DGGE analysis was carried out on ea

DGGE analysis was carried out on each PCR amplicon using a DCode™ Universal Mutation Detection System (BioRad, Hercules, CA, USA), following the procedure described previously (De Vero et al., 2006). Electrophoresis was performed in 1-mm polyacrylamide gel (8% [w/v] acrylamide–bisacrylamide 37.5:1) containing a 30–60% urea–formamide denaturing gradient (100% corresponds to 7M urea and 40% [v/v] formamide), increasing in the electrophoretic run direction. The gel was subjected to a constant voltage of 150 V for 4 h at 60 °C in TAE Buffer 1X (50X TAE stock solution consisting in 2 M Tris base, 1 M glacial acetic acid, 50 mM EDTA). After electrophoresis, the DGGE gels were stained in 1X TAE solution containing ethidium bromide (50 μg ml− 1) for 15 min and photographed under a UV illumination using a BioDoc Analyze system (Biometra, Göttingen, Germany).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

DGGE วิเคราะห์ได้ดำเนินการในแต่ละ amplicon PCR ใช้ DCode ™สากลกลายพันธุ์ตรวจสอบระบบ (BioRad เฮอร์คิวลิส CA, USA), วิธีการอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (เด Vero และ al., 2006) ทำ electrophoresis ใน 1 mm polyacrylamide เจล (8% [w/v] อะคริลาไมด์ – bisacrylamide 37.5:1) ประกอบด้วยไล่ denaturing ยูเรีย – formamide 30 – 60% (100% สอดคล้องกับยูเรีย 7 M และ formamide 40% [v/v]), เพิ่มขึ้นในทิศทางที่ทำงานด้วยกัน เจถูกยัดเยียดให้แรงดันคงที่ 150 V สำหรับ h 4 ที่ 60 ° C ในบัฟเฟอร์เต้ 1 X (50 X เต้หุ้นโซลูชันที่ประกอบด้วยใน 2 M ทริสเรทติ้งพื้นฐาน 1 M น้ำแข็งกรดอะซิติก 50 mM EDTA) หลังจาก electrophoresis เจ DGGE มีสีในโซลูชันเต้ X 1 ประกอบด้วยโบรไมด์ ethidium (50 μg ml− 1) สำหรับ 15 นาที และถ่ายภาพภายใต้แสงสว่าง UV ที่ใช้ระบบวิเคราะห์ BioDoc (Biometra, Göttingen เยอรมนี)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์ DGGE ได้รับการดำเนินการในแต่ละ PCR amplicon ใช้ DCode ™นิเวอร์แซลมิวเตชันระบบตรวจจับ (BioRad, Hercules, CA, USA) ดังต่อไปนี้ขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (เดอเวโร et al., 2006) Electrophoresis ได้รับการดำเนินการใน 1 มมเจลอะคริเลต (8% [w / v] acrylamide-bisacrylamide 37.5: 1) ที่มีการไล่ระดับสี denaturing ยูเรีย Formamide 30-60% (100% สอดคล้องกับยูเรีย 7M และ 40% [v / v] ไมด์) เพิ่มขึ้นในทิศทางระยะ electrophoretic เจลที่ถูกยัดเยียดให้แรงดันคงที่ 150 V 4 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียสใน TAE บัฟเฟอร์ 1X (50X TAE แก้ปัญหาประกอบด้วยหุ้นใน 2 ฐาน M Tris 1 M น้ำแข็งกรดอะซิติกขนาด 50 มม EDTA) หลังจาก electrophoresis, เจล DGGE มีการย้อมในสารละลาย 1X TAE ที่มีโบรไมด์ ethidium (50 ไมโครกรัม ML- 1) เป็นเวลา 15 นาทีและถ่ายภาพภายใต้แสงสว่างรังสียูวีโดยใช้ BioDoc วิเคราะห์ระบบ (Biometra, Göttingen, เยอรมนี)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์การทดลองได้ดำเนินการในแต่ละวิธี PCR และการใช้ dcode ™สากลระบบตรวจหาการกลายพันธุ์ ( biorad , Hercules , CA , USA ) , ทำตามขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( เดอเวโร et al . , 2006 ) ในการปฏิบัติ 1-mm polyacrylamide gel electrophoresis ( % [ 8 w / v ] acrylamide – bisacrylamide 37.5 :1 ) ที่มี 30 – 60 % ยูเรีย– Formamide ี่ลาด ( 100% สอดคล้องกับ 7M ยูเรียและ 40% [ 5 / 5 ] Formamide ) เพิ่มขึ้นในทิศทางวิ่ง electrophoretic . เจลภายใต้แรงดันคงที่ 150 V 4 H 60 ° C ( 50x แทแทบัฟเฟอร์ปัจจุบันหุ้นโซลูชั่น ประกอบไปด้วย 2 เมตรจากฐาน 1 เมตร กรดแอซีติก 50 mM EDTA ) หลังจากอิเล็กจากการทดลองใช้ย้อมใน 1x เจลเทสารละลายที่มีทิเดียมโบรไมด์ ( 50 ml μ G − 1 ) 15 นาที และถ่ายภาพภายใต้แสง UV ที่ใช้ biodoc วิเคราะห์ระบบ ( biometra G ö ttingen , เยอรมัน )