antibody to assess the mobilization and homing of HSCs
into the kidney [8].
Kidney specimens from rats sacrificed at the end of
the experiment (after 6 weeks) were collected. (1) Rightkidney
specimens were fixed in 10% buffered formalin,
and then paraffin embedded. Serial sections of 5–7 m
thickness were cut, and subjected to (i) hematoxylin-andeosin
(H&E) stain [9]; (ii) Masson’s trichrome stain to
demonstrate collagen fibers [9]; (iii) periodic acid–Schiff
(PAS) reaction [9] to demonstrate basal lamina and brush
border as a measure of tubular injury; (iv) immunohistochemical
staining using anti-CD34 antibody, which
is a ready-to-use mouse monoclonal antibody (Dako,
Glostrup, Denmark), to demonstrate HSCs [8], and positive
cells showed a membranous/cytoplasmic brown reaction;
and (v) immunohistochemical staining using anticaspase-
3 antibody, which is a ready-to-use rabbit polyclonal
antibody (Thermo Scientific Laboratories, Neo Markers,
Waltham, Massachusetts, USA), to demonstrate apoptosis
[8], and caspase-3 marker shows cellular cytoplasmic localization
in early apoptosis and nuclear localization in late
apoptosis [10]. (2) Left-kidney specimens (about 1 mm)
were processed for embedding in epoxy resin. Semithin
sections were cut at 1-m thickness, and rapidly fixed in 3%
phosphate-buffered glutaraldehyde, stained with toluidine
blue, and then examined by a light microscope [11].
2.2.3. Morphometric study
Data were obtained using Leica QWin 500 C image analyzer
computer system (Leica Microsystems, Cambridge,
England, UK). The following were measured: (1) number
of affected Malpighian corpuscles per low-power
field (100 × ) in H&E-stained sections (widening of Bowman’s
space, partial or complete destruction, loss of
glomerular tufts) [12]; (2) area percent of collagen in Masson’s
trichrome-stained sections; (3) optical density of
PAS +ve reaction; (4) number of CD34-immunopositive
cells per low-power field; and (5) number of caspase-3-
immunopositive cells per low-power field.
2.2.4. Statistical analysis
The measurements obtained were analyzed using SPSS
software version 13 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). A comparison
between the different groups was made using
analysis of variance, followed by post hoc Tukey test. The
results were expressed as means ± standard deviation. The
differences were considered statistically significant when
p < 0.05.
แอนติบอดีเพื่อประเมินการชุมนุมและกลับบ้านของ HSCs
เข้าไปในไต [8].
ตัวอย่างไตจากหนูเสียสละในตอนท้ายของ
การทดลอง (ภายหลัง 6 สัปดาห์) ที่ถูกเก็บรวบรวม (1) Rightkidney
ตัวอย่างได้รับการแก้ไขใน 10% ฟอร์มาลินบัฟเฟอร์
แล้วพาราฟินฝังตัว ส่วนซีเรียลของม. 5-7
หนาถูกตัดและยัดเยียดให้ (i) hematoxylin-andeosin
(H & E) คราบ [9]; (ii) ซซ็องของ trichrome คราบ
แสดงให้เห็นเส้นใยคอลลาเจน [9]; (iii) ธาตุกรดชิฟฟ์
(PAS) ปฏิกิริยา [9] แสดงให้เห็นถึงแผ่นฐานและแปรง
ชายแดนเป็นตัวชี้วัดของการบาดเจ็บท่อ; (iv) immunocytochemistry ของ
การย้อมสีที่ใช้ป้องกัน CD34 แอนติบอดีซึ่ง
เป็นความพร้อมต่อการใช้เมาส์โมโนโคลนอลแอนติบอดี (Dako,
Glostrup, เดนมาร์ก) เพื่อแสดงให้เห็นถึง HSCs [8], และบวก
เซลล์พบว่ามีการเกิดปฏิกิริยาสีน้ำตาลเยื่อ / นิวเคลียส;
และ ( V) โดยใช้เทคนิค immunohistochemistry anticaspase-
3 แอนติบอดีซึ่งเป็นพร้อมต่อการใช้งานโพลีกระต่าย
แอนติบอดี (เทอร์โมวิทยาศาสตร์ห้องปฏิบัติการ, Neo เครื่องหมาย
Waltham, Massachusetts, USA) แสดงให้เห็นถึงการตายของเซลล์
[8] และ caspase-3 เครื่องหมายแสดงโทรศัพท์มือถือ แปลนิวเคลียส
ในการตายของเซลล์ต้นและการแปลนิวเคลียร์ในช่วงปลาย
apoptosis [10] (2) ตัวอย่างซ้ายไต (ประมาณ 1 มิลลิเมตร)
ที่ถูกประมวลผลสำหรับการฝังในอีพอกซีเรซิน Semithin
ส่วนถูกตัดที่ความหนา 1 เมตรอย่างรวดเร็วและการแก้ไขใน 3%
glutaraldehyde ฟอสเฟตบัฟเฟอร์, ย้อมด้วยสี toluidine
สีฟ้าและจากนั้นตรวจสอบโดยแสงกล้องจุลทรรศน์ [11].
