and e) identifying the novel IBV สา

and e) identifying the novel IBV สายพันธุ์. The novel IBV สายพันธุ์ thus identified by HRM curve analysis may be further characterized by
sequencing the แอมพลิคอน and aligning the IBV แอมพลิคอน sequence with known IBV sequences. The novel IBV สายพันธุ์ may have about 50%, about 60%, about 70%, about 75%, about 80%,
about 85%, about 90%, about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, or about 99% ความเหมือนกันของลำดับ with any known IBV sequence. The sequence may be นิวคลีโอไทด์ sequence or amino acid sequence (translation of the แอมพลิคอน
sequence).
Another aspect of the วิธี embodiment provides a means for differentiation between infected and vaccinated (DIVA) animals. The วิธี ประกอบรวมด้วย the steps of: a) generating an IBV cDNA from the IBV สายพันธุ์ isolated from an animal; b) exposing the cDNA to a primer pair ซึ่งประกอบรวมด้วย a ฟอร์เวิร์ด primer and a รีเวิร์ส primer in a real-time โพลีเมอเรสเชนรีแอคชัน (PCR) to yield an แอมพลิคอน, โดยที่ the primer pair is specific to the Si gene of IBV genome; c)
performing วีวี (HRM) curve analysis on a double-stranded product ซึ่งประกอบรวมด้วย the แอมพลิคอน immediately after the เรียลไทม์ PCR; and d) analyzing and comparing the HRM
curve thereby determining whether the cDNA is derived from a vaccine-type สายพันธุ์ or a สายพันธุ์ that infected the animal.
One embodiment of the การประดิษฐ์นี้ provides an isolated โพลีนิวคลีโอไทด์ or primer having the sequence as set forth in SEQ ID NO:29 or SEQ ID NO:30.
Another embodiment of the การประดิษฐ์นี้ provides a kit for detecting an IBV สายพันธุ์ ซึ่งประกอบรวมด้วย: a) a primer pair ซึ่งประกอบรวมด้วย a ฟอร์เวิร์ด primer having the sequence as set forth in
SEQ ID NO: 29 and a รีเวิร์ส primer having the sequence as set forth in SEQ ID NO:30; and b) an instruction describing the parameters and conditions to perform เรียลไทม์ PCR.


CSFV
One embodiment of the การประดิษฐ์ provides a process or วิธี of characterizing a สายพันธุ์ of CSFV ซึ่งประกอบรวมด้วย the steps of: a) generating a CSFV cDNA from the CSFV สายพันธุ์ isolated from an animal; b) exposing the cDNA to a primer pair ซึ่งประกอบรวมด้วย a ฟอร์เวิร์ด primer and a
รีเวิร์ส primer in a real-time โพลีเมอเรสเชนรีแอคชัน (PCR) to yield an แอมพลิคอน, โดยที่ the primer pair is specific to the NS5B or 3'NTR region of CSFV genome; c) performing high
resolution melt (HRM) curve analysis on a double-stranded product ซึ่งประกอบรวมด้วย the แอมพลิคอน immediately after the เรียลไทม์ PCR; and d) analyzing and comparing the HRM curve thereby characterizing the CSFV สายพันธุ์.
The ฟอร์เวิร์ด and รีเวิร์ส primers may be selected by aligning the โพลีนิวคลีโอไทด์
sequences of the NS5B or 3'NTR region of known CSFV สายพันธุ์ and comparing the conversed regions of the NS5B or 3 'NTR region. In one aspect of the embodiment, the ฟอร์เวิร์ด primer has a โพลีนิวคลีโอไทด์ sequence as set forth in SEQ ID NO:8 and the รีเวิร์ส primer has a
โพลีนิวคลีโอไทด์ sequence as set forth in SEQ ID NO:9.
NS5B is the RNA-dependent RNA polymerase gene. 3'NTR region is the 3'
nontranslated region of the viral genome. Previous studies have shown (Pan et al., J Vet Diag Inv, 2008) notable T-rich insertions sites in the 3' NTR of the vaccine-type of CSFV which are absent in the wild-type of CSFV making both genes a suitable genetic marker for differentiation
between wild-type and vaccine สายพันธุ์.
The HRM curve analysis may be performed according to manufacturer's instruction.
The เรียลไทม์ PCR may be carried out using the following parameters: a) initial
denaturation at 95°C for 3 seconds, b) denaturation at 95°C for 1 minute, c) annealing at 55°C for
1 minute, d) extension at 72°C for 1 minute, and e) repeating steps b)-d) for 45 times, followed by melting curve analysis (95°C for 1 second, 65°C for 15 seconds and 95°C continuously) and cooling at 45°C for 30 seconds.
The วิธี of the การประดิษฐ์นี้ may be used to characterize and distinguish known CSFV สายพันธุ์. The known CSFV สายพันธุ์ include, but are not limited to, ALD สายพันธุ์, Chinese สายพันธุ์ (C สายพันธุ์), GPE สายพันธุ์ (Japanese สายพันธุ์), C/HVRI สายพันธุ์ (from China, genotype 1.1), Riems


สายพันธุ์ (from China), Alfort 187 สายพันธุ์, Ames สายพันธุ์, Margarita สายพันธุ์, Baker สายพันธุ์, New York สายพันธุ์, Purdue 115 strai), Paderborn สายพันธุ์, Spreda สายพันธุ์, Oregon สายพันธุ์, Singer สายพันธุ์, Osloss สายพันธุ์, Moredun strai, Frijters สายพันธุ์ and other สายพันธุ์ that can be found in the literature.
