2.3. Preparation of solvents and HP

2.3. Preparation of solvents and HPLC standards
Our HPLC method is based on a previously published
method [26]. Mobile phase solvents were made by mixing
acetonitrile, tetrahydrofuran and methanol, then adding
1% ammonium sulfate in HPLC grade water and 0.0005%

-hydroxytoluene as an antioxidant. Solvent A contained
acetonitrile–tetrahydrofuran–methanol–1% aqueous ammonium
sulfate solution (85:5:5:5, v/v/v/v), and solvent B contained
acetonitrile–tetrahydrofuran–methanol–1% aqueous
ammonium sulfate solution (55:35:5:5, v/v/v/v). Each solvent
was prepared fresh before use. HPLC standards were
prepared by dissolving approximately 1mg standard into
10mL toluene–ethanol (1:99, v/v). Standards were prepared
by mass, and stored in the dark at 4 ◦C for up to two weeks
before use.
2.4. Equipment
Liquid chromatography was run on an Agilent 1100 gradient
chromatograph with a binary pump, degasser, refrigerated
autosampler, column heater, and diode array detection.
Chromatographic analysis was run and interpreted with
a Chemstation for LC 3D revision A.08.03 (847) for Agilent
Technologies, running on aHP Kayak XM600 computer with
Windows NT (Hewlett-Packard GmbH, Chemical Analysis
Group, Waldbronn, Germany). Supercritical fluid extraction
was with an ISCO model 356024-chamber Automated Supercritical
Fluid Extractor with dual 260D pumps (ISCO,
Lincoln, NE, USA).
2.5. Sample preparation by liquid–liquid extraction
Homogeneous freeze-dried pumpkin samples (0.1 g) were
mixed with 1mL 95% ethanol containing 0.05% BHT to denature
proteins, vortexed for 60 s, then mixed with an equal
volume of hexane. The hexane layer was removed and saved
in 12mm×75mm borosilicate test tubes, and the extraction
repeated three times. Each hexane extract was dried under a
stream of nitrogen. The extracts were resuspended in 100 L
solvent B. Samples and standards were stable under these
conditions for up to one week. After extraction, evaporation
and resuspension, we typically ended with a sample volume
of 100L.
2.6. Sample preparation by supercritical fluide xtraction
Homogeneous freeze-dried pumpkin samples (0.1 g) were
mixed with 5 g Hydromatrix. Carotenoids were extracted
with supercritical fluid with supercritical grade CO2.We analyzed
the effect of time, temperature (40, 80 ◦C), pressure (31,
35, 50mPa), static and dynamic extraction times and modifier
on the solvating power and selectivity of the supercritical fluid
CO2. The supercritical fluid modifiers tested were denatured
ethyl alcohol (190 proof alcohol, four parts methyl isobutyl
ketone and one part kerosene); and HPLC grade methanol.
We tested 0%, 10% and 30% modifier concentrations. Static
extraction times tested were 1, 10 and 30 min.
The carbon dioxide flow rate was kept constant at
2 mL/min. The effect of temperature was measured first, then
pressure at the best temperature, then percent modifier at the
best temperature and pressure, then finally the effect of static
extraction time. Each sample was extracted three times at the