2.2.3 เมตริกการศึกษา
ข้อมูลที่ได้รับใช้ Leica QWin วิเคราะห์ภาพ 500 C
ระบบคอมพิวเตอร์ (Leica Microsystems, เคมบริดจ์
ประเทศอังกฤษ, สหราชอาณาจักร) ต่อไปนี้เป็นวัด: (1) จำนวน
ของ corpuscles ได้รับผลกระทบ Malpighian ต่อพลังงานต่ำ
ฟิลด์ (100 ×) ในส่วนของ H & E-ย้อมสี (ขยับขยายโบว์แมน
พื้นที่ทำลายบางส่วนหรือทั้งหมดสูญเสียของ
กระจุกไต) [12]; (2) ร้อยละพื้นที่ของคอลลาเจนในซซ็องของ
ส่วน trichrome เปื้อน; (3) ความหนาแน่นของแสงของ
PAS + ve ปฏิกิริยา; (4) จำนวน CD34-immunopositive
เซลล์ต่อข้อมูลพลังงานต่ำ; และ (5) จำนวน caspase-3-
เซลล์ immunopositive ต่อข้อมูลพลังงานต่ำ.
2.2.4 การวิเคราะห์สถิติ
การวัดที่ได้มาวิเคราะห์โดยใช้โปรแกรม SPSS
ซอฟต์แวร์รุ่น 13 (SPSS อิงค์, Chicago, IL, สหรัฐอเมริกา) การเปรียบเทียบ
ระหว่างกลุ่มต่าง ๆ ที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้
การวิเคราะห์ความแปรปรวนตามด้วยการโพสต์ทูกีเฉพาะกิจการทดสอบ
ผลการวิจัยแสดงเป็นหมายถึง±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน
ความแตกต่างได้รับการพิจารณาอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติเมื่อ
p <0.05
การแปล กรุณารอสักครู่..

แอนติบอดีเพื่อประเมินการระดมและกลับบ้านของ hscsในไต [ 8 ]ตัวอย่างจากไตหนูเสียสละที่สิ้นสุดการทดลอง ( หลังจาก 6 สัปดาห์ ) เก็บรวบรวม ( 1 ) rightkidneyทำการแก้ไขใน 10% ฟอร์มาลินบัฟเฟอร์ ,และพาราฟินฝังตัว ส่วนอนุกรม 5 – 7 ม.ตัดความหนา และยัดเยียดให้ ( ผม ) andeosin ย้อม( H & E ) คราบ [ 9 ] ; ( 2 ) แมสเซิ่นเป็นคราบ เพื่อควบคุมคุณภาพแสดงให้เห็นถึงใยคอลลาเจน [ 9 ] ; ( iii ) Periodic acid Schiff จำกัด( PAS ) ปฏิกิริยา [ 9 ] แสดงแบบแรกเริ่มและแปรงชายแดน เป็นวัดของท่อ ( IV ) สำหรับการบาดเจ็บ ;การใช้ anti-cd34 แอนติบอดี ซึ่งคือพร้อมที่จะใช้โมโนโคลนอล แอนติบอดี ( ทางหนึ่ง ,Glostrup เดนมาร์ก ) , แสดงให้เห็นถึง hscs [ 8 ] และ บวกเซลล์มีเยื่อบุผิว / พบปฏิกิริยาสีน้ำตาล ;( V ) และใช้ในการ anticaspase -3 ) ที่พร้อมใช้ใช้กระต่ายแอนติบอดี ( เทอร์โมวิทยาศาสตร์ห้องปฏิบัติการ , นีโอ เครื่องหมายWaltham , Massachusetts , USA ) , แสดงให้เห็นถึงการตาย[ 8 ] และการศึกษาลักษณะนี้แสดงเครื่องหมายเซลล์จำกัดในช่วงแรกเกิด และนิวเคลียร์จำกัดในปลายเซลล์ [ 10 ] ( 2 ) ด้านซ้ายตัวอย่างไต ( ประมาณ 1 มิลลิเมตร )ถูกประมวลผลสำหรับการฝังตัวในอีพอกซีเรซิน สารลดแรงตึงผิวส่วนที่ถูกตัดที่ความหนาของกรด และรวดเร็วคงที่ 3 เปอร์เซ็นต์กลูตาราลดีไฮด์ในฟอสเฟต , ย้อมด้วยโทลูอิดีนสีฟ้า , และจากนั้นตรวจสอบโดยกล้องจุลทรรศน์แสง [ 11 ]2.2.3 . การศึกษาสัณฐานวิทยาข้อมูลการใช้ Leica ทํา 500 C วิเคราะห์ภาพระบบคอมพิวเตอร์ ( Leica Microsystems เคมบริดจ์อังกฤษ ) ต่อไปนี้เป็นวัด ( 1 ) จำนวนของผลกระทบต่อ malpighian อนุภาคพลังงานต่ำฟิลด์ ( 100 × ) ใน H & e-stained ส่วน ( การขยับขยายของโบว์แมนพื้นที่บางส่วนหรือสมบูรณ์ทำลาย , การสูญเสียของวิทยาลัย ) [ 12 ] ; ( 2 ) ร้อยละของพื้นที่ของคอลลาเจนในแมสเซิ่นเทคนิคการย้อมสีส่วน ; ( 3 ) ความหนาแน่นของแสงอภิสิทธิ์ + ve ปฏิกิริยา ; ( 4 ) จำนวน cd34 immunopositiveเซลล์ต่อสนามพลังงาน และ ( 5 ) การศึกษาลักษณะ - จำนวนimmunopositive เซลล์ต่อสนามพลังงานต่ำ .2.2.4 . สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลการวัด วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้โปรแกรม SPSS ได้ซอฟต์แวร์รุ่น 13 ( SPSS Inc , ชิคาโก , IL , USA ) การเปรียบเทียบระหว่างกลุ่มที่แตกต่างกันได้โดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนตาม Post Hoc เป็นรายการทดสอบ ที่ผลลัพธ์ที่ได้แสดง±เป็นค่าเฉลี่ย ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน ที่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ เมื่อพิจารณาp < 0.05
การแปล กรุณารอสักครู่..