The การประดิษฐ์ also provides for the identification of a novel สายพันธุ์ of CSFV โดยที่ the CSFV sequence does not align to any of the one or more CSFV sequences with close homology. The วิธี ประกอบรวมด้วย the steps of: a) generating a CSFV cDNA from the CSFV สายพันธุ์ isolated from an animal; b) exposing the cDNA to a primer pair ซึ่งประกอบรวมด้วย a ฟอร์เวิร์ด primer and a
รีเวิร์ส primer in a real-time โพลีเมอเรสเชนรีแอคชัน (PCR) to yield an แอมพลิคอน, โดยที่ the primer pair is specific to the NS5B or 3'NTR region of CSFV genome; c) performing high
resolution melt (HRM) curve analysis on a double-stranded product ซึ่งประกอบรวมด้วย the แอมพลิคอน
immediately after the เรียลไทม์ PCR; d) analyzing and comparing the HRM curve; and e)
identifying a novel CSFV สายพันธุ์. The novel CSFV สายพันธุ์ thus identified by HRM curve analysis may be further characterized by sequencing the แอมพลิคอน and aligning the CSFV แอมพลิคอน
sequence with known CSFV sequences. The novel CSFV สายพันธุ์ may have about 50%, about
60%, about 70%, about 75%, about 80%, about 85%, about 90%, about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, or about 99% ความเหมือนกันของลำดับ with any known CSFV sequence. The sequence may be นิวคลีโอไทด์ sequence or amino acid
sequence (translation of the แอมพลิคอน sequence).
Another aspect of the วิธี embodiment provides a means for differentiation between infected and vaccinated (DIVA) animals. The วิธี ประกอบรวมด้วย the steps of: a) generating a CSFV cDNA from the CSFV สายพันธุ์ isolated from an animal; b) exposing the cDNA to a primer pair ซึ่งประกอบรวมด้วย a ฟอร์เวิร์ด primer and a รีเวิร์ส primer in a real-time โพลีเมอเรสเชนรีแอคชัน (PCR) to yield an แอมพลิคอน, โดยที่ the primer pair is specific to the NS5B or 3'NTR region of CSFV genome; c) performing วีวี (HRM) curve analysis on a double-stranded product ซึ่งประกอบรวมด้วย the แอมพลิคอน immediately after the เรียลไทม์ PCR; and c) analyzing and comparing the HRM curve thereby determining whether the cDNA is derived from a vaccine สายพันธุ์ or a สายพันธุ์ that infected the animal.
One embodiment of the การประดิษฐ์นี้ provides an isolated โพลีนิวคลีโอไทด์ having the sequence as set forth in SEQ ID NO:8 or SEQ ID NO:9.
Another embodiment of the การประดิษฐ์นี้ provides a kit for detecting a CSFV สายพันธุ์ ซึ่งประกอบรวมด้วย: a) a primer pair ซึ่งประกอบรวมด้วย a ฟอร์เวิร์ด primer having the sequence as set forth in
SEQ ID NO:8 and a รีเวิร์ส primer having the sequence as set forth in SEQ ID NO:9; and b) an instruction describing the parameters and conditions to perform เรียลไทม์ PCR.


NDV
One embodiment of the การประดิษฐ์ provides a process or วิธี of characterizing a สายพันธุ์ of NDV ซึ่งประกอบรวมด้วย the steps of: a) generating an NDV cDNA from the NDV สายพันธุ์ isolated from an animal; b) exposing the cDNA to a primer pair ซึ่งประกอบรวมด้วย a ฟอร์เวิร์ด primer and a
รีเวิร์ส primer in a real-time โพลีเมอเรสเชนรีแอคชัน (PCR) to yield an แอมพลิคอน, โดยที่ the primer pair is specific to the F, NP, P, M, FIN or L gene of NDV genome; c) performing วีวี (HRM) curve analysis on a double-stranded product ซึ่งประกอบรวมด้วย the แอมพลิคอน immediately after the เรียลไทม์ PCR; and d) analyzing and comparing the HRM curve thereby characterizing the NDV สายพันธุ์.
The ฟอร์เวิร์ด and รีเวิร์ส primers may be selected by aligning the โพลีนิวคลีโอไทด์
sequences of the F gene, or NP gene, or P gene, or M gene, or HN gene, or L gene of known
NDV สายพันธุ์ respectively, and comparing the conversed regions of the F gene, or NP gene, or P gene, or M gene, or HN gene, or L gene. In one aspect of the embodiment, the ฟอร์เวิร์ด primer has a โพลีนิวคลีโอไทด์ sequence as set forth in SEQ ID NO:17 or 31 and the รีเวิร์ส primer has a โพลีนิวคลีโอไทด์ sequence as set forth in SEQ ID NO:18 or 32.