specified temperature, pressure, and modifier concentration
and each extractionwas analyzed separately by chromatography,
to test for the completeness and uniformity of the extraction
method. We analyzed three samples at each condition.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 การเตรียมหรือสารทำละลายและมาตรฐาน HPLCใช้วิธี HPLC ของเราในการเผยแพร่ก่อนหน้านี้วิธี [26] ทำ โดยผสมระยะเคลื่อนหรือสารทำละลายacetonitrile, tetrahydrofuran และเมทานอ ล แล้ว เพิ่ม1% แอมโมเนียซัลเฟตในน้ำเกรด HPLC และ 0.0005%-hydroxytoluene เป็นสารต้านการ A เป็นตัวทำละลายที่มีอยู่แอมโมเนียอควี acetonitrile – tetrahydrofuran – เมทานอล – 1%ซัลเฟตโซลูชั่น (85:5:5:5, v/v/v/v), และตัวทำละลาย B อยู่acetonitrile – tetrahydrofuran – เมทานอล – 1% อควีแอมโมเนียมซัลเฟตโซลูชั่น (55:35:5:5, v/v/v/v) แต่ละตัวทำละลายถูกเตรียมสดก่อนใช้ มาตรฐาน HPLC ได้โดยยุบประมาณ 1mg มาตรฐานเป็น10mL โทลูอีนเอทานอล (1:99, v/v) มีการจัดทำมาตรฐานโดยรวม และเก็บไว้ในมืดที่ 4 ◦C ถึงสองสัปดาห์ก่อนใช้งาน2.4. อุปกรณ์รันในการไล่ระดับ Agilent 1100 chromatography ของเหลวchromatograph กับฐานเครื่องสูบน้ำ degasser, refrigeratedautosampler คอลัมน์ฮีตเตอร์ และไดโอดอาร์เรย์ตรวจวิเคราะห์ chromatographic เรียกใช้ และตีความด้วยChemstation สำหรับ LC 3D ปรับปรุง A.08.03 (847) สำหรับ Agilentเทคโนโลยี การทำงานบนคอมพิวเตอร์ aHP XM600 เรือคายัคด้วยWindows NT (Hewlett-Packard GmbH เคมีวิเคราะห์กลุ่ม Waldbronn เยอรมนี) สกัดของเหลว supercriticalถูกกับ ISCO ตัวรุ่น 356024 หออัตโนมัติ Supercriticalระบายของเหลวกับ 260D สองปั๊ม (ISCOลินคอล์น NE สหรัฐอเมริกา)2.5. ตัวอย่างเตรียม โดยแยกของเหลว – ของเหลวถูกเหมือนอย่างฟักทองกรอบ (0.1 g)ผสมกับ 0.05% บาทการ denature ที่ประกอบด้วยเอทานอล 95% 1mLโปรตีน vortexed 60 s แล้ว ผสม ด้วยเสมอปริมาตรของเฮกเซน ชั้นโพลีถูกเอาออก และบันทึกในหลอดทดสอบ borosilicate 12 มม. × 75 มม. และสกัดทำซ้ำ 3 ครั้ง แต่ละสารสกัดเฮกเซนที่แห้งภายใต้การกระแสของไนโตรเจน สารสกัดมี resuspended ใน 100 LB. ตัวอย่างและมาตรฐานตัวทำละลายมีเสถียรภาพภายใต้เหล่านี้เงื่อนไขถึงหนึ่งสัปดาห์ หลังจากสกัด ระเหยและ resuspension ตะกอน เรามักจะจบด้วยตัวอย่างของ 100 L.2.6. ตัวอย่างการเตรียม โดย supercritical fluide xtractionถูกเหมือนอย่างฟักทองกรอบ (0.1 g)ผสมกับ 5 g Hydromatrix Carotenoids ที่สกัดกับน้ำมัน supercritical กับเกรด supercritical CO2 เราวิเคราะห์ผลของเวลา อุณหภูมิ (40, 80 ◦C), ความดัน (3135, 50mPa), เวลาสกัดแบบคง และแบบไดนามิกและปรับเปลี่ยนsolvating พลังงานและวิธีของเหลว supercriticalCO2 คำวิเศษณ์ fluid supercritical ทดสอบถูก denaturedเอทิลแอลกอฮอล์ (190 พิสูจน์แอลกอฮอล์ isobutyl methyl สี่ส่วนคีโตนและน้ำมันก๊าดส่วนหนึ่ง); และ HPLC เกรดเมทานอลเราทดสอบความเข้มข้นปรับค่า 0%, 10% และ 30% สถิตแยกเวลาทดสอบ 1, 10 และ 30 นาทีอัตราการไหลของก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์ที่เก็บค่าคงที่2 mL/นาที ผลของอุณหภูมิที่วัดครั้งแรก แล้วความดันอุณหภูมิดีที่สุด ปรับเปลี่ยนเปอร์เซ็นต์แล้วที่นี้สุดอุณหภูมิ และความดัน แล้วสุดท้ายผลของสถิตแยกเวลา ตัวอย่างแต่ละถูกดึงรั้งที่จะความเข้มข้นอุณหภูมิ ความดัน และปรับค่าที่ระบุและแต่ละวิเคราะห์แยกต่างหาก โดย chromatography, extractionwasการทดสอบความสมบูรณ์และความรื่นรมย์ของสกัดวิธีการ เราวิเคราะห์ตัวอย่างที่ 3 ในแต่ละเงื่อนไข

