In Vivo DeletionsThe histone H3-H4

In Vivo Deletions
The histone H3-H4 deletion constructs were introduced into the chrumo-
1. Abbreviation used in this paper: ARS, autonomously replicating segment some using the shuttle vector YRpl4 and a protocol as previously suggested (23, 48). The YRpl4 vector carded the SUP11 ochre suppressor and thus the integrated plasmid could be detected by suppression of ade2-101 in the host yeast. This permitted the construction of a diploid that was homozygous for the integration of the shuttle plasmids at the histone loci. Diploid strain YP3 was transformed to UP, A + with YRpl4 plasmid derivatives conraining the copy-I or copy-II deletion constructs. The transformants were pink as a result of partial suppression of the homozygous diploid ade2-101
alleles by one copy of the SUPll plasmid gene. Isolates were sporulated and tetrads were dissected to yield two red and two white spore colonies. White segregants were the result of complete suppression of the single haploid ade2-101 allele by the plasmid SUP11 gene. The white colonies were screened for isolates that carried the YRpl4-histone deletion plasmids integrated at the histone loci by Southern blot hybridization analysis. From this set, a and Figure 1. Organization of the histone H3-H4 gene loci. The locations of the historic H3 and H4 genes are shown for the two nonallelic loci with respect to cloned DNA fragments. The positions of an unrelated gene SMTI, and the autonomous replication element, ARS, are also shown for the copy-I locus. The extents of H3-H4 gene deletions are indicated by the hashed bars over each of the maps. Each deletion removes the entire transcribed region for the H3 and H4 genes, For the copy-I locus, the SMTI gene was left intact but the ARS element was removed. 0t haploids were mated to give white diploids homozygous for the integrated
shuttle plasmid. The white homozygous diploids were grown on YPD plates containing1.5 M ethylene glycol to select for those cells in which the integrated shuttle vector had excised (13, 42). These cells gave pink colonies because of the loss of one copy of SUPH. Pink diploids were again sporulated and tetrads dissected to give two red and two white spore colonies. The red colonies identified meiotic segregants that inherited the chromosome in which the shuttle plasmid had excised. Genomic DNA from these red isolates were