The fusion (F) protein is responsible in

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

และอี) ระบุสายพันธุ์ IBV นวนิยาย นวนิยาย IBV สายพันธุ์ระบุวิเคราะห์โค้ง HRM จึง อาจเป็นอีกลักษณะ ลำดับเบสแอมพลิคอน และจัดเรียงลำดับแอมพลิคอน IBV ด้วยรู้จัก IBV ลำดับ นวนิยาย IBV สายพันธุ์ได้ประมาณ 50% ประมาณ 60% ประมาณ 70% ประมาณ 75% ประมาณ 80% ประมาณ 85% ประมาณ 90% ประมาณ 91% ประมาณ 92% ประมาณ 93% ประมาณ 94% ประมาณ 95% ประมาณ 96% ประมาณ 97%, 98% หรือประมาณ 99% ความเหมือนกันของลำดับ มีลำดับใด IBV รู้จัก อาจลำดับที่นิวคลีโอไทด์ลำดับหรือกรดอะมิโนลำดับ (แปลของแอมพลิคอน ลำดับ)ของลื่นวิธีแสดงวิธีการสร้างความแตกต่างระหว่างสัตว์ (DIVA) ที่ติดไวรัส และป้องกันโรค วิธีประกอบรวมด้วยขั้นตอนการ: การ) สร้าง cDNA IBV จากสายพันธุ์ IBV แยกต่างหากจากสัตว์ ขเปิดเผย cDNA จะซึ่งประกอบรวมด้วยคู่กับรองพื้นพื้นฟอร์เวิร์ดและรีเวิร์สรองพื้นในโพลีเมอเรสเชนรีแอคชันแบบเรียลไทม์ (PCR) ให้เป็นแอมพลิคอน โดยที่คู่รองพื้นโดยเฉพาะยีนซีของจีโนม IBV c) ทำการวิเคราะห์โค้งวีวี (HRM) ในซึ่งประกอบรวมด้วยผลิตภัณฑ์ขนคู่แอมพลิคอนทันทีหลังจากเรียลไทม์ PCR และ d) วิเคราะห์ และเปรียบเทียบการ HRM จึงเป็นการกำหนดว่า cDNA ได้มาจากการวัคซีนชนิดสายพันธุ์หรือสายพันธุ์ที่ติดเชื้อสัตว์โค้งศูนย์รวมแห่งหนึ่งการประดิษฐ์นี้ให้โพลีนิวคลีโอไทด์แยกการรองพื้นที่มีลำดับเป็นชุดไว้ในลำดับ ID ไม่: 29 หรือลำดับ ID ไม่: 30 ศูนย์รวมอีกแห่งการประดิษฐ์นี้มีชุดสำหรับการตรวจสอบการ IBV สายพันธุ์ซึ่งประกอบรวมด้วย: เป็น) ซึ่งประกอบรวมด้วยเป็นคู่รองพื้นรองพื้นฟอร์เวิร์ดการมีลำดับเป็นชุดออกมาใน ลำดับรหัส NO: 29 และพื้นรีเวิร์สที่มีลำดับเป็นชุดไว้ในลำดับ ID ไม่: 30 และ b เป็นคำสั่งอธิบายพารามิเตอร์และเงื่อนไขให้ทำเรียลไทม์ PCRCSFVศูนย์รวมแห่งหนึ่งการประดิษฐ์มีกระบวนการหรือวิธีของการกำหนดลักษณะของสายพันธุ์ของ CSFV ซึ่งประกอบรวมด้วยขั้นตอนของ: การ) สร้าง CSFV cDNA จากสายพันธุ์ CSFV ที่แยกต่างหากจากสัตว์ ข cDNA ซึ่งประกอบรวมด้วยคู่กับรองพื้นพื้นฟอร์เวิร์ดเพื่อเปิดเผยและ รองพื้นรีเวิร์สในโพลีเมอเรสเชนรีแอคชันแบบเรียลไทม์ (PCR) ให้เป็นแอมพลิคอน โดยที่คู่รองพื้นโดยเฉพาะ NS5B หรือ 3 ภูมิภาคเอ็นทีอาร์ของกลุ่ม CSFV ค) ประสิทธิภาพสูง ความละเอียดละลายวิเคราะห์ซึ่งประกอบรวมด้วยขนคู่ผลิตภัณฑ์แอมพลิคอนโค้ง (HRM) ทันทีหลังจากเรียลไทม์ PCR และ d) วิเคราะห์ และเปรียบเทียบ HRM เส้นโค้งจึงกำหนดลักษณะ CSFV สายพันธุ์สามารถเลือกไพรเมอร์ฟอร์เวิร์ดและรีเวิร์สโดยโพลีนิวคลีโอไทด์ลำดับของ NS5B หรือ 3 ภูมิภาคเอ็นทีอาร์ CSFV สายพันธุ์รู้จักและเปรียบเทียบภูมิภาค conversed NS5B หรือ 3 ' ภูมิภาคเอ็นทีอาร์ ในด้านหนึ่งของการลื่น พื้นฟอร์เวิร์ดมีลำดับโพลีนิวคลีโอไทด์เป็นชุดไว้ในลำดับ ID ไม่: 8 และรองพื้นรีเวิร์สมีการ โพลีนิวคลีโอไทด์ sequence as set forth in SEQ ID NO:9.NS5B is the RNA-dependent RNA polymerase gene. 3'NTR region is the 3'nontranslated region of the viral genome. Previous studies have shown (Pan et al., J Vet Diag Inv, 2008) notable T-rich insertions sites in the 3' NTR of the vaccine-type of CSFV which are absent in the wild-type of CSFV making both genes a suitable genetic marker for differentiation between wild-type and vaccine สายพันธุ์.The HRM curve analysis may be performed according to manufacturer's instruction.The เรียลไทม์ PCR may be carried out using the following parameters: a) initialdenaturation at 95°C for 3 seconds, b) denaturation at 95°C for 1 minute, c) annealing at 55°C for1 minute, d) extension at 72°C for 1 minute, and e) repeating steps b)-d) for 45 times, followed by melting curve analysis (95°C for 1 second, 65°C for 15 seconds and 95°C continuously) and cooling at 45°C for 30 seconds.The วิธี of the การประดิษฐ์นี้ may be used to characterize and distinguish known CSFV สายพันธุ์. The known CSFV สายพันธุ์ include, but are not limited to, ALD สายพันธุ์, Chinese สายพันธุ์ (C สายพันธุ์), GPE สายพันธุ์ (Japanese สายพันธุ์), C/HVRI สายพันธุ์ (from China, genotype 1.1), Riemsสายพันธุ์ (from China), Alfort 187 สายพันธุ์, Ames สายพันธุ์, Margarita สายพันธุ์, Baker สายพันธุ์, New York สายพันธุ์, Purdue 115 strai), Paderborn สายพันธุ์, Spreda สายพันธุ์, Oregon สายพันธุ์, Singer สายพันธุ์, Osloss สายพันธุ์, Moredun strai, Frijters สายพันธุ์ and other สายพันธุ์ that can be found in the literature.The การประดิษฐ์ also provides for the identification of a novel สายพันธุ์ of CSFV โดยที่ the CSFV sequence does not align to any of the one or more CSFV sequences with close homology. The วิธี ประกอบรวมด้วย the steps of: a) generating a CSFV cDNA