (ที่ chromatids ทั้ง
มีการย้อมอย่างหนัก, รูปที่ 1). ที่แบ่งทิคส์ที่สอง (ที่
หนึ่งคู่โครมาของแต่ละโครโมโซมเป็นสีหนัก, รูปที่ 2.)
และหน่วยงานทิคส์ที่สามและต่อมา (ซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของทั้งสอง
chromatids ของแต่ละโครโมโซมมีการย้อมเบา ๆ รูปที่ 3). หมายถึง
ระดับ SCE ได้รับการประเมินที่เหมาะสมเฉพาะในส่วนที่สอง
metaphases (20 metaphases) ตามที่มันจะเป็นไปได้ที่จะสังเกตเห็น
และประเมินพวกเขาในขั้นตอนนี้ เพื่อสร้าง PRI, 200 เซลล์
นับสำหรับแต่ละวัฒนธรรมและสูตรต่อไปนี้ถูก
ใช้ PRI = (M1 + 2M2 + 3M3 +) / N ที่ M1 เป็นร้อยละของ
เซลล์ในส่วนแรก, M2 เป็นร้อยละของเซลล์ ที่สอง
ส่วนและ M3 + เป็นอัตราร้อยละของเซลล์ที่สามและต่อมา
หน่วยงานในขณะที่ N คือจำนวนรวมของเซลล์นับ
(M1, M2, M3 + +) นอกจากนี้ระบบสารสนเทศสำหรับ lymphocytes เปิดใช้งาน 2000
ได้รับการพิจารณาสำหรับทุกวัฒนธรรม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . ตัวอย่างเลือดของมารดา และอุปกรณ์ต่อพ่วง วัฒนธรรมถูก

เลือดสายสะดือสายสะดือถูกเตรียมไว้ในภาชนะ โดยถ้วนหน้า
เพิ่ม 11 หยดเลือดทั้ง 5 ml ของโครโมโซม medium B
( biochrom กิโลกรัม , เบอร์ลิน , เยอรมนี ) เหล่านี้ถูกบ่มที่ 37 8C สำหรับ
72 ชั่วโมง เซลล์ ได้รับการอนุญาตให้เผยแพร่อย่างน้อยสองเส้นใย
รอบในการแสดงตนของ brdu .ที่ความเข้มข้นสุดท้าย brdu คือ
5 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร มีความเข้มข้นสุดท้าย cpt-11 50 นาโนกรัม / มิลลิลิตร ได้เพิ่มที่
จุดเริ่มต้นของระยะเวลาการเลี้ยง หลังจาก 70 H 0.5 mg / ml
colcemide เพิ่ม 2 ชั่วโมง และวัฒนธรรมที่ถูกเก็บเกี่ยวที่
สิ้นสุดระยะเวลาการบ่ม วัฒนธรรมทั้งหมดถูกเก็บไว้ในที่มืด ป้องกันหรือลด

โฟโตไลซิสของ brdu . โครโมโซม
การเตรียมใช้ย้อมที่ใช้แก้ไขการบวก
จิมซา ( FPG ) เทคนิค [ 25,28 ] .
คะแนนแสดงในแฟชั่น ตาบอด และเซลล์มี
นับที่กองแรก ( ซึ่งทั้งสองเส้นใยโครมาทิด
ถูกมากทั้งรูปที่ 1 ) ในส่วนที่ 2 ( mitotic
หนึ่งของแต่ละโครโมโซมเป็นแบบหนักรูปที่ 2 ) ,
เปื้อนและในส่วนที่สาม และต่อมาเส้นใย ( ซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของโครมาทิดแต่ละโครโมโซมมี 2
เบาเปื้อนรูปที่ 3 ) หมายถึง ระดับการประเมินใน
SCE เฉพาะเหมาะกอง
2 metaphases ( 20 metaphases ) , มันเป็นเพียงที่เป็นไปได้ที่จะสังเกต
และประเมินพวกเขาในขั้นตอนนี้ เพื่อสร้างสวน 200 เซลล์
ถูกนับในแต่ละวัฒนธรรม และสูตรต่อไปนี้ที่ถูกใช้ :
PRI = ( M1 2m2 3m3 ) / N ที่ M1 คือเปอร์เซ็นต์ของ
เซลล์ในส่วนแรก , M2 เป็นร้อยละของเซลล์ที่ดิวิชั่น 2
, และ M3 คือ เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่ที่สาม และต่อมา
ส่วน ในขณะที่ n คือจำนวนเซลล์นับ
( M1 M2 M3 ) นอกจากนี้ ระบบสารสนเทศสำหรับ 2000 ใช้งานถูก
ถูกกำหนดสำหรับทุกวัฒนธรรม