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การเตรียมความพร้อมของตัวทำละลายและมาตรฐาน HPLC
วิธี HPLC
ของเราขึ้นอยู่กับการเผยแพร่ก่อนหน้านี้วิธีการ[26] ตัวทำละลายเฟสเคลื่อนที่ที่ถูกสร้างขึ้นโดยการผสม
acetonitrile tetrahydrofuran
และเมทานอลแล้วเพิ่มแอมโมเนียมซัลเฟต1% ในน้ำเกรด HPLC และ
0.0005%? -hydroxytoluene เป็นสารต้านอนุมูลอิสระ ตัวทำละลายที่มี
acetonitrile-tetrahydrofuran-เมทานอล-1%
แอมโมเนียมน้ำแก้ปัญหาซัลเฟต(85: 5: 5: 5, v / v / v / v) และ B ตัวทำละลายที่มี
acetonitrile-tetrahydrofuran-เมทานอล-1%
น้ำแก้ปัญหาแอมโมเนียมซัลเฟต( 55: 35: 5: 5, v / v / v / v) แต่ละตัวทำละลายได้จัดทำสดใหม่ก่อนการใช้งาน
มาตรฐาน HPLC
ถูกจัดทำขึ้นโดยการละลายประมาณ1 มกมาตรฐานลงใน
10 มิลลิลิตรซึ่งหัวใจโทลูอีนเอทานอล (1:99, v / v) ได้จัดทำมาตรฐานโดยมวลและเก็บไว้ในที่มืดที่ 4 ◦Cถึงสองสัปดาห์ก่อนการใช้งาน. 2.4 อุปกรณ์สารเหลวที่กำลังวิ่งอยู่บนทางลาด Agilent 1100 chromatograph กับปั๊มไบนารี degasser, ตู้เย็นเครื่องฉีดตัวอย่างอัตโนมัติ, เครื่องทำคอลัมน์และการตรวจสอบอาร์เรย์ไดโอด. วิเคราะห์โครมาถูกเรียกใช้และตีความด้วยChemStation สำหรับ LC 3D A.08.03 แก้ไข (847) สำหรับ Agilent เทคโนโลยีที่ทำงานบนเรือคายัค AHP คอมพิวเตอร์ที่มี XM600 Windows NT (Hewlett-Packard GmbH, เคมีวิเคราะห์กลุ่มWaldbronn, เยอรมนี) การสกัดของเหลว supercritical อยู่กับรูปแบบการจัดประเภทอาชีพ 356,024 ห้องอัตโนมัติ Supercritical ดูดของเหลวที่มีปั๊มคู่ 260D (ISCO, ลิงคอล์น, NE, สหรัฐอเมริกา). 2.5 เตรียมตัวอย่างโดยการสกัดของเหลวของเหลวเนื้อเดียวกันตัวอย่างฟักทองแห้ง (0.1 กรัม) ถูกนำมาผสมกับเอทานอล95% 1 mL มีบาท 0.05% ที่จะทำให้ผิดลักษณะเดิมโปรตีนการvortex 60 s ผสมแล้วด้วยเท่ากับปริมาณของเฮกเซน ชั้นเฮกเซนจะถูกลบออกและบันทึกใน 12mm × 75mm หลอดทดลอง borosilicate และการสกัดซ้ำสามครั้ง สารสกัดเฮกเซนแต่ละแห้งภายใต้กระแสของไนโตรเจน สารสกัดถูก resuspended ใน 100 L ตัวทำละลายบีตัวอย่างและมาตรฐานมีเสถียรภาพภายใต้เหล่านี้สภาพได้นานถึงหนึ่งสัปดาห์ หลังจากการสกัดการระเหยและ resuspension เรามักจะจบลงด้วยปริมาณตัวอย่าง 100? L. 2.6 เตรียมตัวอย่างโดย supercritical fluide XTraction เป็นเนื้อเดียวกันแห้งตัวอย่างฟักทอง (0.1 กรัม) ได้รับการผสมกับ5 กรัม Hydromatrix Carotenoids ถูกสกัดด้วยของเหลวsupercritical กับ CO2.We เกรด supercritical วิเคราะห์ผลกระทบของเวลา, อุณหภูมิ (40, 80 ◦C) ความดัน (31, 35, 50MPa) ครั้งการสกัดแบบคงที่และแบบไดนามิกและการปรับปรุงในอำนาจsolvating และการเลือกของ ของเหลว supercritical CO2 ปรับเปลี่ยนของเหลว supercritical ทดสอบถูกเอทิลแอลกอฮอล์เอทิลแอลกอฮอล์(190 แอลกอฮอล์หลักฐานสี่ส่วน Methyl isobutyl คีโตนและน้ำมันก๊าดส่วนหนึ่ง); และ HPLC เมทานอลเกรด. เราได้ทดสอบ 0%, 10% และ 30% ความเข้มข้นปรับปรุง คงเท่าสกัดการทดสอบเป็นที่ 1, 10 และ 30 นาที. อัตราการไหลของก๊าซคาร์บอนคงที่2 มิลลิลิตร / นาที ผลของอุณหภูมิที่ได้รับการวัดครั้งแรกแล้วความดันที่อุณหภูมิที่ดีที่สุดร้อยละปรับปรุงแล้วที่อุณหภูมิและความดันที่ดีที่สุดแล้วในที่สุดผลของการคงเวลาการสกัด แต่ละตัวอย่างถูกสกัดสามครั้งที่อุณหภูมิที่ระบุความดันและความเข้มข้นของการปรับปรุงและextractionwas แต่ละวิเคราะห์โดยแยกโค, เพื่อทดสอบความสมบูรณ์และความสม่ำเสมอของการสกัดวิธี เราวิเคราะห์สามตัวอย่างที่แต่ละเงื่อนไข

