Rapid analysis of GABA and glutamat

Rapid analysis of GABA and glutamate in microdialysis samples using high performance liquid chromatography and tandem mass spectrometry

abstract

A liquid chromatography/tandem mass spectrometry (LC–MS/MS) method has been established for the

rapid and reliable determination of -aminobutyric acid (GABA) and glutamate in brain microdialysates.

The microdialysis samples were analysed using a HILIC (hydrophilic interaction liquid chromatography)

column, which is able to retain the polar amino acid neurotransmitters. The mobile phase consisted of

a binary gradient elution profile comprising 0.1% formic acid in water and acetonitrile. GABA, glutamate

as well as the respective internal standards [D6]-GABA and [D5]-glutamate were detected by a triple

quadrupole mass spectrometer in the positive electrospray ionisation mode within a running time of

3 min. The linearity ranged from 1 nM to 10 M for GABA and 10 nM to 10 M for glutamate. The limit of

quantitation was found to be 1 nM for GABA and 10 nM for glutamate (injection volume 10 l). The present

LC–MS/MS method was compared to the classical method for analysis of GABA and glutamate using high

performance liquid chromatography (HPLC) and fluorescence detection (FD). Eventually, the feasibility

of the LC–MS/MS method was demonstrated using in vivo microdialysis in rats by monitoring changes

of the extracellular concentrations of GABA and glutamate in the globus pallidus following stimulation

with potassium.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์อย่างรวดเร็วของกาบาและกลูตาเมตในตัวอย่าง microdialysis ใช้ของเหลว chromatography ประสิทธิภาพสูงและตีคู่มวลสารนามธรรมของเหลวchromatography / ตีคู่มวลสาร (LC-MS / MS) วิธีการได้รับการจัดตั้งขึ้นมาเพื่อมุ่งมั่นที่รวดเร็วและเชื่อถือได้ของกรด-aminobutyric (GABA) และกลูตาเมตใน microdialysates สมอง. กลุ่มตัวอย่าง microdialysis วิเคราะห์โดยใช้ HILIC (ปฏิสัมพันธ์ของเหลว chromatography hydrophilic) คอลัมน์ซึ่งจะทำให้สามารถที่จะเก็บสารสื่อประสาทกรดอะมิโนขั้วโลก เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยรายละเอียดชะลาดไบนารีประกอบด้วย 0.1% กรดในน้ำและ acetonitrile GABA, กลูตาเมตเช่นเดียวกับมาตรฐานภายในที่เกี่ยวข้อง[D6] -GABA และ [D5] -glutamate ถูกตรวจพบโดยสามสเปกโตรมิเตอร์มวลquadrupole ในโหมด Ionisation electrospray บวกภายในระยะเวลาการทำงานของ3 นาที เชิงเส้นตั้งแต่ 1 ถึง 10 นาโนเมตร M สำหรับกาบาและ 10 นาโนเมตรถึง 10 เมตรสำหรับกลูตาเมต ขีด จำกัดของปริมาณพบว่า 1 นาโนเมตรสำหรับกาบาและ 10 นาโนเมตรสำหรับกลูตาเมต (ปริมาณการฉีด 10 ลิตร) ปัจจุบันLC-MS / MS วิธีการได้รับการเปรียบเทียบกับวิธีคลาสสิกสำหรับการวิเคราะห์ของกาบาและกลูตาเมตโดยใช้สูงของเหลวchromatography ประสิทธิภาพ (HPLC) และการตรวจสอบการเรืองแสง (FD) ในที่สุดความเป็นไปได้ของวิธี LC-MS / MS ได้แสดงให้เห็นในการใช้ microdialysis ร่างกายในหนูโดยการตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงของความเข้มข้นของสารกาบาและกลูตาเมตในลูกโลกpallidus ต่อไปนี้การกระตุ้นด้วยโพแทสเซียม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นามธรรม

ของเหลวโครมาโทกราฟี / แมสสเปกโทรเมทรี ( LC ) จาก MS / MS ) ได้รับการจัดตั้งขึ้นสำหรับ

รวดเร็วและน่าเชื่อถือ การหาปริมาณกรดอะมิโนบูทิริก ( GABA ) และกลูตาเมตในสมอง microdialysates .

microdialysis วิเคราะห์โดยใช้ hilic ( น้ำ ( liquid chromatography ) คอลัมน์

ซึ่งเป็น สามารถรักษาขั้ว อะมิโน แอซิด สารสื่อนำประสาท .นามธรรม

ของเหลวโครมาโทกราฟี / แมสสเปกโทรเมทรี ( LC ) จาก MS / MS ) ได้รับการจัดตั้งขึ้นสำหรับ

รวดเร็วและน่าเชื่อถือ การหาปริมาณกรดอะมิโนบูทิริก ( GABA ) และกลูตาเมตในสมอง microdialysates .

microdialysis วิเคราะห์โดยใช้ hilic ( น้ำ ( liquid chromatography ) คอลัมน์

ซึ่งเป็น สามารถรักษาขั้ว อะมิโน แอซิด สารสื่อนำประสาท .นามธรรม

ของเหลวโครมาโทกราฟี / แมสสเปกโทรเมทรี ( LC ) จาก MS / MS ) ได้รับการจัดตั้งขึ้นสำหรับ

รวดเร็วและน่าเชื่อถือ การหาปริมาณกรดอะมิโนบูทิริก ( GABA ) และกลูตาเมตในสมอง microdialysates .

microdialysis วิเคราะห์โดยใช้ hilic ( น้ำ ( liquid chromatography ) คอลัมน์

ซึ่งเป็น สามารถรักษาขั้ว อะมิโน แอซิด สารสื่อนำประสาท .นามธรรม

ของเหลวโครมาโทกราฟี / แมสสเปกโทรเมทรี ( LC ) จาก MS / MS ) ได้รับการจัดตั้งขึ้นสำหรับ

รวดเร็วและน่าเชื่อถือ การหาปริมาณกรดอะมิโนบูทิริก ( GABA ) และกลูตาเมตในสมอง microdialysates .

microdialysis วิเคราะห์โดยใช้ hilic ( น้ำ ( liquid chromatography ) คอลัมน์

ซึ่งเป็น สามารถรักษาขั้ว อะมิโน แอซิด สารสื่อนำประสาท .นามธรรม

ของเหลวโครมาโทกราฟี / แมสสเปกโทรเมทรี ( LC ) จาก MS / MS ) ได้รับการจัดตั้งขึ้นสำหรับ

รวดเร็วและน่าเชื่อถือ การหาปริมาณกรดอะมิโนบูทิริก ( GABA ) และกลูตาเมตในสมอง microdialysates .

microdialysis วิเคราะห์โดยใช้ hilic ( น้ำ ( liquid chromatography ) คอลัมน์

ซึ่งเป็น สามารถรักษาขั้ว อะมิโน แอซิด สารสื่อนำประสาท .