from the CSFV สายพันธุ์ isolated from an animal; b) exposing the cDNA to a primer pair ซึ่งประกอบรวมด้วย a ฟอร์เวิร์ด primer and a รีเวิร์ส primer in a real-time โพลีเมอเรสเชนรีแอคชัน (PCR) to yield an แอมพลิคอน, โดยที่ the primer pair is specific to the NS5B or 3'NTR region of CSFV genome; c) performing high resolution melt (HRM) curve analysis on a double-stranded product ซึ่งประกอบรวมด้วย the แอมพลิคอน immediately after the เรียลไทม์ PCR; d) analyzing and comparing the HRM curve; and e) identifying a novel CSFV สายพันธุ์. The novel CSFV สายพันธุ์ thus identified by HRM curve analysis may be further characterized by sequencing the แอมพลิคอน and aligning the CSFV แอมพลิคอน sequence with known CSFV sequences. The novel CSFV สายพันธุ์ may have about 50%, about 60%, about 70%, about 75%, about 80%, about 85%, about 90%, about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, or about 99% ความเหมือนกันของลำดับ with any known CSFV sequence. The sequence may be นิวคลีโอไทด์ sequence or amino acid sequence (translation of the แอมพลิคอน sequence).Another aspect of the วิธี embodiment provides a means for differentiation between infected and vaccinated (DIVA) animals. The วิธี ประกอบรวมด้วย the steps of: a) generating a CSFV cDNA from the CSFV สายพันธุ์ isolated from an animal; b) exposing the cDNA to a primer pair ซึ่งประกอบรวมด้วย a ฟอร์เวิร์ด primer and a รีเวิร์ส primer in a real-time โพลีเมอเรสเชนรีแอคชัน (PCR) to yield an แอมพลิคอน, โดยที่ the primer pair is specific to the NS5B or 3'NTR region of CSFV genome; c) performing วีวี (HRM) curve analysis on a double-stranded product ซึ่งประกอบรวมด้วย the แอมพลิคอน immediately after the เรียลไทม์ PCR; and c) analyzing and comparing the HRM curve thereby determining whether the cDNA is derived from a vaccine สายพันธุ์ or a สายพันธุ์ that infected the animal.One embodiment of the การประดิษฐ์นี้ provides an isolated โพลีนิวคลีโอไทด์ having the sequence as set forth in SEQ ID NO:8 or SEQ ID NO:9.
Another embodiment of the การประดิษฐ์นี้ provides a kit for detecting a CSFV สายพันธุ์ ซึ่งประกอบรวมด้วย: a) a primer pair ซึ่งประกอบรวมด้วย a ฟอร์เวิร์ด primer having the sequence as set forth in
SEQ ID NO:8 and a รีเวิร์ส primer having the sequence as set forth in SEQ ID NO:9; and b) an instruction describing the parameters and conditions to perform เรียลไทม์ PCR.


NDV
One embodiment of the การประดิษฐ์ provides a process or วิธี of characterizing a สายพันธุ์ of NDV ซึ่งประกอบรวมด้วย the steps of: a) generating an NDV cDNA from the NDV สายพันธุ์ isolated from an animal; b) exposing the cDNA to a primer pair ซึ่งประกอบรวมด้วย a ฟอร์เวิร์ด primer and a
รีเวิร์ส primer in a real-time โพลีเมอเรสเชนรีแอคชัน (PCR) to yield an แอมพลิคอน, โดยที่ the primer pair is specific to the F, NP, P, M, FIN or L gene of NDV genome; c) performing วีวี (HRM) curve analysis on a double-stranded product ซึ่งประกอบรวมด้วย the แอมพลิคอน immediately after the เรียลไทม์ PCR; and d) analyzing and comparing the HRM curve thereby characterizing the NDV สายพันธุ์.
The ฟอร์เวิร์ด and รีเวิร์ส primers may be selected by aligning the โพลีนิวคลีโอไทด์
sequences of the F gene, or NP gene, or P gene, or M gene, or HN gene, or L gene of known
NDV สายพันธุ์ respectively, and comparing the conversed regions of the F gene, or NP gene, or P gene, or M gene, or HN gene, or L gene. In one aspect of the embodiment, the ฟอร์เวิร์ด primer has a โพลีนิวคลีโอไทด์ sequence as set forth in SEQ ID NO:17 or 31 and the รีเวิร์ส primer has a โพลีนิวคลีโอไทด์ sequence as set forth in SEQ ID NO:18 or 32.
The fusion (F) protein is responsible in

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

และ e) ระบุนวนิยายหลอดลมอักเสบติดต่อสายพันธุ์ นวนิยายหลอดลมอักเสบติดต่อสายพันธุ์จึงระบุโดยการวิเคราะห์เส้นโค้งการบริหารทรัพยากรมนุษย์อาจจะมีลักษณะต่อไปโดย
ลำดับแอมพลิคอนและสอดคล้องหลอดลมอักเสบติดต่อแอมพลิคอนลำดับที่มีลำดับที่รู้จักกันหลอดลมอักเสบติดต่อ นวนิยายหลอดลมอักเสบติดต่อสายพันธุ์อาจจะมีประมาณ 50% ประมาณ 60%, 70%, 75%, 80%,
85% ประมาณ 90% ประมาณ 91% ประมาณ 92% ประมาณ 93% ประมาณ 94% ประมาณ 95% ประมาณ 96% ประมาณ 97% ประมาณ 98% หรือประมาณ 99% ความเหมือนกันของลำดับที่มีลำดับหลอดลมอักเสบติดต่อใด ๆ อาจจะเป็นลำดับนิวคลีโอไทด์ลำดับหรือลำดับกรดอะมิโน (แปลของแอมพลิคอน
ลำดับ).