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การเตรียมสารละลาย HPLC
วิธี HPLC และมาตรฐานของเราจะขึ้นอยู่กับวิธีการเผยแพร่ก่อนหน้านี้
[ 26 ] เฟสเคลื่อนที่ตัวทำละลายที่ทำโดยการผสม
ไนเตตระไฮโดรฟแรน และเมธานอล แล้วเพิ่ม
1 % แอมโมเนียม ซัลเฟตในน้ำเกรด HPLC และ 0.0005 %

- เรตไฮดรอกซีโทลูอีนเปรียบเทียบเป็นสารต้านอนุมูลอิสระ เป็นตัวทำละลายที่มีอยู่
ไนเตตระไฮโดรฟแรน–––เมทานอล 1% สารละลายแอมโมเนีย
สารละลายซัลเฟต ( 85:5:5:5 , V / v / v / v ) และตัวทำละลาย B ที่มีอยู่
ไนเตตระไฮโดรฟแรน–––เมทานอล 1% สารละลายแอมโมเนียม ซัลเฟต โซลูชั่น ( 55:35:5:5
V / V / V / V ) แต่ละตัวทำละลาย
เตรียมสดก่อนใช้ มาตรฐานและถูกเตรียมโดยละลาย

สำหรับมาตรฐานประมาณ 1mg ในโทลูอีนเอทานอล ( 1:99 ( V / V ) มาตรฐานเตรียม
โดยมวลและเก็บไว้ในที่มืดที่อุณหภูมิ 4 ◦ นานถึง 2 สัปดาห์ ก่อนใช้
.
2.4 . วิธีโครมาโทกราฟีของเหลวอุปกรณ์
ถูกวิ่งบน Agilent 1100 ลาด
โครมาโตกราฟกับปั๊มไบนารี degasser ตู้เย็น เครื่องทำน้ำอุ่น autosampler
, คอลัมน์ , และ ไดโอด เรย์ตรวจสอบ วิเคราะห์ และตีความและใช้