screen by Southern blot analysis to detect the cells in which the excision of the shuttle plasmid left the histone gene deletion in the chromosome.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในการลบ Vivoสร้างลบฮิสโตน H3 H4 ถูกนำมาใช้ในการ chrumo-1. ตัวย่อที่ใช้ในเอกสารนี้: อาท การจำลองแบบด้วยตนเองส่วนบางโดยใช้เวกเตอร์รถ YRpl4 และโพรโทคอก่อนหน้านี้ แนะนำ (23, 48) เวกเตอร์ YRpl4 ใบจับ SUP11 เหลือง และจึง สามารถพบ plasmid รวม โดยปราบปรามของ ade2-101 ในยีสต์โฮสต์ มีพฤติกรรมมักที่หลักสำหรับการรวมของ plasmids รถที่ loci ฮิสโตน ก่อสร้างได้ พฤติกรรมมักเครียด YP3 ถูกแปลง เพื่อ ขึ้น A + กับ YRpl4 plasmid อนุพันธ์ conraining สำเนา-ฉันหรือสำเนา II สร้างลบ Transformants มีสีชมพูจากการปราบปรามบางส่วนของหลักพฤติกรรมมัก ade2-101alleles โดยสำเนาของยีน plasmid SUPll แยกได้ sporulated และ tetrads ถูก dissected ผลสองและสองอาณานิคมสปอร์สีขาว Segregants สีขาวมีผลสมบูรณ์ปราบปรามของอัลลี ade2-101 พริกเดียวโดยยีน SUP11 plasmid อาณานิคมขาวถูกคัดกรองการแยกที่ plasmids ลบฮิสโตน YRpl4 ที่รวมที่ loci ฮิสโตน โดยวิเคราะห์การ hybridization ใต้รอยเปื้อน จากนี้ มี และรูปที่ 1 องค์กรของ loci ยีนฮิสโตน H3 H4 มีแสดงตำแหน่งของยีน H3 และ H4 ประวัติศาสตร์สำหรับ loci nonallelic สองเกี่ยวกับชิ้นส่วนดีเอ็นเอโคลน ตำแหน่งของยีนเกี่ยวข้องกับ SMTI และองค์จำลองแบบอิสระ ARS ยังแสดงสำเนา-ฉันโลกัสโพล Extents ของ H3 H4 ยีนลบจะแสดง ด้วยแถบแฮเหนือของแผนที่ การลบแต่ละเอาภูมิภาคทับสำหรับ H3 และ H4 ยีน สำเนา-ฉันโลกัสโพล ยีน SMTI ถูกทิ้งไว้ตามเดิม แต่องค์ประกอบที่ ARS ถูกเอาออก 0t haploids ได้เข้าคู่เพื่อให้ขาว diploids หลักการบูรณาการส่ง plasmid Diploids หลักขาวที่ปลูกบน YPD แผ่น containing1.5 M เอทิลีนไกลคอการเลือกสำหรับเซลล์เหล่านั้นที่เวกเตอร์รวมรถรับส่งมีสรรพสามิต (13, 42) เซลล์เหล่านี้ให้สีชมพูอาณานิคมเนื่องจากสูญเสียหนึ่งสำเนา SUPH Diploids สีชมพูได้อีก sporulated และ tetrads dissected ให้สองสีแดงและสีขาวสปอร์สองอาณานิคม อาณานิคมสีแดงระบุ segregants meiotic ที่รับโครโมโซมที่ plasmid รถมีสรรพสามิต ดีเอ็นเอการจากแยกแดงเหล่านี้ได้หน้าจอ โดยบล็อทภาคใต้วิเคราะห์เพื่อตรวจหาเซลล์ที่ผ่าตัดเล็กของ plasmid รถซ้ายการฮิสโตนลบยีนในโครโมโซม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในร่างกายลบ
สโตน H3-H4 โครงสร้างการลบถูกนำเข้าสู่ chrumo-
1 ย่อที่ใช้ในบทความนี้: ARS, ตนเองจำลองส่วนบางคนใช้รถรับส่ง YRpl4 เวกเตอร์และโปรโตคอลที่เป็นข้อเสนอแนะก่อนหน้านี้ (23, 48) เวกเตอร์ YRpl4 ปลิวว่อนต้าน SUP11 เหลืองและทำให้พลาสมิดแบบบูรณาการจะได้รับการตรวจพบโดยการปราบปรามของ ade2-101 ในยีสต์โฮสต์ นี้ได้รับอนุญาตการก่อสร้างของโครโมโซมที่เป็น homozygous สำหรับการรวมกลุ่มของพลาสมิดรถรับส่งที่ตำแหน่งสโตนที่ YP3 ความเครียดซ้ำถูกเปลี่ยนขึ้น, A + YRpl4 อนุพันธ์พลาสมิด conraining สำเนา-I หรือคัดลอก-II โครงสร้างลบ transformants สีชมพูเป็นผลมาจากการปราบปรามบางส่วนของ homozygous ade2-101 ซ้ำ
อัลลีลโดยหนึ่งสำเนาของพลาสมิดยีน SUPll พบแบคทีเรียที่ sporulated และ tetrads ถูกชำแหละเพื่อให้ทั้งสองสีแดงและสองอาณานิคมของสปอร์สีขาว ลูกผสมสีขาวเป็นผลมาจากการปราบปรามที่สมบูรณ์แบบของอัลลีล ade2-101 เดียวเดี่ยวโดย SUP11 ยีนพลาสมิด อาณานิคมสีขาวถูกคัดกรองสำหรับสายพันธุ์ที่ดำเนิน YRpl4-สโตนพลาสมิดลบแบบบูรณาการที่ตำแหน่งสโตนโดยการวิเคราะห์การผสมพันธุ์ภาคใต้ดวง จากชุดนี้และรูปที่ 1 องค์การของยีนตำแหน่งสโตน H3-H4 สถานที่ของประวัติศาสตร์และ H3 H4 ยีนจะแสดงสำหรับทั้งสองตำแหน่ง nonallelic เกี่ยวกับการโคลนดีเอ็นเอ ตำแหน่งของ SMTI ยีนที่ไม่เกี่ยวข้องและองค์ประกอบการจำลองแบบอิสระ ARS ยังมีการแสดงสำหรับการคัดลอกผมเชื่ออำนาจในตน extents ในของ H3-H4 ลบยีนจะถูกระบุโดยบาร์ถกมากกว่าแต่ละแผนที่ แต่ละลบลบภูมิภาคคัดลอกทั้งหมดสำหรับ H3 และ H4 ยีนสำหรับการคัดลอกฉันทียีน SMTI ถูกทิ้งไว้เหมือนเดิม แต่องค์ประกอบ ARS ถูกลบออก 0T ข้าวโพดที่ regenerate ได้รับการผสมพันธุ์เพื่อให้ diploids ขาว homozygous สำหรับแบบบูรณาการ