ทุกแง่มุมของศูนย์รวมอีกวิธีให้หมายถึงสำหรับความแตกต่างระหว่างการติดเชื้อและการฉีดวัคซีน (DIVA) สัตว์ วิธีประกอบรวมด้วยขั้นตอนของก) การสร้าง cDNA หลอดลมอักเสบติดต่อจากหลอดลมอักเสบติดต่อสายพันธุ์ที่แยกได้จากสัตว์; ข) การเปิดเผยยีนที่จะคู่ไพรเมอร์ซึ่งประกอบรวมด้วยฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์และรีเวิร์สไพรเมอร์ในเรียลไทม์โพลีเมอเรสเชนรีแอคชัน (PCR) เพื่อให้แอมพลิคอน, โดยที่คู่ไพรเมอร์เป็นเฉพาะกับยีนศรีของจีโนมหลอดลมอักเสบติดต่อ; ค)
การแสดงวีวี (HRM) การวิเคราะห์โค้งบนผลิตภัณฑ์เกลียวคู่ซึ่งประกอบรวมด้วยแอมพลิคอนทันทีหลังจากที่เรียลไทม์พีซีอาร์; และง) การวิเคราะห์และเปรียบเทียบการบริหารทรัพยากรมนุษย์
โค้งจึงพิจารณาว่ายีนที่ได้มาจากการฉีดวัคซีนชนิดสายพันธุ์หรือสายพันธุ์ที่ติดเชื้อสัตว์.
หนึ่งในศูนย์รวมของการประดิษฐ์นี้ให้แยกโพลีนิวคลีโอไทด์ หรือไพรเมอร์ที่มีลำดับที่กำหนดไว้ใน SEQ ID NO: 29 หรือ SEQ ID NO. 30
ศูนย์รวมของการประดิษฐ์นี้มีชุดสำหรับการตรวจสอบหลอดลมอักเสบติดต่อสายพันธุ์ซึ่งประกอบรวมด้วยอีก:) คู่ไพรเมอร์ซึ่งประกอบรวม ด้วยไพรเมอร์ที่มีฟอร์เวิร์ดลำดับที่กำหนดไว้ใน
SEQ ID NO: 29 และรีเวิร์สไพรเมอร์ที่มีลำดับตามที่กำหนดไว้ใน SEQ ID NO: 30; และ b) การเรียนการสอนที่อธิบายพารามิเตอร์และเงื่อนไขในการดำเนินการเรียลไทม์พีซีอาร์. CSFV หนึ่งศูนย์รวมของการประดิษฐ์ให้กระบวนการหรือวิธีการลักษณะสายพันธุ์ของ CSFV ซึ่งประกอบรวมด้วยขั้นตอนของก) การสร้าง CSFV cDNA จาก CSFV สายพันธุ์ที่แยกได้จากสัตว์; ข) การเปิดเผยยีนที่จะคู่ไพรเมอร์ซึ่งประกอบรวมด้วยฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์และรีเวิร์สไพรเมอร์ในเรียลไทม์โพลีเมอเรสเชนรีแอคชัน (PCR) เพื่อให้แอมพลิคอน, โดยที่คู่ไพรเมอร์เป็นเฉพาะกับ NS5B หรือภูมิภาค 3'NTR ของจีโนม CSFV; ค) การดำเนินการสูงละลายความละเอียด (HRM) การวิเคราะห์โค้งบนผลิตภัณฑ์เกลียวคู่ซึ่งประกอบรวมด้วยแอมพลิคอนทันทีหลังจากที่เรียลไทม์พีซีอาร์; และง) การวิเคราะห์และเปรียบเทียบการบริหารทรัพยากรมนุษย์จึงโค้งพัฒนาการ CSFV สายพันธุ์. ฟอร์เวิร์ดและรีเวิร์สไพรเมอร์อาจจะถูกเลือกโดยจัดโพลีนิวคลีโอไทด์ลำดับของภูมิภาค NS5B หรือ 3'NTR ของ CSFV ที่รู้จักกัน สายพันธุ์และเปรียบเทียบภูมิภาคพูดคุยของ NS5B หรือ 3 'ภูมิภาค NTR ในแง่มุมหนึ่งของศูนย์รวมที่มีฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์โพลีนิวคลีโอไทด์ลำดับที่กำหนดไว้ใน SEQ ID NO: 8 และไพรเมอร์รีเวิร์สมีโพลีนิวคลีโอไทด์ลำดับเป็นชุด ไว้ใน SEQ ID NO:. 9 NS5B เป็น RNA RNA ขึ้นอยู่กับยีนโพลิเมอร์ ภูมิภาค 3'NTR เป็น 3 ' ภูมิภาค nontranslated ของจีโนมของไวรัส การศึกษาก่อนหน้านี้ได้แสดงอยู่ (แพน et al., J Vet Diag Inv 2008) แทรกเด่น T-ที่อุดมไปด้วยเว็บไซต์ใน 3 'NTR ของวัคซีนชนิดของ CSFV ที่มีอยู่ในป่าชนิดของ CSFV ทำให้ยีนทั้งสองเหมาะสม เครื่องหมายทางพันธุกรรมสำหรับความแตกต่าง. ระหว่างป่าชนิดและวัคซีนสายพันธุ์วิเคราะห์เส้นโค้งการบริหารทรัพยากรมนุษย์อาจจะดำเนินการตามคำแนะนำของผู้ผลิต. เรียลไทม์พีซีอาร์อาจจะดำเนินการโดยใช้พารามิเตอร์ต่อไปนี้:) เริ่มต้นdenaturation ที่ 95 ° C เป็นเวลา 3 วินาทีข) denaturation ที่ 95 ° C เป็นเวลา 1 นาทีค) การอบที่ 55 องศาเซลเซียสเป็นเวลา1 นาทีง) ส่วนขยายที่ 72 ° C เป็นเวลา 1 นาทีและ e) ทำซ้ำขั้นตอนข) -d) 45 ครั้งตาม โดยละลายวิเคราะห์เส้นโค้ง (95 ° C เป็นเวลา 1 วินาที 65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 วินาทีและ 95 ° C อย่างต่อเนื่อง) และการระบายความร้อนที่ 45 