2.4.3. Minimum inhibitory concentra

2.4.3. Minimum inhibitory concentration (MIC)

S. aureus was cultured into 5 ml of TSB, and incubated in a shaker incubator at 35 °C for 18–24 h. The optical density (OD) of the bacteria was adjusted to the standard of McFarland No. 0.5 with 0.85–0.9 g sodium chloride/100 ml sterile solution to achieve a concentration of approximately 108 cfu/ml. The final concentration of the cell number of approximately 106 cfu/ml was obtained by diluting 100 times with sterile sodium chloride solution. One milliliter of the bacterial suspension at 106 cfu/ml was transferred into 1 ml of MHB.

The galangal ethanol extract was diluted in 100% ethanol to 1:1, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 (v/v), and 80 μl was loaded onto sterile filter paper discs (∅ 8 mm, Advantec, Tokyo, Japan) twice with air-drying in between. Infiltrated paper disc (160 μl) was submerged into 1 ml of MHB, after which 1 ml of S. aureus (ca. 106 cfu/ml) was added and incubated with shaking at 35 °C for 18–24 h. The MIC of the ethanol extracts was regarded as the lowest concentration of extracts that were not permitted for any turbidity of the tested microorganism (Lennette et al., 1991; Lorian, 1995).

2.4.4. Minimum bactericidal concentration (MBC)

All the tubes were used in the MIC studies that did not show any turbidity of the bacteria and the last tube with turbidity were determined for MBC. An Aliquot of 0.1 ml of the suspension was spread onto TSA and incubated at 35 °C, 18–24 h. The MBC was the lowest concentration which the initial inoculum was killed as 99.9% or more (Lennette et al., 1991; Lorian, 1995).

