Inoculum preparation
The Salmonella Enteritidis PT 30 (ATCC BAA1045) and
Salmonella Enteritidis PT 9c strains used for this study were
associated with raw almond outbreaks in 2000 to 2001 and 2003 to
2004, respectively (CDC 2004; Isaacs and others 2005). Salmonella
Typhimurium (LJH738) and SalmonellaMontevideo (LJH654) were
isolated from raw almonds in a statewide survey (Danyluk and
others 2007). Salmonella Newport (MDD302) was an environmental
isolate identical to that associated with a 2005 fresh tomato
outbreak (Greene and others 2008).
Using methods described by Parnell and others (2005), variants
of the Salmonella strains resistant to 50 μg/mL of nalidixic acid
were isolated and used for this study. Growth curves of the parent
and variant strains were similar in tryptic soy broth (TSB; Difco,
Becton Dickinson, Sparks, Md., U.S.A.) (data not shown). Nalidixic
acid resistant strains were stored at −80 ◦C in TSB supplemented
with 50 μg/mL nalidixic acid (Sigma, St. Louis,Mo., U.S.A.) and 15%
glycerol (wt/vol).
Prior to each experiment, frozen stock culture was streaked
onto tryptic soy agar (Difco, Becton Dickinson) supplemented with
50 μg/mL nalidixic acid (TSAN) and plates were incubated at 35 ±
2 ◦C for 24 ± 2 h. Previous research with almonds indicated that
the inoculum preparation survived better when prepared on agar
than in broth (Uesugi and others 2006). Therefore, a single isolated
colony was selected and suspended in 10 mL of sterile deionized
water to generate an inoculum of 107 CFU/mL. This bacterial stock
solution was further diluted in sterile deionized water to generate
inocula of 1 to 7 log CFU/mL.
inocula of 1 to 7 log CFU/mL.
หัวเชื้อเตรียม
Salmonella Enteritidis PT 30 (ATCC BAA1045) และ
Salmonella Enteritidis PT 9c
สายพันธุ์ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้มีความเกี่ยวข้องกับการระบาดของโรคอัลมอนด์ดิบใน2000-2001 และที่จะปี 2003
ปี 2004 ตามลำดับ (CDC 2004; ไอแซ็กและอื่น ๆ 2005) Salmonella
Typhimurium (LJH738) และ SalmonellaMontevideo (LJH654)
ได้รับการแยกออกจากอัลมอนด์ดิบในการสำรวจบรรดา(Danyluk
และคนอื่นๆ 2007) Salmonella นิวพอร์ต (MDD302)
เป็นสิ่งแวดล้อมแยกเหมือนกับที่เกี่ยวข้องกับ2005
มะเขือเทศสดระบาด(กรีนและคนอื่น ๆ 2008).
โดยใช้วิธีการอธิบายโดยพาร์เนลล์และอื่น ๆ (2005)
สายพันธุ์ของสายพันธุ์เชื้อSalmonella ทนถึง 50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร nalidixic
กรดถูกแยกและใช้สำหรับการศึกษาครั้งนี้ เส้นโค้งการเจริญเติบโตของผู้ปกครองและสายพันธุ์ที่แตกต่างกันมีความคล้ายคลึงกันใน tryptic น้ำซุปถั่วเหลือง (TSB; Difco, Becton ดิกคินสันปาร์กส์, MD, USA.) (ไม่ได้แสดงข้อมูล) nalidixic สายพันธุ์ที่ทนกรดถูกเก็บไว้ที่ -80 ◦Cใน TSB เสริม50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรกรด nalidixic (Sigma, เซนต์หลุยส์, Mo. สหรัฐอเมริกา) และ 15% กลีเซอรอล (น้ำหนัก / ปริมาตร). ก่อนที่จะมีการทดสอบแต่ละหุ้นแช่แข็ง วัฒนธรรมได้รับลายลงบนถั่วเหลืองtryptic วุ้น (Difco, Becton ดิกคินสัน) เสริมด้วย50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรกรด nalidixic (Tsan) และแผ่นถูกบ่มที่ 35 ± 2 ◦C 24 ± 2 ชั่วโมง วิจัยก่อนหน้านี้อัลมอนด์ชี้ให้เห็นว่าการเตรียมหัวเชื้อรอดที่ดีขึ้นเมื่อจัดทำวุ้นกว่าในน้ำซุป(ซุกิและอื่น ๆ 2006) ดังนั้นการแยกเดียวอาณานิคมได้รับเลือกและระงับใน 10 มิลลิลิตรปราศจากไอออนผ่านการฆ่าเชื้อน้ำที่จะสร้างหัวเชื้อ107 โคโลนี / มิลลิลิตร นี้หุ้นแบคทีเรียวิธีการแก้ปัญหาที่ถูกปรับลดต่อไปในน้ำปราศจากไอออนผ่านการฆ่าเชื้อในการสร้างinocula ของ 1-7 log CFU / mL. inocula ของ 1-7 log CFU / มิลลิลิตร
การแปล กรุณารอสักครู่..