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที. วิธีของการประดิษฐ์นี้อาจจะใช้ในลักษณะและความแตกต่างที่รู้จักกัน CSFV สายพันธุ์ CSFV ที่รู้จักกันในสายพันธุ์รวมถึง แต่ไม่ จำกัด เฉพาะมรกตสายพันธุ์จีนสายพันธุ์ (C สายพันธุ์) GPE สายพันธุ์ (สายพันธุ์ญี่ปุ่น), C / HVRI สายพันธุ์ (จากประเทศจีน genotype 1.1) Riems สาย พันธุ์ (จากจีน) Alfort 187 สายพันธุ์อาเมสสายพันธุ์, Margarita สายพันธุ์เบเกอร์สายพันธุ์นิวยอร์กสายพันธุ์เพอร์ดู 115 strai) พาเดอร์สายพันธุ์, Spreda สายพันธุ์โอเรกอนสายพันธุ์, นักร้องสายพันธุ์, Osloss สายพันธุ์, Moredun strai, Frijters สายพันธุ์และสายพันธุ์อื่น ๆ ที่สามารถพบได้ในวรรณคดี. การประดิษฐ์นอกจากนี้ยังมีการจำแนกสายพันธุ์นวนิยายของ CSFV โดยที่ลำดับ CSFV ไม่สอดคล้องใด ๆ ของหนึ่งหรือ เพิ่มเติมลำดับ CSFV กับที่คล้ายคลึงกันอย่างใกล้ชิด วิธีประกอบรวมด้วยขั้นตอนของก) การสร้าง cDNA CSFV จาก CSFV สายพันธุ์ที่แยกได้จากสัตว์; ข) การเปิดเผยยีนที่จะคู่ไพรเมอร์ซึ่งประกอบรวมด้วยฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์และรีเวิร์สไพรเมอร์ในเรียลไทม์โพลีเมอเรสเชนรีแอคชัน (PCR) เพื่อให้แอมพลิคอน, โดยที่คู่ไพรเมอร์เป็นเฉพาะกับ NS5B หรือภูมิภาค 3'NTR ของจีโนม CSFV; ค) การดำเนินการสูงละลายความละเอียด (HRM) การวิเคราะห์โค้งบนผลิตภัณฑ์เกลียวคู่ซึ่งประกอบรวมด้วยแอมพลิคอนทันทีหลังจากที่เรียลไทม์พีซีอาร์; ง) การวิเคราะห์และเปรียบเทียบเส้นโค้งการบริหารทรัพยากรมนุษย์; และ e) ระบุ CSFV นวนิยายสายพันธุ์ CSFV นวนิยายสายพันธุ์จึงระบุโดยการวิเคราะห์เส้นโค้งการบริหารทรัพยากรมนุษย์อาจจะมีลักษณะต่อไปโดยลำดับแอมพลิคอนและสอดคล้อง CSFV แอมพลิคอนลำดับที่มีลำดับที่รู้จักกัน CSFV CSFV นวนิยายสายพันธุ์อาจจะมีประมาณ 50% ประมาณ60%, 70%, 75%, 80%, 85% ประมาณ 90% ประมาณ 91% ประมาณ 92% ประมาณ 93% ประมาณ 94% ประมาณ 95% ประมาณ 96% ประมาณ 97% ประมาณ 98% หรือประมาณ 99% ความเหมือนกันของลำดับที่มีลำดับ CSFV ใด ๆ อาจจะเป็นลำดับนิวคลีโอไทด์ลำดับหรือกรดอะมิโนลำดับ (แปลของแอมพลิคอนลำดับ). ทุกแง่มุมของศูนย์รวมอีกวิธีให้หมายถึงสำหรับความแตกต่างระหว่างการติดเชื้อและการฉีดวัคซีน (DIVA) สัตว์ วิธีประกอบรวมด้วยขั้นตอนของก) การสร้าง cDNA CSFV จาก CSFV สายพันธุ์ที่แยกได้จากสัตว์; ข) การเปิดเผยยีนที่จะคู่ไพรเมอร์ซึ่งประกอบรวมด้วยฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์และรีเวิร์สไพรเมอร์ในเรียลไทม์โพลีเมอเรสเชนรีแอคชัน (PCR) เพื่อให้แอมพลิคอน, โดยที่คู่ไพรเมอร์เป็นเฉพาะกับ NS5B หรือภูมิภาค 3'NTR ของจีโนม CSFV; ค) การแสดงวีวี (HRM) การวิเคราะห์โค้งบนผลิตภัณฑ์เกลียวคู่ซึ่งประกอบรวมด้วยแอมพลิคอนทันทีหลังจากที่เรียลไทม์พีซีอาร์; และค) การวิเคราะห์และเปรียบเทียบเส้นโค้งการบริหารทรัพยากรมนุษย์จึงพิจารณาว่ายีนที่ได้มาจากการฉีดวัคซีนสายพันธุ์หรือสายพันธุ์ที่ติดเชื้อสัตว์. หนึ่งในศูนย์รวมของการประดิษฐ์นี้ให้แยกโพลีนิวคลีโอไทด์ที่มี ลำดับที่กำหนดไว้ใน SEQ ID NO: 8 หรือ SEQ ID NO:. 9 ศูนย์รวมของการประดิษฐ์นี้มีชุดสำหรับการตรวจสอบ CSFV สายพันธุ์ซึ่งประกอบรวมด้วยอีก:) คู่ไพรเมอร์ซึ่งประกอบรวมด้วยไพรเมอร์ฟอร์เวิร์ด มีลำดับที่กำหนดไว้ในSEQ ID NO: 8 และรีเวิร์สไพรเมอร์ที่มีลำดับที่กำหนดไว้ใน SEQ ID NO: 9; และ b) การเรียนการสอนที่อธิบายพารามิเตอร์และเงื่อนไขในการดำเนินการเรียลไทม์พีซีอาร์. NDV หนึ่งศูนย์รวมของการประดิษฐ์ให้กระบวนการหรือวิธีการลักษณะสายพันธุ์ของ NDV ซึ่งประกอบรวมด้วยขั้นตอนของก) การสร้าง NDV cDNA จาก NDV