2.5. Construction of plasmid pRAH2T

2.5. Construction of plasmid pRAH2
The BBTV-G-DNA-3-cp gene was cloned into a suitable
plant expression vector creating plasmid pRAH2 as follows:
The BBTV-G-DNA-3-cp encoding ORF was amplified
from plasmid pH1 by Add/On-PCR using two
primer pairs containing the Bam HI site (BBTV-F and
BBTV-R, Table 1) according to Wanitchakorn et al. [30].
The plasmid pRAH1 was created by ligation of the Bam
H1-digested ORF-PCR product and plasmid pAHC17
[16]. Bar gene cassette was released from plasmid pAB6
by Hind III-digestion and cloned into the Hind III
digested-plasmid pRHA1 creating plasmid pRHA2. The
integrity of the plasmid pRHA2 was confirmed using Hind
III digestion and PCR analysis.
In order to determine the sense orientation for BBTV-G-cp
gene in the prepared construct, PCR analysis using two
primers, i.e., the BBTV-F and the nos terminator reverse primer
(50 TTA TCC TAG TTT GCG CGC TA 30) was conducted
as mentioned before with a template of plasmid
pRHA2 DNA.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 การก่อสร้างของพลาสมิด prah2
ยีน BBTV-G-dna-3-cp เป็นโคลนเป็นเวกเตอร์
แสดงออกพืชที่เหมาะสมในการสร้างพลาสมิด prah2 ดังนี้
BBTV-G-dna-3-cp เข้ารหัส ORF ถูกขยาย
จากพลาสมิด PH1 โดยเพิ่ม / บน pcr ใช้สองคู่ไพรเมอร์ที่มี
เว็บไซต์ hi bam (BBTV-F และ
BBTV-r, ตาราง 1) ตาม Wanitchakorn ตอัล [30].
prah1 พลาสมิดที่ถูกสร้างขึ้นโดย ligation ของ bam
pahc17 ผลิตภัณฑ์ ORF-pcr h1 ย่อยและพลาสมิด
[16] บาร์ยีนเทปถูกปล่อยออกจากพลาสมิด pab6
โดยหลัง iii-การย่อยอาหารและโคลนเข้าไปหลัง iii prha1
ย่อย-พลาสมิดการสร้างพลาสมิด prha2
ความสมบูรณ์ของ prha2 พลาสมิดได้รับการยืนยันโดยใช้หลัง
iii การย่อยอาหารและการวิเคราะห์ pcr.
เพื่อที่จะกำหนดทิศทางความรู้สึกสำหรับ BBTV-G-cp
ยีนในการสร้างที่เตรียมไว้การวิเคราะห์ PCR โดยใช้ไพรเมอร์สอง
คือ BBTV-F และกัดกร่อนไพรเมอร์เทอร์มิกลับ
(50 TTA TCC แท็ก TTT CGC GCG ta 30) ได้ดำเนินการ
กล่าวถึงมาก่อนด้วยแม่แบบของพลาสมิดดีเอ็นเอ
prha2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 การก่อสร้างของ plasmid pRAH2
ยีน BBTV-G-DNA-3-cp ถูก cloned เป็นที่เหมาะ
เวกเตอร์นิพจน์พืชสร้าง plasmid pRAH2 เป็นดังนี้:
BBTV-G-DNA-3-จุดเข้า ORF ถูกขยาย
จาก plasmid pH1 โดยเพิ่ม/บน-PCR โดยใช้สอง
คู่รองพื้นที่ประกอบด้วยไซต์ HI อำนวยการมูลนิธิ (BBTV F และ
BBTV-R ตารางที่ 1) ตาม Wanitchakorn et al. [30]
plasmid pRAH1 ถูกสร้างขึ้น โดยไข่ของอำนวยการมูลนิธิการ
เจ่า H1 ORF PCR ผลิตภัณฑ์และ plasmid pAHC17
[16] บาร์ยีน ออกเทปจาก plasmid pAB6
โดยเดนไฮนด์ III-ย่อยอาหาร และโคลนเป็น III เดนไฮนด์
pRHA1 plasmid เจ่าสร้าง plasmid pRHA2 ใน
สมบูรณ์ของ plasmid pRHA2 ถูกยืนยันใช้เดนไฮนด์
III ย่อยอาหารและวิเคราะห์ PCR
เพื่อกำหนดแนวความรู้สึกสำหรับ BBTV G cp
ยีนในโครงสร้างเตรียมไว้ วิเคราะห์ PCR โดยใช้ 2
ไพรเมอร์ เช่น BBTV-F และที่หมายเลขเทอร์มิเนเตอร์กลับพื้น
ถูกดำเนินการ (50 TTA TCC แท็กที GCG CGC TA 30)
ดังกล่าวก่อนที่จะ มีแม่แบบของ plasmid
pRHA2 ดีเอ็นเอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 . การก่อสร้างของ plasmid prah 2
ที่ bbtv - G - ดีเอ็นเอ - 3 - CP ยีนก็ถูกโคลนในที่เหมาะสม
โรงงานการแสดงออกหรือการสร้าง plasmid prah 2 ดังนี้:
ที่ bbtv - G - ดีเอ็นเอ - 3 - CP การเข้ารหัส orf เป็นแอมพลิฟาย
จาก plasmid pH 1 โดยเพิ่ม/บน - pcr โดยใช้ทั้งสอง
เชื้อปะทุเป็นคู่ที่ BAM Hi ( bbtv - F และ
bbtv - R ,ตารางที่ 1 )ตาม wanitchakorn et al . [ 30 ]..
plasmid prah 1 ที่ถูกสร้างขึ้นโดย ligation ของ BAM ที่
H 1 - pahc orf - pcr และ ผลิตภัณฑ์ plasmid ย่อย 17
[ 16 ] คาสเซ็ตต์ยีนบาร์ออกจาก plasmid PAB 6
โดยหลัง III - ระบบย่อยอาหารและจำลองไว้ในหลัง III
ย่อย - plasmid prha 1 ที่สร้าง plasmid prha 2
ความสมบูรณ์ของ plasmid prha 2 ยังได้รับการยืนยันโดยใช้ระบบย่อยอาหารหลัง
III และการวิเคราะห์ pcr .
ในการสั่งซื้อในการกำหนดแนวความรู้สึกของยีน bbtv - G - CP
ในสร้างขึ้นpcr การวิเคราะห์การใช้สอง
primers ,เช่น,ที่ bbtv - F และ nos เพชฌฆาตย้อนกลับเชื้อปะทุ
( tt : tta ผ่อนคลายแป้งตรา 50 ป้าย, TTT , gcg ธรรมา ภิบาล มาบตาพุด 30 )ได้จัดทำขึ้น
ตามที่ได้กล่าวไว้ข้างต้นด้วยเทมเพลตของ plasmid
prha 2 ดีเอ็นเอ.