การเตรียมเชื้อ Salmonella enteritidis
PT 30 ( ATCC baa1045 ) และซาลโมเนลลาสายพันธุ์
enteritidis PT เอนไซม์ที่ใช้สำหรับการวิจัยที่เกี่ยวข้องกับอัลมอนด์ดิบ
ระบาดในปี 2000 2001 และ 2003
2004 ตามลำดับ ( CDC 2004 ; ไอแซคและคนอื่น ๆในปี 2005 ) เชื้อ Salmonella typhimurium ( ljh738 ) และ salmonellamontevideo
( ljh654 ) แยกจากอัลมอนด์ดิบในการสำรวจและโจเซฟ ( danyluk
คนอื่น 2007 ) ซัลโมเนลลา นิวพอร์ต ( mdd302 ) เป็นสิ่งแวดล้อม
แยกเหมือนกันกับที่เกี่ยวข้องกับ 2005 สดมะเขือเทศ
ระบาด ( กรีนและคนอื่น 2008 ) .
โดยใช้วิธีการอธิบาย โดย พาร์เนลและคนอื่นๆ ( 2005 ) , สายพันธุ์ของเชื้อซัลโมเนลลาสายพันธุ์ที่ทน
50 μ g / ml สะพานกรุงธน
ถูกแยก และใช้ในการศึกษาครั้งนี้ . เส้นโค้งการเติบโตของแม่
และสายพันธุ์ที่แตกต่างกันในซุปถั่วเหลืองอาหาร ( TSB ; difco
เบ็กเติ้น , ดิกคินสัน , ประกายไฟ , แมรี่แลนด์ , สหรัฐอเมริกา ) ( ข้อมูลไม่แสดง ) สายพันธุ์ที่ทนกรดนาลิดิซิก
อุณหภูมิ− 80 ◦ C ใน TSB เสริม
กับ 50 μ g / ml สะพานกรุงธน ( Sigma , เซนต์หลุยส์ , มิสซูรี่ , USA ) และ 15 %
กลีเซอรอล ( น้ำหนัก / ปริมาตร ) .
ก่อนการทดลองแต่ละวัฒนธรรมหุ้นแช่แข็งเป็นลายบนวุ้นถั่วเหลืองอาหาร ( difco
,เบคตอน Dickinson ) เสริมด้วย
50 μ g / ml สะพานกรุงธน ( tsan ) และแผ่นอุณหภูมิ 35 ±
2 ◦เป็นเวลา 24 ± 2 ชั่วโมงก่อนการวิจัยกับอัลมอนด์ พบว่าเชื้อรอด
เตรียมดีกว่าเมื่อเตรียมบนอาหารวุ้น
กว่าในน้ำซุป ( อุเอซูกิซังและคนอื่น 2006 ) ดังนั้น เดี่ยวแยก
อาณานิคมถูกเลือกอยู่ใน 10 มิลลิลิตร คล้ายเนื้อเยื่อประสาน
เป็นหมันน้ำสร้างเชื้อ 107 CFU / ml แบคทีเรียนี้หุ้น
สารละลายเจือจางในน้ำหมันคล้ายเนื้อเยื่อประสานเพิ่มเติมเพื่อสร้าง inocula
1 7 log CFU / ml inocula
1 7 log CFU / ml
การแปล กรุณารอสักครู่..