สายพันธุ์ที่แยกได้จากสัตว์; ข) การเปิดเผยยีนที่จะคู่ไพรเมอร์ซึ่งประกอบรวมด้วยฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์และรีเวิร์สไพรเมอร์ในเรียลไทม์โพลีเมอเรสเชนรีแอคชัน (PCR) เพื่อให้แอมพลิคอน, โดยที่คู่ไพรเมอร์เป็นเฉพาะกับ F, NP, P, M, FIN หรือยีน L ของจีโนม NDV; ค) การแสดงวีวี (HRM) การวิเคราะห์โค้งบนผลิตภัณฑ์เกลียวคู่ซึ่งประกอบรวมด้วยแอมพลิคอนทันทีหลังจากที่เรียลไทม์พีซีอาร์; และง) การวิเคราะห์และเปรียบเทียบเส้นโค้งการบริหารทรัพยากรมนุษย์จึงพัฒนาการ NDV สายพันธุ์. ฟอร์เวิร์ดและรีเวิร์สไพรเมอร์อาจจะถูกเลือกโดยจัดโพลีนิวคลีโอไทด์ลำดับของยีน F หรือยีน NP หรือ P ยีนหรือยีน M หรือ HN ยีนหรือยีนลิตรรู้จักNDV สายพันธุ์ตามลำดับและเมื่อเทียบกับภูมิภาคพูดคุยของยีน F หรือ NP ยีนหรือยีน P, M หรือยีนหรือยีน HN หรือยีน L ในแง่มุมหนึ่งของศูนย์รวมที่มีฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์โพลีนิวคลีโอไทด์ลำดับที่กำหนดไว้ใน SEQ ID NO: 17 หรือ 31 และไพรเมอร์รีเวิร์สมีโพลีนิวคลีโอไทด์ลำดับ ตามที่กำหนดไว้ใน SEQ ID NO: 18 หรือ 32 ฟิวชั่น (F) โปรตีนเป็นผู้รับผิดชอบในการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

และ E ) ระบุสายพันธุ์ IBV นวนิยาย ส่วน IBV นวนิยายสายพันธุ์จึงระบุโดยการวิเคราะห์เส้นโค้งหรืออาจจะเพิ่มเติมลักษณะ
ลําดับแอมพลิคอนจัดเรียงลำดับและ IBV แอมพลิคอนทราบ IBV ลำดับ การสายพันธุ์ IBV นวนิยายอาจจะประมาณ 50% , 60% , 70% , 75% , ประมาณ 80%
ประมาณ 85% , เกี่ยวกับ 90% ประมาณ 91 %ประมาณ 92 % ประมาณ 93% ประมาณ 94 , 95 , 96 , 97 , 98 % หรือประมาณ 99% ความเหมือนกันของลำดับกับรู้จัก IBV ลำดับ ลำดับอาจจะดับนิวคลีโอไทด์หรือลำดับกรดอะมิโน ( แปลจากแอมพลิคอน

ลำดับ )อีกมุมของวิธีศูนย์รวมให้หมายถึงความแตกต่างระหว่างที่ติดเชื้อและวัคซีน ( นักร้อง ) สัตว์ การวิธีประกอบรวมด้วยขั้นตอน : ) สร้าง IBV cDNA จาก IBV สายพันธุ์แยกจากสัตว์ข ) การเปิดเผยวิธีให้รองพื้นคู่ไพรเมอร์และซึ่งประกอบรวมด้วยฟอร์เวิร์ดรองพื้นรีเวิร์สในโพลีเมอเรสเชนรีแอคชันเรียลไทม์ ( PCR ) เพื่อให้ผลผลิตแอมพลิคอนโดยที่ , ไพรเมอร์คู่ที่เฉพาะเจาะจงกับยีนของ IBV ศรี ( C )
;แสดงวีวี ( HRM ) การวิเคราะห์เส้นโค้งบนคู่ตกค้างในผลิตภัณฑ์ซึ่งประกอบรวมด้วยแอมพลิคอนทันทีหลังจากที่เรียลไทม์ PCR ; D ) และวิเคราะห์เปรียบเทียบ HRM
โค้งจึงระบุว่าวิธีที่ได้มาจากชนิดวัคซีนสายพันธุ์หรือสายพันธุ์ที่ติดเชื้อสัตว์
หนึ่งศูนย์รวมของการประดิษฐ์นี้ให้แยกโพลีนิวคลีโอไทด์หรือไพรเมอร์มีลำดับเป็นชุดออกมาใน seq id : 29 หรือ seq ไม่มี ID : 30
อีกศูนย์รวมของการประดิษฐ์นี้มีอุปกรณ์สำหรับตรวจจับ IBV สายพันธุ์ซึ่งประกอบรวมด้วย :) ไพรเมอร์คู่ซึ่งประกอบรวมด้วยเป็นฟอร์เวิร์ดรองพื้นมีลำดับเป็นชุดออกมาใน
seq ไม่มี ID : 29 และรีเวิร์สรองพื้นมีลำดับเป็นชุดออกมาใน seq id : 30 ; และ b ) การอธิบายตัวแปรและเงื่อนไขการเรียลไทม์



และ PCRหนึ่งศูนย์รวมของการประดิษฐ์มีกระบวนการหรือวิธีเป็นสายพันธุ์ของลักษณะของรูปแบบซึ่งประกอบรวมด้วยขั้นตอน : ) สร้างรูปแบบดีเอ็นเอจากสายพันธุ์และแยกจากสัตว์ ; B ) เปิดเผยวิธีให้รองพื้นคู่ซึ่งประกอบรวมด้วยรองพื้นฟอร์เวิร์ดและ
รีเวิร์สไพรเมอร์ในโพลีเมอเรสเชนรีแอคชันเรียลไทม์ ( PCR ) เพื่อให้ผลผลิตแอมพลิคอนโดยที่ , ไพรเมอร์คู่ที่เฉพาะเจาะจงเพื่อ ns5b หรือ 3'ntr ภูมิภาคและจีโนม ; C ) แสดงความละเอียดสูง
ละลาย ( HRM ) การวิเคราะห์เส้นโค้งบนคู่ตกค้างในผลิตภัณฑ์ซึ่งประกอบรวมด้วยแอมพลิคอนทันทีหลังจากที่เรียลไทม์ PCR ;และ D ) วิเคราะห์และเปรียบเทียบเส้นโค้ง HRM โดยลักษณะรูปแบบสายพันธุ์ .