2.4.5. Effect of galangal ethanol extract on cell membrane of S. aureus

S. aureus was cultured into 100 ml TSB and incubated at 35 °C for 18–24 h. After incubation, the bacterial cells were separated by centrifugation at 10,000g for 5 min, and resuspended in sterile sodium chloride solution (0.85–0.9 g/100 ml). Suspensions were adjusted to achieve a concentration of approximately 1010 cfu/ml. Spice ethanol extracts at 0.8 mg/ml were loaded onto sterile filter paper discs. One disc was submerged into each test tube of 4 ml of the above bacterial suspension. This suspension was incubated at 35 °C for 0, 2, 6, 16 and 24 h. Additional extracts and bacterial pellets were removed after incubating as described previously by centrifugation at 10,000g for 5 min. Low molecular weight metabolites known to leak from cells include nucleotides and their component structures (purines, pyrimidines, pentose and inorganic phosphate), amino acids and inorganic ions. The levels of purines, pyrimidines and their derivatives in supernatant were determined by measuring the OD at 260 nm using UV/VIS spectrophotometer (GBC Scientific equipment Pty. Ltd, Australia) by the modified method used by Woo, Rhee, and Park (2000) and Carson, Mee, and Riley (2002).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4.3. ต่ำสุดเข้มข้นยับยั้ง (MIC)หมอเทศข้างลาย S. ถูกล้างใน 5 มล.ของ TSB และรับการกกในตู้อบปั่นที่ 35 ° C สำหรับ 18 – 24 ชั่วโมง ความหนาแน่นออปติคอล (OD) ของแบคทีเรียถูกปรับปรุงให้มาตรฐาน 0.5 McFarland เลขกับ 0.85-0.9 กรัมโซเดียม คลอไรด์/100 มล.ผ่านการฆ่าเชื้อโซลูชันเพื่อให้ได้ความเข้มข้นประมาณ 108 cfu/ml ความเข้มข้นสุดท้ายของจำนวนเซลล์ประมาณ 106 cfu/ml ได้รับ โดยการเจือจาง 100 เท่าด้วยโซเดียมคลอไรด์เป็นหมัน หนึ่งมิลลิเมตรของระงับแบคทีเรียที่ 106 cfu/ml ถูกถ่ายโอนลงใน 1 มิลลิลิตรของ MHBเอทานอลสารสกัดข่าถูกเจือจางในเอทานอล 100% เป็น 1:1, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 (v/v), และ 80 μl ถูกโหลดลงบนแผ่นดิสก์กระดาษกรองปลอดเชื้อ (∅ 8 มม. Advantec โตเกียว ญี่ปุ่น) สองครั้งด้วย air-drying ในระหว่าง แผ่นดิสก์กระดาษแทรกซึม (160 μl) ถูกจมอยู่ใต้น้ำเป็น 1 มิลลิลิตรของ MHB หลังจาก 1 ml ของ S. หมอเทศข้างลาย (ca. 106 cfu/ml) เพิ่ม และรับการกกกับสั่นที่ 35 ° C เป็นเวลา 18 – 24 ชม ถือว่าเป็นความเข้มข้นต่ำสุดของสารสกัดที่ได้ไม่ได้รับอนุญาตใด ๆ ความขุ่นของเชื้อจุลินทรีย์ที่ผ่านการทดสอบ (Lennette et al. 1991; MIC ของสารสกัดเอทานอล Lorian, 1995)2.4.4. ขั้นต่ำให้เห็นว่าความเข้มข้น (MBC)หลอดที่ใช้ในการศึกษาไมโครโฟนที่ไม่ได้แสดงความขุ่นของเชื้อแบคทีเรียใด ๆ และหลอดสุดท้ายกับความขุ่นถูกหาค่า MBC ส่วนลงตัวของ 0.1 มล.ของกันกระเทือนถูกประดับบน TSA และรับการกกที่ 35 ° C, 18 – 24 ชม MBC มีความเข้มข้นต่ำสุดที่ inoculum ครั้งแรกถูกฆ่าเป็น 99.9% ขึ้น (Lennette et al. 1991 Lorian, 1995)2.4.5. ผลของเอทานอข่าแยกบนเยื่อหุ้มเซลล์ของ S. หมอเทศข้างลายหมอเทศข้างลาย S. ถูกล้างลงใน TSB 100 มล. และรับการกกที่ 35 ° C เป็นเวลา 18 – 24 ชม หลังจากบ่ม เซลล์แบคทีเรียโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000g 5 นาที และ resuspended ในการแก้ปัญหาโซเดียมคลอไรด์เป็นหมัน (0.85-0.9 g/100 ml) ระบบกันสะเทือนถูกปรับปรุงเพื่อให้ได้ความเข้มข้นประมาณ 1010 cfu / ml. เครื่องเทศเอทานอลสารสกัดที่ 0.8 mg/ml ถูกโหลดลงบนแผ่นดิสก์กระดาษกรองปลอดเชื้อ แผ่นหนึ่งถูกจมอยู่ใต้น้ำลงในหลอดทดสอบของ 4 ml ของการระงับเชื้อแบคทีเรียดังกล่าวข้างต้น ระงับ incubated ที่ 35 ° C เป็นเวลา 0, 2, 6, 16 และ 24 h. สารสกัดเพิ่มเติม และเม็ดแบคทีเรียถูกเอาออกหลังจาก incubating ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000g สำหรับ 5 นาทีสารน้ำหนักโมเลกุลต่ำที่เรียกว่ารั่วจากเซลล์ประกอบด้วยนิวคลีโอไทด์ และโครงสร้างส่วนประกอบ (สัญญาณ pyrimidines, pentose และอนินทรีย์ฟอสเฟต), กรดอะมิโน และไอออนอนินทรีย์ กำหนดระดับของสัญญาณ pyrimidines และอนุพันธ์ของพวกเขาใน supernatant โดยวัด OD ที่ 260 nm โดยใช้ UV/VIS สเปค (GBC อุปกรณ์วิทยาศาสตร์ จำกัดจากการลงทุน ออสเตรเลีย) โดยวิธีการปรับใช้วู Rhee และสวน (2000) และ คาร์สัน ฉัน และไรลีย์ (2002)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4.3 ความเข้มข้นของการยับยั้งขั้นต่ำ (MIC)

เอส เรียสได้รับการเพาะเลี้ยงเป็น 5 มิลลิลิตร TSB และบ่มในศูนย์บ่มเพาะปั่นที่ 35 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18-24 ชั่วโมง ความหนาแน่นของแสง (OD) ของเชื้อแบคทีเรียที่มีการปรับมาตรฐานของ McFarland ฉบับที่ 0.5 กับ 0.85-0.9 กรัมโซเดียมคลอไรด์ / 100 มล. วิธีการแก้ปัญหาการฆ่าเชื้อเพื่อให้บรรลุความเข้มข้นประมาณ 108 CFU / มล ความเข้มข้นสุดท้ายของจำนวนเซลล์ประมาณ 106 CFU / ml ได้มาจากการเจือจาง 100 เท่าผ่านการฆ่าเชื้อด้วยสารละลายโซเดียมคลอไรด์ หนึ่งมิลลิลิตรของการระงับแบคทีเรียที่ 106 CFU / ml ถูกย้ายเป็น 1 มิลลิลิตร MHB.

