3 times with PBS (phosphate buffere

3 times with PBS (phosphate buffered saline) and stored at −20 °C in a mixture containing 50% PBS and 50% ethanol. Samples were spotted onto the surface of glass slides (2 spots per slide) and allowed to dry for 30 min at 42 °C. Samples were further dehydrated by 3 incubations of 3 min each with increasing concentrations of ethanol (50, 80 and 100% v/v) and finally dried at room temperature. Each spot was covered with 9 μL of hybridization buffer (0.9 M NaCl, 20 mM Tris buffer, 10 mM EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), 0.01% SDS, pH 7.2) and 1 μL of probe working solution (50 mg/mL) of each probe. Probes used were EUB338 (5′-GCGCCTCCCGTAGGAGT-3′, [49]) specific for Eubacteria, Arc915 (5′- GTGCTCCCCCGCCAATTCCT-3′, [50]) specific for Archaea, and SYNM700 (5′-ACTGGTN5TTCCTCCTGATATCTA-3′, [51]) specific for Syntrophomonadaceae. These probes were chosen to assess the microbial population composition, namely the total bacterial population including acidogenic bacteria (EUB338), the Archaea population which includes the methanogens (Arc915), and the fatty acid degraders belonging to the Syntrophomonadaceae (SYNM700). Probes labeled with FITC (EUB338), CY3 (ARC915), or CY5 (SYNM700) were acquired from Eurofins MWG Operon (Germany). Hybridization was performed in a humidified chamber for 3 h at 45 °C. After hybridization, slides were subsequently washed with washing buffer (180 mM NaCl, 20 mM Tris, 5 mM EDTA, 0.01% SDS, pH 7.2) for 30 min at 48 °C. Slides were further incubated with 10 mL of DAPI (2 mg/mL) in PBS at room temperature for 15 min, followed by 3 washes with distilled water at room temperature. The slides were analyzed with an AXIOPLAN microscope equipped with an external UV light source and filters adequate for the fluorescent dyes under use. Images were captured by a CCD camera (Ropers Scientific) and processed with the Metamorph software. The Image J software was used to quantify the fluorescence intensity obtained with each probe. Results are the mean values obtained for at least 3 slides, each spotted at least three times.
The reactors were operated in baseline conditions (HRT = 12 h; OLR (organic loading rate) = 12 g COD/L/d) for several months before the beginning of operational shock experiments. Three types of operational shocks were applied, consisting in the raise of feed fat content, feed volumetric flow, or operational temperature.