ฟอร์เวิร์ดรีเวิร์สไพรเมอร์และอาจจะถูกเลือกโดยการจัดเรียงลำดับโพลีนิวคลีโอไทด์
ของ ns5b หรือ 3'ntr ภูมิภาคเป็นที่รู้จักและสายพันธุ์เปรียบเทียบมากกว่าภูมิภาคของ ns5b หรือ 3 ' NTR ) ในแง่มุมหนึ่งของรูปร่างการฟอร์เวิร์ด primer ได้ลำดับ ตามที่กำหนดไว้ในโพลีนิวคลีโอไทด์ seq id ไม่มี : 8 และรีเวิร์ส primer ได้ลำดับ
โพลีนิวคลีโอไทด์ตามที่กำหนดไว้ใน seq id : 9
ns5b เป็นอาร์เอ็นเอ ( RNA Polymerase ยีน 3'ntr ภาค 3 '
nontranslated ภูมิภาคของจีโนมไวรัส การศึกษาก่อนหน้านี้ได้แสดง ( แพน et al . , J diag INV สัตวแพทย์ ,2008 ) เด่น t-rich ครั้งเว็บไซต์ใน 3 ' NTR ของวัคซีนชนิดของรูปแบบซึ่งจะไม่อยู่ในรูปแบบของของทำให้ทั้งสองยีนเครื่องหมายพันธุกรรมที่เหมาะสมสำหรับความแตกต่างระหว่าง ยา และวัคซีนสายพันธุ์
.
หรือเส้นโค้งการวิเคราะห์อาจจะดำเนินการตามคำแนะนำของผู้ผลิต เรียลไทม์
) อาจจะดำเนินการโดยใช้ พารามิเตอร์ต่อไปนี้ :)
( เริ่มต้นที่ 95 องศา C เป็นเวลา 3 วินาที ( B ) ที่ 95 องศา C เป็นเวลา 1 นาที , C ) อบอ่อนที่อุณหภูมิ 55 องศา C
1 นาที , D ) นามสกุลที่ 72 °องศาเซลเซียสนาน 1 นาที และทำซ้ำขั้นตอน e ) b ) D ) 45 ครั้ง รองลงมา คือ ละลาย การวิเคราะห์ทางโค้ง ( 95 องศา C เป็นเวลา 1 วินาที , 65 ° C เป็นเวลา 15 วินาทีและ 95 องศา C อย่างต่อเนื่อง ) และเย็นที่ 45 ° C
30 วินาทีการวิธีของการประดิษฐ์นี้อาจถูกใช้เพื่ออธิบายลักษณะและความแตกต่างและรู้จักสายพันธุ์ . เป็นที่รู้จักและสายพันธุ์รวมถึง แต่ไม่ จำกัด สายพันธุ์ ald , จีน , สายพันธุ์ ( C สายพันธุ์ ) gpe สายพันธุ์ ( ญี่ปุ่นสายพันธุ์ ) , C / hvri สายพันธุ์ ( จากจีนโต 1.1 riems


)สายพันธุ์ ( จากจีน ) , alfort 187 สายพันธุ์ เอมส์สายพันธุ์ Margarita สายพันธุ์ เบเกอร์สายพันธุ์ นิวยอร์กสายพันธุ์ Purdue , 115 strai ) สายพันธุ์ spreda Paderborn , สายพันธุ์ , ออริกอนสายพันธุ์ นักร้องสายพันธุ์ osloss สายพันธุ์ moredun strai , , ,frijters สายพันธุ์สายพันธุ์และอื่น ๆที่สามารถพบได้ในวรรณคดี .
การประดิษฐ์ยังมีการระบุของสายพันธุ์นวนิยายของรูปแบบและลำดับโดยที่ที่ไม่ได้จัดการใด ๆของหนึ่งหรือมากกว่าหนึ่งรูปแบบลำดับกับปิดตัว . การวิธีประกอบรวมด้วยขั้นตอน :) การสร้างรูปแบบดีเอ็นเอจากสายพันธุ์และแยกจากสัตว์ ; B ) เปิดเผยวิธีให้รองพื้นคู่ซึ่งประกอบรวมด้วยรองพื้นฟอร์เวิร์ดและ
รีเวิร์สไพรเมอร์ในโพลีเมอเรสเชนรีแอคชันเรียลไทม์ ( PCR ) เพื่อให้ผลผลิตแอมพลิคอนโดยที่ , ไพรเมอร์คู่ที่เฉพาะเจาะจงเพื่อ ns5b หรือ 3'ntr ภูมิภาคของรูปแบบพันธุกรรม ;c ) แสดงความละเอียดสูง
ละลาย ( HRM ) การวิเคราะห์เส้นโค้งบนคู่ติดที่ผลิตภัณฑ์ซึ่งประกอบรวมด้วยแอมพลิคอน
ทันทีหลังจากที่เรียลไทม์ PCR ; D ) วิเคราะห์และเปรียบเทียบเส้นโค้งหนั่น และ E )
สายพันธุ์ระบุรูปแบบใหม่