Selected DGGE bands were excised in

Selected DGGE bands were excised in triplicates to ensure that each
band represented only one type of bacterium. These bandswere excised
using sterile wide-pore pipette tips and transferred into tubes containing
50 μl of sterile water and eluted at 4 °C overnight. From the eluate,
2 μl were used as DNA template and re-amplified using the PCR conditions
describe above,with the following modifications: 16 cycles of regular
PCR, primer 357F without the GC clamp, and the total reaction
volume was 25 μl. Following re-amplification, 8 μl of each PCR product
were analyzed and imaged as described previously to confirm successful
amplification of the V3 region. The re-amplified DNA fragments
were purified using the MultiScreen PCRμ96 Filter Plate (Millipore Corporation,
Billerica, MA, USA). Sequencing was then performed using

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วง DGGE เลือกได้ excised ใน triplicates เพื่อให้แน่ใจว่าแต่ละวงดนตรีแสดงเฉพาะชนิดของแบคทีเรีย Bandswere เหล่านี้ excisedใช้รูขุมขนกว้างใส่เคล็ดลับประหยัดพื้นที่ และเป็นหลอดที่ประกอบด้วยΜl 50 กระบอกน้ำ และ eluted ที่ 4 ° C ค้างคืน จาก eluate2 μl ถูกใช้เป็นแม่แบบดีเอ็นเอ และการขยายการใช้ PCRอธิบายข้างต้น แก้ไขต่อไปนี้: รอบ 16 ของปกติPCR รองพื้น 357F โดยแคลมป์ GC ปฏิกิริยารวมเล่ม 25 μl ต่อไปนี้การขยาย μl 8 ของแต่ละผลิตภัณฑ์ PCRวิเคราะห์ และ imaged ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้เพื่อยืนยันความสำเร็จขยายภาค V3 ชิ้นส่วนดีเอ็นเอใหม่เอาต์ได้บริสุทธิ์โดยใช้ MultiScreen PCRμ96 กรองแผ่น (บริษัทมากBillerica, MA สหรัฐอเมริกา) จัดลำดับแล้วทำการใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เลือกวงดนตรีที่ได้รับการตัด DGGE ใน triplicates
เพื่อให้แน่ใจว่าแต่ละวงเป็นตัวแทนเพียงหนึ่งชนิดของแบคทีเรีย bandswere
เหล่านี้พอใช้เคล็ดลับปิเปตรูขุมขนกว้างผ่านการฆ่าเชื้อและโอนเข้ามาในท่อที่มี
50 ไมโครลิตรของน้ำหมันและชะที่ 4 ° C ในชั่วข้ามคืน จาก eluate ที่
2 ไมโครลิตรถูกนำมาใช้เป็นแม่แบบ DNA และขยายอีกครั้งโดยใช้เงื่อนไข PCR
อธิบายข้างต้นมีการปรับเปลี่ยนดังต่อไปนี้: 16 รอบปกติ
PCR ไพรเมอร์ 357F โดยไม่ต้องยึด GC
และปฏิกิริยารวมปริมาณ25 ไมโครลิตร ต่อไปนี้การขยายอีก 8 ไมโครลิตรของแต่ละผลิตภัณฑ์ PCR
วิเคราะห์และถ่ายภาพตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้เพื่อยืนยันการประสบความสำเร็จในการขยายของภูมิภาค V3
เรื่องการขยายดีเอ็นเอถูกทำให้บริสุทธิ์โดยใช้จาน Multiscreen PCRμ96กรอง (คคอร์ปอเรชั่นบิลเลริกา, MA, USA) ลำดับจากนั้นก็ดำเนินการโดยใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เลือกวงดนตรีที่ถูกตัดในการทดลอง 3 ซ้ำ เพื่อให้แน่ใจว่า แต่ละ
วงดนตรีแสดงเพียงหนึ่งชนิดของแบคทีเรีย เหล่านี้ bandswere ตัด
ใช้ฆ่าเชื้อกว้างรูขุมขนปิเปต ทิปและย้ายลงในหลอดที่มี
50 μลิตรน้ำปลอดเชื้อและตัวอย่างที่ 4 ° C ในชั่วข้ามคืน จากสารละลาย ( eluate )
2 L , μถูกใช้เป็นแม่แบบดีเอ็นเอ และกำลังขยายการใช้เงื่อนไข PCR
อธิบายข้างต้นกับการปรับเปลี่ยนดังต่อไปนี้ : 16 รอบของ PCR ธรรมดา
357f รองพื้นไม่มี GC หนีบและปริมาตรปฏิกิริยา
รวม 25 μ . ต่อไปนี้กำลังขยาย 8 μ L ของแต่ละเทคนิคผลิตภัณฑ์
วิเคราะห์และอื่นๆตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ เพื่อยืนยันความสำเร็จของ V3
( ภูมิภาค เรื่องแถบดีเอ็นเอ
ที่ได้ทำให้บริสุทธิ์โดยใช้ multiscreen PCR μ 96 กรองจาน ( มิลลิ Corporation
โตเกียว , MA , USA ) ลำดับนั้นก็มีประสิทธิภาพในการ