Isolates of Ascosphaera apisTwo iso

Isolates of Ascosphaera apis
Two isolates of the Chalkbrood fungus A. apis were obtained from mummies of naturally infected
hives in two widely diverse areas of Queensland. One isolate was obtained from a hive located at
Fisherman Islands at the mouth of the Brisbane River in Southern Queensland. The second isolate
was obtained from the hive of a hobbyist beekeeper in Townsville, North Queensland.
Preparation of test agents
Essential oils and other prospective antifungal agents trialled in this work were provided by Craig
Davis. The details of these oils are outlined in Appendix 1 of this report. Each of the natural agents
trialled in this research were screened for their efficacy against the fungus A. apis by preparing serial
dilutions in sterile 0.01% Tween 80. Each dilution of oil was added to 50 mL of molten Sabarouds
Dextrose Agar (SDA) which had been held in a water bath at 48o
C. Separate dilutions of each
product were assayed with the final concentrations of oil in agar being 1000, 500 and 250 ppm.
Preparation of culture plates containing test agents
Tri-divided bacteriological petri plates were filled with 15 mL of each dilution of test agent in molten
Sabarauds Dextrose Agar (SDA) culture medium, and each dilution was poured in triplicate. The
mixtures of molten medium and test dilutions were allowed to set at room temperature.
Preparation of the inoculum
Mummified larvae from a naturally infected hive at Fisherman Island, Brisbane were cultured on
SDA plates by dabbing the “mummies” onto the agar at various points around the bacteriological
plate. The plates were incubated at 30o
C in plastic bags for 7-10 days. At the conclusion of the
incubation period, plates were examined for fungal growth. Colonies of A. apis grown on SDA
plates are 5-7 mm in diameter, and white to pale buff to black colour, and have floccose, matted
mycelia (Heath, 1982a,b; Splitour and Olive, 1955). The spores of A. apis were washed off the plates
using 0.01% sterile Tween 80 and loosened by shaking the suspension with glass beads for 2-3 hours.
The spore suspension was adjusted with sterile Tween 80 so that each inoculum contained
approximately 50 x 106
spores/mL, using a Neubauer Counting Chamber

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกของ api Ascosphaeraสองแยกของเห็ดรา Chalkbrood apis ที่อ.ได้รับจากมัมมี่ของติดเชื้อตามธรรมชาติลมพิษในสองพื้นที่อย่างกว้างขวางหลากหลายของรัฐควีนส์แลนด์ แยกหนึ่งได้รับจากกลุ่มอยู่หมู่เกาะชาวประมงที่ปากแม่น้ำบริสเบนรัฐควีนส์แลนด์ทางภาคใต้ แยกที่สองได้รับจากกลุ่มของ beekeeper hobbyist ในสวิลล์ รัฐควีนส์แลนด์เหนือการเตรียมการของบริษัทตัวแทนการทดสอบน้ำมันหอมระเหยและอื่น ๆ trialled ตัวแทนอาการคาดหวังในงานนี้ได้ โดยเครกDavis รายละเอียดของน้ำมันเหล่านี้จะถูกระบุไว้ในภาคผนวกของรายงานนี้ แต่ละตัวแทนธรรมชาติtrialled ในงานวิจัยนี้ได้ฉายสำหรับประสิทธิภาพการต่อต้านเชื้อรา A. apis โดยการจัดลำดับdilutions กอซ 0.01% Tween 80 แต่ละเจือจางน้ำมันถูกเพิ่ม 50 มล.ของเหลว Sabaroudsขึ้น Agar (SDA) ซึ่งได้จัดขึ้นในอ่างน้ำที่ 48oC. dilutions แยกของแต่ละผลิตภัณฑ์ถูก assayed กับความเข้มข้นสุดท้ายของน้ำมันใน agar เป็น 1000, 500 และ 250 ppmเตรียมแผ่นวัฒนธรรมที่ประกอบด้วยตัวแทนในการทดสอบแบ่งตรี petri bacteriological แผ่นเต็มไป ด้วย 15 mL ของแต่ละเจือจางแทนทดสอบในหลอมละลายสื่อวัฒนธรรมขึ้น Sabarauds Agar (SDA) และเจือจางแต่ละถูก poured ใน triplicate ที่ส่วนผสมของเหลวปานกลางและทดสอบ dilutions ได้รับอนุญาตให้ตั้งที่อุณหภูมิห้องการเตรียม inoculum ในตัวอ่อน mummified จากกลุ่มติดเชื้อตามธรรมชาติที่ชาวประมงเกาะ บริสเบนมีอ่างในSDA แผ่น โดย dabbing "มัมมี่" บน agar ที่จุดต่าง ๆ สถานที่ bacteriologicalจาน แผ่นก็ incubated ที่ 30oC ในถุงพลาสติก 7-10 วัน ของระยะฟักตัว แผ่นถูกตรวจสอบการเจริญเติบโตของเชื้อรา Apis อาณานิคม A. ปลูกใน SDAแผ่น 5-7 มม.เส้นผ่าศูนย์กลาง และขาวซีดหนังจะสีดำ และมี floccose, mattedmycelia (ฮีธ 1982a, b Splitour กมะกอก 1955) เพาะเฟิร์นของ A. apis ถูกล้างออกแผ่นใช้ 0.01% ฆ่าเชื้อ Tween 80 และหลวม โดยสั่นระงับ ด้วยแก้วลูกปัด 2-3 ชั่วโมงการระงับสปอร์ถูกปรับปรุง ด้วยฆ่าเชื้อ Tween 80 ให้ inoculum ละอยู่ประมาณ 50 x 106 เพาะ เฟิร์น/mL ใช้ห้องนับ Neubauer

