2.9. Evaluation of protein oxidatio

2.9. Evaluation of protein oxidation in pork patties
Protein oxidation was evaluated on the basis of both the formation
rate of carbonyl groups and the loss rate of sulphydryl groups. Total
carbonyl content was determined by a procedure (Oliver, Ahn,
Moerman, Goldstein, & Stadtman, 1987) slightly modified to suit meat
analysis. Briefly, 1-g meat sample was homogenized with Ultra Turrax
in 20 ml of 0.05 M phosphate buffer (pH 7.2), and two 0.5-ml aliquots
of the homogenate were each mixed with 0.5 ml 20% trichloroacetic
acid and centrifuged. The precipitated proteins werewashed with HCl/acetone
(3/100, v/v) twice followed by washing with 10% trichloroacetic to
remove meat chromophores, and one of the precipitates was treated with
1 ml 2 N HCl to be used for quantifying protein concentration, while the
other was treated with 1 ml of DNPH 0.2% (w/v) in 2 N HCl to be used
for carbonyl concentration measurement. Both solutions were
incubated in the dark for 1 h at room temperature under regular stirring,
the contents were centrifuged, and the precipitates were washed once
with 5 ml 20% trichloroacetic acid and three times with 5 ml of ethanol/
ethyl acetate (1/1, v/v) to eliminate traces of DNPH. The precipitates
were finally dissolved in 2 ml of 6 M guanidine hydrochloride with 20
mM sodium phosphate buffer, pH 6.5. Protein concentration was calculated
fromabsorption at 280 nmof the sample derived from the precipitate
treated with HCl. For quantification purposes, a standard solution of
bovine serum albumin (BSA) in 20 mM sodium phosphate buffer with
6 M, pH 6.5, guanidine hydrochloride was prepared, and the protein
concentrations were determined according to a standard curve. Carbonyl
concentration was calculated from absorption at 370 nm of the sample
derived from the precipitate treated with DNPH and expressed as
nmoles of carbonyls/mg of protein using an adsorption coefficient
of 21.0 mM−1 cm−1.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.9. การประเมินผลของโปรตีนเกิดออกซิเดชันในหมู pattiesออกซิเดชันโปรตีนถูกประเมินโดยใช้ทั้งการก่อตัวอัตราของกลุ่ม carbonyl และอัตราการสูญเสียของกลุ่ม sulphydryl ผลรวมcarbonyl เนื้อหาเป็นไปตามขั้นตอน (Oliver อาห์นMoerman, Goldstein, & Stadtman, 1987) ปรับเปลี่ยนเล็กน้อยเพื่อให้เหมาะกับเนื้อวิเคราะห์ สั้น ๆ เนื้อ 1 g อย่างถูก homogenized เป็นกลุ่มกับ Ultra Turraxใน 20 ml 0.05 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.2), และสอง aliquots 0.5 mlของ homogenate ได้แต่ละผสมกับ trichloroacetic 20% 0.5 mlกรด และ centrifuged Werewashed ตกตะกอนโปรตีน ด้วย HCl/อะ ซิโตน(3/100, v/v) สองครั้งตาม ด้วยล้างด้วย trichloroacetic 10% เพื่อเอาเนื้อ chromophores และ precipitates การอย่างใดอย่างหนึ่งได้รับ1 ml 2 N HCl ใช้สำหรับ quantifying โปรตีนเข้มข้น ขณะอื่น ๆ ได้รับ 1 ml ของ DNPH 0.2% (w/v) ใน 2 N HCl ที่ใช้สำหรับ carbonyl สมาธิวัด ทั้งสองวิธีมีincubated ในมืดสำหรับ h 1 ที่อุณหภูมิห้องภายใต้ปกติกวนเนื้อหาถูก centrifuged และ precipitates ถูกล้างครั้งเดียวกรด trichloroacetic 20% 5 ml และครั้งที่สาม ด้วย 5 ml ของเอทานอล /เอทิล acetate (1/1, v/v) ในการกำจัดร่องรอยของ DNPH Precipitatesสุดท้ายถูกละลายใน 2 ml ของไฮโดรคลอไรด์ guanidine 6 M กับ 20มม.โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ค่า pH 6.5 คำนวณความเข้มข้นของโปรตีนfromabsorption ที่ 280 nmof ตัวอย่างมาจาก precipitateรักษา ด้วย HCl สำหรับการนับ การแก้ไขมาตรฐานของวัว serum albumin (บีเอสเอ) ใน 20 มม.โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ด้วย6 M, pH 6.5, guanidine ไฮโดรคลอไรด์เตรียมพร้อม และโปรตีนมีกำหนดความเข้มข้นตามเส้นโค้งมาตรฐาน Carbonylคำนวณความเข้มข้นดูดซึมที่ 370 nm ของตัวอย่างมาจาก precipitate รับ DNPH และแสดงเป็นnmoles carbonyls/มิลลิกรัม โปรตีนโดยใช้สัมประสิทธิ์การดูดซับของ 21.0 mM−1 cm−1