The percentage of COD removal was calculated with the following formula:

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3 ครั้งกับ PBS (น้ำเกลือฟอสเฟต buffered) และเก็บไว้ที่ −20 ° C ส่วนผสมที่ประกอบด้วย PBS 50% และ 50% เอทานอล ตัวอย่างพบบนพื้นผิวของกระจกสไลด์ (2 จุดนิ่ง) และได้รับอนุญาตให้แห้งสำหรับ 30 นาทีที่ 42 องศาเซลเซียส ตัวอย่างอบแห้งเพิ่มเติม โดย incubations 3 3 นาทีละด้วยเพิ่มความเข้มข้นของเอทานอล (50, 80 และ 100% v/v) และแห้งที่อุณหภูมิห้อง แต่ละจุดถูกปกคลุม ด้วย μL 9 บัฟเฟอร์ hybridization (0.9 M NaCl, 20 มม.ทริสเรทติ้งบัฟเฟอร์ EDTA 10 มม. (ethylenediaminetetraacetic กรด), 0.01% SDS, pH 7.2) และ μL 1 ของโพรบทำงานแก้ปัญหา (50 mg/mL) ของแต่ละโพรบ คลิปปากตะเข้ใช้ได้ EUB338 (5′-GCGCCTCCCGTAGGAGT-3′, [49]) เฉพาะสำหรับ Eubacteria, Arc915 (5′-GTGCTCCCCCGCCAATTCCT-3′, [50]) เฉพาะสำหรับอาร์เคีย และ SYNM700 (5′-ACTGGTN5TTCCTCCTGATATCTA-3′, [51]) เฉพาะสำหรับ Syntrophomonadaceae คลิปปากตะเข้เหล่านี้ถูกเลือกในการประเมินองค์ประกอบประชากรจุลินทรีย์ ได้แก่แบคทีเรียประชากรได้แก่ acidogenic แบคทีเรีย (EUB338), ประชากรอาร์เคียที่ methanogens (Arc915), และ degraders กรดไขมันที่เป็นของ Syntrophomonadaceae (SYNM700) ติดป้าย FITC (EUB338), CY3 คลิปปากตะเข้ (ARC915), หรือ CY5 (SYNM700) ได้รับมาจาก Eurofins MWG Operon (เยอรมนี) ทำ hybridization ในหอ humidified สำหรับ h 3 ที่ 45 องศาเซลเซียส หลังจาก hybridization ภาพนิ่งถูกมาล้างกับบัฟเฟอร์ (180 มม. NaCl ตรี EDTA, 5 มม. 20 มม. 0.01% SDS, pH 7.2) สำหรับ 30 นาทีที่ 48 องศาเซลเซียส ภาพนิ่งมีต่อ incubated กับ 10 mL ของ DAPI (2 mg/mL) ใน PBS ที่อุณหภูมิห้องสำหรับ 15 นาที ตาม ด้วย washes 3 น้ำกลั่นที่อุณหภูมิห้อง ภาพนิ่งถูกวิเคราะห์ ด้วยกล้องจุลทรรศน์ AXIOPLAN เป็นแหล่งแสง UV ภายนอกและเพียงพอสำหรับสีเรืองแสงภายใต้การใช้ตัวกรอง ภาพถูกบันทึก ด้วยกล้อง CCD (Ropers วิทยาศาสตร์) และประมวลผล ด้วยซอฟต์แวร์ Metamorph ซอฟต์แวร์ภาพ J ถูกใช้เพื่อกำหนดปริมาณความเข้ม fluorescence ได้ ด้วยโพรบแต่ละ ผลมีค่าเฉลี่ยที่ได้ภาพนิ่งน้อย 3 แต่ละด่างน้อยสามครั้งเตาปฏิกรณ์ได้ดำเนินการในเงื่อนไขพื้นฐาน (HRT = 12 h OLR (อัตราการโหลดอินทรีย์) = 12 g COD/L/d) หลายเดือนก่อนเริ่มต้นการทดลองดำเนินงานช็อก ใช้สามชนิดของแรงกระแทกปฏิบัติ ประกอบด้วยในการเพิ่มของอาหารไขมัน อาหารไหล volumetric หรืออุณหภูมิทำงานเปอร์เซ็นต์การกำจัด COD ที่ถูกคำนวณ ด้วยสูตรต่อไปนี้:

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3 ครั้งกับพีบีเอส (ฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ) และเก็บไว้ที่ -20 ° C ในส่วนผสมที่มีพีบีเอส 50% และเอทานอล 50% ตัวอย่างที่เห็นบนพื้นผิวของกระจกสไลด์ (2 จุดต่อสไลด์) และได้รับอนุญาตให้แห้งเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 42 ° C ตัวอย่างแห้งต่อไปโดย 3 ฟักตัวของเชื้อ 3 นาทีแต่ละคนมีระดับความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของเอทานอล (50, 80 และ 100% v / v) และแห้งในที่สุดที่อุณหภูมิห้อง แต่ละจุดที่ถูกปกคลุมด้วย 9 ไมโครลิตรของ buffer พันธุ์ (0.9 M NaCl, 20 มิลลิบัฟเฟอร์ Tris, EDTA 10 มม (กรด ethylenediaminetetraacetic) 0.01% SDS ค่า pH 7.2) และ 1 ไมโครลิตรของการสืบสวนการแก้ปัญหาการทำงาน (50 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) ของแต่ละ การสอบสวน พร็อบที่ใช้ ได้แก่ EUB338 (5'-GCGCCTCCCGTAGGAGT-3 '[49]) ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับ Eubacteria, Arc915 (5'- GTGCTCCCCCGCCAATTCCT-3' [50]) ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับเคีและ SYNM700 (5'-ACTGGTN5TTCCTCCTGATATCTA-3 ' [51]) ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับ Syntrophomonadaceae ยานสำรวจเหล่านี้ได้รับการแต่งตั้งในการประเมินองค์ประกอบของประชากรของจุลินทรีย์คือประชากรแบคทีเรียทั้งหมดรวมทั้งแบคทีเรีย acidogenic (EUB338) ประชากรเคียซึ่งรวมถึงแบคทีเรียสร้างมีเทน (Arc915) และ degraders กรดไขมันที่อยู่ในประเภท Syntrophomonadaceae (SYNM700) พร็อบกำกับด้วย FITC (EUB338) CY3 (ARC915) หรือ CY5 (SYNM700) ได้มาจาก Eurofins MWG Operon (เยอรมัน) การผสมพันธุ์ได้ดำเนินการในห้องความชื้นเป็นเวลา 3 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 45 องศาเซลเซียส หลังจากผสมพันธุ์ภาพนิ่งถูกล้างมากับบัฟเฟอร์ซักผ้า (180 มิลลิโซเดียมคลอไรด์, 20 mM Tris, EDTA 5 มิลลิ 0.01% SDS ค่า pH 7.2) เป็นเวลา 30 นาทีที่ 48 ° C ภาพนิ่งถูกบ่มต่อกับ 10 มิลลิลิตร DAPI (2 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) ในพีบีเอสที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาทีตามด้วย 3 ล้างด้วยน้ำกลั่นที่อุณหภูมิห้อง ภาพนิ่งที่ได้มาวิเคราะห์ด้วยกล้องจุลทรรศน์ AXIOPLAN พร้อมกับแหล่งกำเนิดแสงยูวีจากภายนอกและตัวกรองที่เพียงพอสำหรับการย้อมสีเรืองแสงภายใต้การใช้ ภาพถูกจับโดยกล้อง CCD (Ropers วิทยาศาสตร์) และการประมวลผลด้วยซอฟแวร์ Metamorph ซอฟแวร์ภาพ J ถูกใช้ในการวัดปริมาณความเข้มแสงที่ได้รับกับแต่ละสอบสวน ผลการค้นหาจะค่าเฉลี่ยที่ได้รับเป็นเวลาอย่างน้อย 3 สไลด์แต่ละด่างอย่างน้อยสามครั้ง.
เครื่องปฏิกรณ์เข้ารับการผ่าตัดในสภาพพื้นฐาน (HRT = 12 ชั่วโมง; อินทรีย์ (อัตราภาระบรรทุกสารอินทรีย์) = 12 กรัมซีโอดี / L / D) เป็นเวลาหลายเดือน ก่อนที่จะเริ่มการทดลองช็อตในการดำเนินงาน สามประเภทของปัจจัยการดำเนินงานถูกนำไปใช้ประกอบในการเพิ่มขึ้นของปริมาณไขมันอาหารอาหารไหลปริมาตรหรืออุณหภูมิในการดำเนินงาน.