สารสกัดจากข่าเอทานอลเจือจางใน% เอทานอล 100-1: 1, 1: 2, 1: 4, 1: 8, 01:16 ( v / v) และ 80 ไมโครลิตรถูกโหลดเข้าสู่การฆ่าเชื้อแผ่นกระดาษกรอง (∅ 8 มม Advantec โตเกียวประเทศญี่ปุ่น) สองครั้งที่มีอากาศแห้งในระหว่าง แผ่นดิสก์กระดาษแทรกซึม (160 ไมโครลิตร) จมอยู่ใต้น้ำเป็น 1 มิลลิลิตร MHB หลังจากที่ 1 มิลลิลิตรของเชื้อ S. aureus (แคลิฟอร์เนีย 106 CFU / ml) ถูกบันทึกและบ่มเขย่าที่ 35 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18-24 ชั่วโมง ไมค์ของสารสกัดเอทานอลได้รับการยกย่องว่าเป็นความเข้มข้นต่ำสุดของสารสกัดที่ไม่ได้รับอนุญาตสำหรับความขุ่นของจุลินทรีย์ที่ผ่านการทดสอบใด ๆ . (Lennette et al, 1991;. Lorian, 1995)

2.4.4 ขั้นต่ำของความเข้มข้นของแบคทีเรีย (MBC)

หลอดทั้งหมดถูกนำมาใช้ในการศึกษา MIC ที่ไม่ได้แสดงความขุ่นใด ๆ ของเชื้อแบคทีเรียและหลอดสุดท้ายด้วยความขุ่นได้รับการพิจารณาสำหรับ MBC aliquot 0.1 มล. ของการระงับกระจายบน TSA และบ่มที่อุณหภูมิ 35 ° C, H 18-24 MBC เป็นความเข้มข้นต่ำสุดที่เชื้อเริ่มต้นถูกฆ่าตายเป็น 99.9% หรือมากกว่า (Lennette et al, 1991;. Lorian, 1995).

2.4.5 ผลของสารสกัดข่าเอทานอลในเยื่อหุ้มเซลล์ของเชื้อ S. aureus

เอส เรียสได้รับการเพาะเลี้ยงเป็น 100 มล. TSB และบ่มที่อุณหภูมิ 35 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18-24 ชั่วโมง หลังจากการบ่มเซลล์แบคทีเรียถูกแยกจากกันโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000g เป็นเวลา 5 นาทีและ resuspended ในการแก้ปัญหาการฆ่าเชื้อโซเดียมคลอไรด์ (0.85-0.9 กรัม / 100 มล.) สารแขวนลอยมีการปรับเพื่อให้บรรลุความเข้มข้นประมาณ 1,010 CFU / มล สารสกัดจากเครื่องเทศเอทานอลที่ 0.8 mg / ml ถูกโหลดลงบนแผ่นกระดาษกรองผ่านการฆ่าเชื้อ จานหนึ่งจมลงในแต่ละหลอดทดลอง 4 มิลลิลิตรระงับเชื้อแบคทีเรียดังกล่าวข้างต้น ระงับการนี้ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 35 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 0, 2, 6, 16 และ 24 ชั่วโมง สารสกัดจากเม็ดเพิ่มเติมและแบคทีเรียที่ถูกถอดออกหลังจากบ่มตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000g เป็นเวลา 5 นาที น้ำหนักเบาสารโมเลกุลที่รู้จักกันที่จะรั่วไหลออกมาจากเซลล์รวมถึงนิวคลีโอและโครงสร้างส่วนของพวกเขา (พิวรีนไซ pentose และฟอสเฟตอนินทรี) กรดอะมิโนและไอออนนินทรีย์ ระดับของพิวรีนไซและอนุพันธ์ของพวกเขาในสารละลายที่ถูกกำหนดโดยการวัด OD ที่ 260 นาโนเมตรโดยใช้ UV / VIS spectrophotometer (GBC เครื่องมือวิทยาศาสตร์ Pty Ltd., ออสเตรเลีย) โดยวิธีการแก้ไขที่ใช้โดยวูอีและสวน (2000) และคาร์สัน, Mee และไรลีย์ (2002)