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แยกของ Ascosphaera APIs
สองสายพันธุ์ของเชื้อรา A. Chalkbrood APIs ได้รับจากมัมมี่ของการติดเชื้อตามธรรมชาติ
ลมพิษในสองพื้นที่ที่มีความหลากหลายอย่างกว้างขวางของรัฐควีนส์แลนด์ แยกหนึ่งที่ได้รับจากรังอยู่ที่
ชาวประมงเกาะที่ปากแม่น้ำบริสเบนในภาคใต้ของรัฐควีนส์แลนด์ แยกที่สอง
ที่ได้รับจากรังของผึ้งงานอดิเรกในสวิลล์นอร์ ธ ควีนส์แลนด์.
การเตรียมสารทดสอบ
น้ำมันหอมระเหยและสารต้านเชื้อราอื่น ๆ ที่คาดหวัง trialled ในงานนี้มีให้โดยเคร็ก
เดวิส รายละเอียดของน้ำมันเหล่านี้จะถูกระบุไว้ในภาคผนวก 1 ของรายงานฉบับนี้ แต่ละตัวแทนธรรมชาติ
trialled ในการวิจัยครั้งนี้ได้รับการตรวจคัดกรองการรับรู้ความสามารถของตนกับเชื้อรา A. APIs โดยการเตรียมอนุกรม
เจือจางในการฆ่าเชื้อ 0.01% Tween 80 เจือจางแต่ละน้ำมันถูกบันทึกอยู่ใน 50 มิลลิลิตรหลอมเหลว Sabarouds
Dextrose Agar (SDA) ซึ่งมี ถูกจัดขึ้นในอ่างน้ำที่ 48o
C. เจือจางเฉพาะกิจการของแต่ละ
ผลิตภัณฑ์ที่ได้รับการตรวจที่มีความเข้มข้นสุดท้ายของน้ำมันในอาหารเลี้ยงเชื้อเป็น 1000, 500 และ 250 พีพีเอ็ม.
การจัดทำแผ่นวัฒนธรรมที่มีตัวแทนการทดสอบ
Tri-แบ่งจานเพาะเชื้อแบคทีเรียที่เต็มไปด้วย 15 มิลลิลิตรเจือจางของแต่ละ บริษัท ตัวแทนการทดสอบในหลอมเหลว
Sabarauds Dextrose Agar (SDA) สื่อวัฒนธรรมและการลดสัดส่วนแต่ละถูกเทในเพิ่มขึ้นสามเท่า
ส่วนผสมของกลางหลอมละลายและเจือจางทดสอบได้รับอนุญาตให้ตั้งไว้ที่อุณหภูมิห้อง.
เตรียมหัวเชื้อ
ตัวอ่อนตายซากจากกลุ่มที่ติดเชื้อตามธรรมชาติที่ชาวประมงเกาะบริสเบนเพาะเลี้ยงบน
แผ่น SDA โดย dabbing "มัมมี่" ลงบนอาหารเลี้ยงเชื้อตามจุดต่าง ๆ รอบ แบคทีเรีย
แผ่น แผ่นบ่มที่อุณหภูมิ 30o
C ในถุงพลาสติกสำหรับ 7-10 วัน ในช่วงท้ายของ
ระยะเวลาการบ่มแผ่นถูกตรวจสอบสำหรับการเจริญเติบโตของเชื้อรา อาณานิคมของ A. APIs ที่ปลูกใน SDA
แผ่นเป็น 5-7 มมและสีขาวเป็นสีน้ำตาลอมเหลืองอ่อนเป็นสีดำและได้ floccose, สังกะตัง
เส้นใย (เฮลธ์, 1982a, B; Splitour และมะกอก, 1955) สปอร์ของ API A. ถูกล้างออกแผ่น
โดยใช้ 0.01% หมัน Tween 80 และคลายโดยการเขย่าระงับลูกปัดแก้ว 2-3 ชั่วโมง.
สปอร์แขวนลอยได้รับการปรับปรุงด้วย 80 Tween ผ่านการฆ่าเชื้อเพื่อให้แต่ละหัวเชื้อที่มีอยู่
ประมาณ 50 x 106
สปอร์ / mL โดยใช้หอ Neubauer นับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