ร้อยละของการกำจัดซีโอดีที่คำนวณได้จากสูตรดังต่อไปนี้:

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 ครั้งกับ PBS ( ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( ) และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 ° C −ในส่วนผสมที่มี PBS 50% เอธานอล 50% ตัวอย่างที่พบบนพื้นผิวของกระจกสไลด์ ( 2 จุด ต่อสไลด์ ) และอนุญาตให้แห้งเป็นเวลา 30 นาทีที่ 42 ° C จำนวนเพิ่มเติมแห้งโดย 3 incubations 3 นาทีแต่ละเพิ่มความเข้มข้นของเอทานอล ( 50 , 80 และ 100 % v / v ) และในที่สุดแห้งที่อุณหภูมิห้องแต่ละจุดที่ถูกปกคลุมด้วยชั้นของ 9 μเซบัฟเฟอร์ ( 0.9 M NaCl , 20 มม. จากบัฟเฟอร์ 10 mM EDTA ( บอนกรด ) , 0.01 % SDS , pH 7.2 ) และ 1 μผมสอบสวนทำงานแก้ปัญหา ( 50 mg / ml ) ของแต่ละคนด้วย ฟิวส์ที่ใช้เป็น eub338 ( 5 ’ - ’ gcgcctcccgtaggagt-3 [ 49 ] ) เฉพาะแบคทีเรีย arc915 ( , 5 gtgctcccccgccaattcct-3 ’ - ’ [ 50 ] ) ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับ ดาร์เรน ยัง ,และ synm700 ( 5 ’ - ’ actggtn5ttcctcctgatatcta-3 [ 51 ] ) โดยเฉพาะสำหรับ syntrophomonadaceae . วัดเหล่านี้ถูกเลือกเพื่อศึกษาองค์ประกอบของประชากรของจุลินทรีย์ ได้แก่ จำนวนประชากรแบคทีเรียรวมทั้งกากสับปะรด แบคทีเรีย ( eub338 ) , ดาร์เรน ยัง ประชากร ซึ่งรวมถึงการสร้างมีเทน ( arc915 ) และความสามารถในการย่อยสลายไขมันกรดที่เป็นของ syntrophomonadaceae ( synm700 )ตรวจสอบชื่อกับ fitc ( eub338 ) cy3 ( arc915 ) หรือ cy5 ( synm700 ) ได้มาจาก eurofins mwg โอเปอรอน ( เยอรมนี ) ( แสดงใน humidified ห้อง 3 H ที่ 45 องศา หลังจากทำ สไลด์ จัดการล้างด้วยล้างบัฟเฟอร์ ( 180 มม. ขนาด 20 มม. หรือ 5 mM EDTA 0.01 % SDS , pH 7.2 ) สำหรับ 30 นาทีที่ 48 องศาสไลด์ได้แยก 10 มิลลิลิตร dapi ( 2 mg / ml ) ใน PBS ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที ตามด้วย 3 ล้างด้วยน้ำที่อุณหภูมิห้อง ภาพนิ่ง วิเคราะห์ด้วยกล้องจุลทรรศน์ axioplan ติดตั้งภายนอกตัวกรองแสงยูวีที่มาและเพียงพอสำหรับเรืองแสงสีภายใต้การใช้ภาพที่ถูกบันทึกโดยกล้อง CCD ( ropers ทางวิทยาศาสตร์ ) และประมวลผลด้วย metamorph ซอฟต์แวร์ ภาพ J มีใช้ซอฟต์แวร์ที่มีการเรืองแสงได้ แต่ละความเข้มด้วย ผลลัพธ์ที่ได้คืออย่างน้อย 3 ภาพนิ่งแต่ละเห็นอย่างน้อยสามครั้ง
เครื่องปฏิกรณ์ ดำเนินการในเงื่อนไขพื้นฐาน ( HRT = 12 H ;อัตรา ( อัตราภาระบรรทุกสารอินทรีย์ ) = 12 กรัมซีโอดี / L / D ) เป็นเวลาหลายเดือนก่อนที่จะเริ่มต้นของการทดลองช็อก ) สามประเภทของการดำเนินงานที่ใช้กระแทก ซึ่งในยกอาหารไขมัน , อาหารการไหลเชิงปริมาตร หรืออุณหภูมิปฏิบัติการ .
ค่า COD คือคำนวณด้วยสูตรต่อไปนี้ :