เป็น chemstation สำหรับ LC 3D กับการแก้ไข a.08.03 ( 847 )
Agilent เทคโนโลยีวิ่งบนเรือคายัคด้วย
xm600 รคอมพิวเตอร์ Windows NT ( Hewlett Packard GmbH , การวิเคราะห์
เคมีกลุ่ม waldbronn , เยอรมัน ) การสกัด supercritical fluid
อยู่กับ isco แบบอัตโนมัติ 356024 หอการค้า -
ของเหลวระบายกับปั๊มคู่ 260d ( isco
, ลินคอล์น , NE , USA ) .
2.5 การเตรียมตัวอย่างโดยการสกัดด้วยของเหลวและแห้งฟักทองอย่างเป็นเนื้อเดียวกัน

( 0.1 กรัม ) คือผสมกับ 1ml 95% เอทานอล ที่มีร้อยละ 0.05 บาทต่อนม
โปรตีน vortexed 60 วินาที แล้วผสมกับปริมาณเท่ากับ
ของเฮกเซน . ส่วนเฮกเซนชั้นถูกลบออกและช่วยชีวิต
12mm × 75mm borosilicate ในหลอดทดลองและการสกัด
ซ้ำ 3 ครั้ง แต่ละใบสารสกัดแห้งภายใต้
กระแสของไนโตรเจน สารสกัดที่ได้ resuspended 100  L
ตัวทำละลาย Bตัวอย่างมาตรฐานและมีเสถียรภาพภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้
ถึงหนึ่งสัปดาห์ หลังจากการสกัดและระเหย
resuspension เรามักจะจบลงด้วยตัวอย่างปริมาตร 100 ลิตร

 2.6 การเตรียมตัวอย่างโดยยิ่งยวด fluide xtraction
เนื้อเดียวแห้งฟักทองตัวอย่าง ( 0.1 กรัม ) ผสมกับ hydromatrix
5 g . คาโรทีนอยด์ถูกสกัดด้วยของไหลภาวะเหนือวิกฤตร่วมกับ CO2
เกรดยิ่งยวด .เราวิเคราะห์
ผลเวลาอุณหภูมิ ( 40 , 80 ◦ C ) , ความดัน ( 31 ,
35 , 50mpa ) แบบคงที่และแบบไดนามิก และขยายเวลาการสกัด
บน solvating อำนาจและการเลือกเกิดของ CO2 fluid
- . การปรับเปลี่ยน ( supercritical fluid การทดสอบเอทิลแอลกอฮอล์ใช้
( 190 พิสูจน์แอลกอฮอล์ 4 ส่วนเมทิลไอโซบิวทิล
คีโตนและส่วนหนึ่งน้ำมันก๊าด ) ; และเมทานอลเกรด HPLC .
เราทดสอบ 0 %10 % และ 30 % ) 2 . ไฟฟ้าสถิต
การสกัดครั้งทดสอบ 1 , 10 และ 30 นาที
ก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์อัตราการไหลคงที่ที่
2 มล. / นาที ผลของอุณหภูมิวัดแรกแล้ว
ความดันที่อุณหภูมิที่ดีที่สุด แล้วเปอร์เซ็นต์ที่อุณหภูมิและความดันที่
ที่ดีที่สุดแล้วในที่สุดผลของเวลาในการสกัดแบบคงที่

แต่ละตัวอย่างถูกสกัดที่
3 ครั้งระบุ อุณหภูมิ ความดัน และการเปลี่ยนแปลงความเข้มข้น
และแต่ละ extractionwas วิเคราะห์โดยแยก chromatography
เพื่อทดสอบความสมบูรณ์และมีความสม่ำเสมอของการสกัดด้วย

เราวิเคราะห์ตัวอย่างทั้งสามในแต่ละเงื่อนไข