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.9 การประเมินผลของการเกิดออกซิเดชันโปรตีนในไส้หมู
ออกซิเดชันโปรตีนได้รับการประเมินบนพื้นฐานของทั้งสองก่อ
อัตรากลุ่มคาร์บอนิลและอัตราการสูญเสียของกลุ่ม sulphydryl รวม
เนื้อหาคาร์บอนิลถูกกำหนดโดยขั้นตอน (โอลิเวอร์ Ahn,
มอร์แมนโกลด์สตีนและ Stadtman, 1987) การปรับเปลี่ยนเล็กน้อยเพื่อให้เหมาะกับเนื้อ
วิเคราะห์ สั้น ๆ ตัวอย่างเนื้อ 1 กรัมทำให้เป็นเนื้อเดียวกันกับ Turrax อัลตร้า
ใน 20 มิลลิลิตร 0.05 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.2) และสองส่วนลงตัว 0.5 มิลลิลิตร
ของ homogenate แต่ละคนผสมกับ 0.5 มล. 20% ไตรคลอโร
กรดและปั่น โปรตีนตกตะกอน werewashed ไฮโดรคลอริก / อะซิโตน
(3/100, v / v) ตามครั้งที่สองโดยการล้างด้วยไตรคลอโร 10% ถึง
ลบ chromophores เนื้อและเป็นหนึ่งในตกตะกอนได้รับการรักษาด้วย
1 มิลลิลิตร 2 N HCl ที่จะใช้สำหรับปริมาณโปรตีนเข้มข้น ในขณะที่คน
อื่น ๆ ได้รับการรักษาด้วย 1 มิลลิลิตรของ DNPH 0.2% (w / v) ใน 2 N HCl ที่จะใช้
สำหรับการวัดความเข้มข้นของคาร์บอนิล การแก้ปัญหาทั้งสองถูก
บ่มในที่มืดเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องภายใต้กวนปกติ
เนื้อหาที่ถูกปั่นและตกตะกอนถูกล้างครั้งเดียว
ที่มีขนาด 5 ml 20% กรดไตรคลอโรและสามครั้งมี 5 มิลลิลิตรของเอทานอล /
เอทิลอะซิเต (1/1 , v / v) เพื่อขจัดร่องรอยของ DNPH ตกตะกอน
กำลังละลายในที่สุด 2 มิลลิลิตร 6 M ไฮโดรคลอไร guanidine 20
มิลลิโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ค่า pH 6.5 ความเข้มข้นของโปรตีนที่คำนวณ
fromabsorption ที่ 280 nmof ตัวอย่างมาจากตะกอน
รับการรักษาด้วย HCl สำหรับวัตถุประสงค์ปริมาณ, สารละลายมาตรฐานของ
ซีรั่มอัลบูมิวัว (BSA) ในโซเดียม 20 มมฟอสเฟตบัฟเฟอร์กับ
6 M, พีเอช 6.5, ไฮโดรคลอไร guanidine ถูกจัดทำขึ้นและโปรตีน
ความเข้มข้นได้รับการพิจารณาเป็นไปตามเส้นโค้งมาตรฐาน คาร์บอนิล
เข้มข้นที่คำนวณได้จากการดูดซึมที่ 370 นาโนเมตรของกลุ่มตัวอย่าง
ที่ได้มาจากตะกอนรับการรักษาด้วย DNPH และแสดงเป็น
nmoles ของสำเนา / มิลลิกรัมของโปรตีนโดยใช้ค่าสัมประสิทธิ์การดูดซับ
ของ 21.0 MM-1 ซม-1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.9 . การประเมินผลของการเกิดออกซิเดชันของโปรตีนในเนื้อหมูสูตรโปรตีนออกซิเดชัน
ถูกประเมินบนพื้นฐานของทั้งสองก่อตัว
คะแนนของกลุ่มคาร์บอนิลและอัตราการสูญเสียของกลุ่มซัลฟดริล . สำหรับเนื้อหาทั้งหมด
ถูกกําหนดโดยกระบวนการ ( โอลิเวอร์ อาน มอร์แมน โกลด์&
, , , stadtman , 1987 ) การแก้ไขเล็กน้อยเพื่อให้เหมาะกับการวิเคราะห์เนื้อ