พลาสมิดรถรับส่ง diploids homozygous สีขาวปลูกบนจาน YPD containing1.5 M Ethylene Glycol เพื่อเลือกสำหรับผู้ที่อยู่ในเซลล์ซึ่งเวกเตอร์รถรับส่งแบบบูรณาการได้พอ (13, 42) เซลล์เหล่านี้ให้อาณานิคมสีชมพูเนื่องจากการสูญเสียของหนึ่งสำเนาของทะเลแดง diploids สีชมพูถูก sporulated อีกครั้งและ tetrads ชำแหละเพื่อให้ทั้งสองสีแดงและสองอาณานิคมของสปอร์สีขาว อาณานิคมแดงระบุลูกผสม meiotic ที่ได้รับการถ่ายทอดโครโมโซมที่พลาสมิดรถรับส่งได้พอ ดีเอ็นเอจากสายพันธุ์สีแดงเหล่านี้เป็น
หน้าจอโดยการวิเคราะห์ blot ภาคใต้เพื่อตรวจหาเซลล์ที่ตัดออกจากพลาสมิดรถรับส่งที่เหลือลบสโตนยีนในโครโมโซม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ฤทธิ์ในการลบที่ช่วย h3-h4 การลบโครงสร้างถูกแนะนำใน chrumo -1 . คำย่อที่ใช้ในเอกสารนี้ : ARS อัตโนมัติจําลอง , ส่วนโดยใช้รถเวกเตอร์ yrpl4 และโปรโตคอลเป็นก่อนหน้านี้แนะนำ ( 23 , 48 ) การ yrpl4 เวกเตอร์ใบเหลืองที่ sup11 ochre เครื่องห้าม และดังนั้นจึงสามารถตรวจพบได้โดยรวม ในการปราบปราม ade2-101 ในโฮสต์ของยีสต์ นี้ได้รับอนุญาตการก่อสร้างของชาวจีนที่เป็นส่วนสำหรับการรวมของพลาสมิดที่ช่วยส่งของ . เกิดความเครียด yp3 ได้ถูกขึ้นเป็น + กับ yrpl4 พลาสมิด conraining อนุพันธ์ที่ copy-i หรือคัดลอกโครงสร้าง 2 ลบ . พลาสมิดสีชมพูเป็นผลจากการปราบปรามบางส่วนของ ade2-101 ดิพลอยด์โฮโมไซกัสอัลลีลหนึ่งสำเนาของ supll พลาสมิดของยีน ไอโซเลทและสร้างสปอร์มากชุดสี่ถูกตัดผลผลิตสองสีแดงและสองอาณานิคมสปอร์สีขาว segregants สีขาว เป็นผลจากการปราบปรามที่สมบูรณ์ของยีนโครโมโซมเดี่ยว ade2-101 โดยยีน sup11 พลาสมิด อาณานิคมผิวขาวจากสายพันธุ์ที่ถือ yrpl4 ช่วยแบบบูรณาการที่ช่วยลบพลาสมิดของ Southern blot hybridization โดยการวิเคราะห์ . จากชุดนี้ และรูปที่ 1 องค์กรของฮิสโตน h3-h4 ยีนตำแหน่ง . สถานที่ในประวัติศาสตร์และ H4 H3 ยีนแสดงสำหรับสอง nonallelic โลไซที่มีการโคลนชิ้นดีเอ็นเอ ตำแหน่งของยีนที่ไม่เกี่ยวข้อง smti และอิสระแบบองค์ประกอบ อาท ยังเป็นสถานที่ copy-i . ในขอบเขตของ h3-h4 ยีนลบจะถูกระบุโดย hashed บาร์มากกว่าแต่ละแผนที่ ในการลบลบทั้งหมดและภูมิภาคสำหรับ H3 H4 และยีน ในความเชื่อ copy-i , smti ยีนอยู่เหมือนเดิมแต่เป็นองค์ประกอบจะถูกลบออก 0t haploids เป็นคู่กันให้ Diploids ยีนแบบสีขาวรับส่งพลาสมิด สีขาว ส่วนที่ปลูกบนแผ่น ypd Diploids containing1.5 M เอทิลีนไกลคอลเพื่อเลือกสำหรับเซลล์ที่การรับส่งฟรีมีตัด ( 13 , 42 ) เซลล์เหล่านี้ให้โคโลนีสีชมพูเนื่องจากการสูญเสียของสำเนา suph . Diploids สีชมพูอีกครั้งและสร้างสปอร์มากผ่าให้สองชุดสี่แดงและสองอาณานิคมสปอร์สีขาว อาณานิคมแดงระบุว่าโครโมโซมในเซลล์ segregants สืบทอดซึ่งกระสวยพลาสมิดได้เอาออก ดีเอ็นเอจากไอโซเลทเหล่านี้สีแดงหน้าจอโดยการทำ Southern blot analysis พบเซลล์ที่มีพลาสมิดที่ส่งออกไปช่วยลบยีนในโครโมโซม