จำนวน ascosphaera APIs
สองสายพันธุ์ของเชื้อรา A . APIs ชอล์คบรูดได้จากมัมมี่ของธรรมชาติติดเชื้อ
รังสองพื้นที่อย่างกว้างขวางหลากหลายของควีนส์แลนด์ ที่แยกได้จากรังตั้งอยู่ที่
เกาะชาวประมงที่ปากของแม่น้ำในภาคใต้ที่บริสเบนควีนส์แลนด์ สองแยก
ได้มาจากรังของ hobbyist คงไว้ใน Townsville ,นอร์ทควีนส์แลนด์ เตรียมสอบ

สารระเหยและสารต้านเชื้อราอื่น ๆในอนาคต trialled ในงานนี้ถูกจัดโดย Craig
เดวิส รายละเอียดของตัวขับเหล่านี้จะอธิบายไว้ในภาคผนวก 1 ของรายงานนี้ แต่ละตัวแทนธรรมชาติ
trialled ในงานวิจัยนี้ คือ เพิ่มประสิทธิภาพของพวกเขาต่อต้านเชื้อรา A . APIs โดยการเตรียมอนุกรม
เจือจางในนหมัน 0.01 % 80แต่ละระดับการเจือจางของน้ำมันเพิ่ม 50 มิลลิลิตร หล่อ sabarouds
dextrose agar ( SDA ) ซึ่งถูกจัดขึ้นในอ่างน้ำที่ 48o
C แยกวิธีการแต่ละ
สินค้าเอนไซม์ที่มีความเข้มข้นสุดท้ายของน้ำมันในวุ้นเป็น 1000 , 500 และ 250 ppm .
การเตรียมแผ่นทดสอบ
วัฒนธรรมที่มีตัวแทนไตรแบ่งจาน Petri แบคทีเรียเต็มไปด้วย 15 ml ของแต่ละการทดสอบของตัวแทนหล่อ
sabarauds dextrose agar ( SDA ) อาหารเลี้ยงเชื้อ และแต่ละ dilution คือเททั้งสามใบ
ผสมหล่อทดสอบกลางและวิธีการได้รับอนุญาตให้ตั้งไว้ที่อุณหภูมิห้อง

สำคัญการเตรียมเชื้อตัวอ่อนจากธรรมชาติติดเชื้อที่ชาวประมงเกาะรัง ,บริสเบนโดยเลี้ยงบน
sda แผ่นโดย dabbing " มัมมี่ " ลงบนอาหารวุ้นที่จุดต่างๆ รอบจานแบคทีเรีย

แผ่นอุณหภูมิ 30o
c ในถุงพลาสติกเป็นเวลา 7-10 วัน ที่บทสรุปของ
ระยะฟักตัว แผ่นมีวัตถุประสงค์เพื่อการเจริญเติบโต อาณานิคมของ โดยปลูกใน sda
แผ่น 5-7 มิลลิเมตรในเส้นผ่าศูนย์กลางและสีขาวซีดหนังสีดำและมี floccose สังกะตัง
, เส้นใย ( Heath , 1982a , B ; splitour และมะกอก , 1955 ) สปอร์ของอ. APIs ถูกล้างออกแผ่น
ใช้ 0.01 % เป็นหมัน Tween 80 และผ่อนคลายโดยการเขย่าแขนด้วยลูกปัดแก้ว 2-3 ชั่วโมง สปอร์แขวนลอย
ปรับกับหมัน Tween 80 เพื่อให้แต่ละสายพันธุ์มี

ประมาณ 50 x 106 สปอร์ / มิลลิลิตร ใช้นับห้องนูเบาเออร์