สั้น , ตัวอย่างเนื้อ 1-g บดกับ turrax
อัลตร้าใน 20 มิลลิลิตร 0.05 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.2 ) และสอง 0.5-ml เฉยๆ
ของแต่ละคน ผสมกับปริมาณ 0.5 มล. 20 % กรด trichloroacetic
ไฟฟ้า . ตกตะกอนโปรตีน werewashed กับกรดไฮโดรคลอริก / )
( 1 / 100 , v / v ) สองครั้ง ตามด้วยซัก 10% trichloroacetic

เอาเนื้อและการมีบุตรยาก , หนึ่งของตะกอนถูกปฏิบัติด้วย
2 N HCl จะใช้ปริมาณความเข้มข้นของโปรตีน 1 กรัม ในขณะที่อื่น ๆคือการรักษาด้วย
1 มิลลิลิตรของ dnph 0.2% ( w / v ) 2 N HCl จะใช้สำหรับการวัดความเข้มข้นของคาร์บอนิล
. ทั้งโซลูชั่น
เลี้ยงในที่มืดเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิห้องภายใต้ปกติกวน
เนื้อหาระดับและตะกอนถูกซักครั้ง
กับ 5 มล. 20 % กรดไตรคลอโรอะซิติก และครั้งที่สามกับ 5 มิลลิลิตรเอทานอล /
เอทิลอะซิเตท ( 1 / 1 , v / v ) เพื่อกำจัดร่องรอยของ dnph . ส่วนตะกอน
ในที่สุดก็ละลาย 2 มิลลิลิตร 6 ตัวกัวนิดีนม 20
มิลลิเมตรโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.5 . ความเข้มข้นของโปรตีนมีค่า
fromabsorption ที่ 280 nmof กลุ่มตัวอย่างได้มาจากการรักษาด้วย HCl
.มีปริมาณเป็นโซลูชั่นมาตรฐาน
อัลบูมิน ( BSA ) 20 มม. ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ด้วย
6 M , pH 6.5 , กัวนิดีนไฮโดรคลอไรด์ที่เตรียมไว้ และโปรตีน
ความเข้มข้นพิจารณาตามเส้นโค้งมาตรฐาน คาร์บอนิล
ความเข้มข้นคำนวณได้จากการดูดซึมที่ 370 nm ของกลุ่มตัวอย่าง ได้มาจากการรักษาด้วย

dnph และแสดงเป็นในของ carbonyls / มก. โปรตีนโดยใช้การดูดซับของสัมประสิทธิ์
21.0 มม. − 1 cm − 1