Before transformation, the phytotox

Before transformation, the phytotoxic level of selective
reagent, kanamycin, was determined. Leaf disks from
shoots were transferred on differentiation medium containing
different levels of kanamycin (20, 30, 40, 50, 60,
70, and 80 mg/l). The events with respect to necrosis and
shoot differentiation of leaf explants were recorded. For
plant transformation, leaf disks were submerged in the
bacterial suspension for 5 min, and co-cultivated in darkness
for 3 days at
25°ë
. Then, the leaf disks were transferred
to selective medium supplemented with hormones
and kanamycin, together with 500 mg/l cefotaxime. For
PCR analysis, DNA was isolated from young leaves of
putative transgenic and wild-type plantlets grown in soil.
The forward and reverse primers specific to
betA
in
pRokII plasmid were used: 5'-ATCGATTCTAGACCCGGGATGCAATTTGACTACATCATTATT-
3' and
5'-GATATCGAGCTCAACTCTCAATTCTGATCGGTTCCTGC-
3'. The PCR cycling protocol was as follows:
an initial denaturing at
94°ë
for 2 min; 30 cycles
of 30 s at
94°ë, 30
s at
65°ë,
and 2 min at
72°ë
; and a
final extension at
72°ë
for 10 min. PCR products were
separated electrophoretically in the 1% agarose gel.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ก่อนการแปลง phytotoxic ระดับงานรีเอเจนต์ กานามัยซิน ที่ถูกกำหนด ใบดิสก์จากยอดที่โอนในการสร้างความแตกต่างที่ประกอบด้วยขนาดกลางระดับต่าง ๆ ของกานามัยซิน (20, 30, 40, 50, 6070 และ 80 mg/l) เหตุการณ์เกี่ยวกับการตายเฉพาะส่วน และยิงสร้างความแตกต่างของใบบันทึก explants สำหรับพืชการเปลี่ยนแปลง ใบดิสก์มีน้ำท่วมในระงับเชื้อแบคทีเรีย 5 นาทีและร่วมปลูกในความมืดสำหรับ 3 วันที่สัญลักษณ์° 25. จากนั้น มีการถ่ายโอนดิสก์ใบไม้การใช้สื่อเสริม ด้วยฮอร์โมนและกานามัยซิ น กับเซฟโฟแทกซิม 500 mg/l สำหรับการวิเคราะห์ PCR ดีเอ็นเอแยกต่างหากจากใบอ่อนของputative ถั่วเหลือง และ ชนิดป่า plantlets ปลูกในดินการไปข้างหน้า และย้อนกลับไพรเมอร์เฉพาะBetaในใช้ pRokII plasmid: - ATCGATTCTAGACCCGGGATGCAATTTGACTACATCATTATT - 5'3 และ-GATATCGAGCTCAACTCTCAATTCTGATCGGTTCCTGC - 5'3. โพรโทคอขี่ PCR ถูกเป็นดังนี้:การเริ่มต้น denaturing ที่94 °สัญลักษณ์สำหรับ 2 นาที รอบ 3030 s ที่สัญลักษณ์ 94 องศา 30s ที่65 °สัญลักษณ์และ นาที 2 ที่72 °สัญลักษณ์; และภายในสุดท้ายที่72 °สัญลักษณ์สำหรับ 10 นาที PCR ได้ผลิตภัณฑ์แยก electrophoretically ในเจ 1% agarose

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ก่อนการเปลี่ยนแปลงในระดับของพิษเลือก
น้ำยา KANAMYCIN ถูกกำหนด ดิสก์ใบจาก
หน่อถูกโอนในสื่อที่มีความแตกต่าง
ในระดับที่แตกต่างกันของ KANAMYCIN (20, 30, 40, 50, 60,
70, และ 80 มิลลิกรัม / ลิตร) เหตุการณ์ที่เกิดขึ้นเกี่ยวกับการตายของเนื้อเยื่อและ
ความแตกต่างของการถ่ายชิ้นส่วนใบที่ถูกบันทึกไว้ สำหรับ
การเปลี่ยนแปลงอาคารดิสก์ใบถูกจมอยู่ใต้น้ำใน
การระงับแบคทีเรียเป็นเวลา 5 นาทีและร่วมปลูกฝังในความมืด
เป็นเวลา 3 วันที่25 °อี จากนั้นดิสก์ใบถูกถ่ายโอนไปยังสื่อที่เลือกเสริมด้วยฮอร์โมนและ KANAMYCIN ร่วมกับ 500 มิลลิกรัม / ลิตร cefotaxime สำหรับการวิเคราะห์ PCR ดีเอ็นเอที่แยกได้จากใบอ่อนของยีนสมมุติและต้นกล้าป่าชนิดที่ปลูกในดิน. ไปข้างหน้าและย้อนกลับไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงเพื่อBeta ในพลาสมิด pRokII ถูกนำมาใช้: 5'-ATCGATTCTAGACCCGGGATGCAATTTGACTACATCATTATT- 3 'และ5'-GATATCGAGCTCAACTCTCAATTCTGATCGGTTCCTGC- 3 ' โปรโตคอลการขี่จักรยาน PCR เป็นดังนี้: denaturing เริ่มต้นที่94 °อี2 นาที; 30 รอบของ 30 วินาทีที่94 ° E, 30 s ที่65 ° E, และ 2 นาทีที่72 °อี; และขยายสุดท้ายที่72 °อีเป็นเวลา 10 นาที ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ถูกแยกออก electrophoretically ในเจล agarose 1%

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ก่อนที่จะแปลง ระดับของการ phytotoxic
รีเอเจนต์ ทั้งสองถูกกำหนดไว้ ใบดิสก์จากยอดในการโอน

อาหารที่มีระดับที่แตกต่างกันของทั้งสอง ( 20 , 30 , 40 , 50 , 60 , 70 และ 80 มิลลิกรัม /
, L ) เหตุการณ์เกี่ยวกับโรคใบไหม้และความแตกต่างของการเจริญเติบโต
ยิงใบบันทึก สำหรับ
แปลงพืชแช่ใน
ใบดิสก์bacterial suspension เป็นเวลา 5 นาที และร่วมปลูกในที่มืด
3 วันที่ 25 °ë

แล้วใบดิสก์โอน
ให้ใช้อาหารสูตร MS ที่เสริมด้วยฮอร์โมน
และ kanamycin ร่วมกับ 500 มก. / ล. โฟ . การวิเคราะห์ดีเอ็นเอเพื่อ
PCR ที่แยกได้จากใบอ่อนของการแสดงออกของยีนต้น
และที่ปลูกในดิน ไปข้างหน้าและย้อนกลับโดยเฉพาะ




ในเบต้าprokii พลาสมิดที่ใช้ : 5 ' - 3 ' และ atcgattctagacccgggatgcaatttgactacatcattatt -

-
gatatcgagctcaactctcaattctgatcggttcctgc 5 ' - 3 ' ร่วมจักรยานพิธีสารดังนี้
เริ่มต้นที่ 94 °ëี่

2 นาที 30 รอบ
30 s
94 °ë 30
s

°ë 65 , 2 นาทีที่ 72 °ë


; และสุดท้ายขยายที่ 72 °ë

) นาน 10 นาที ผลิตภัณฑ์
แยก electrophoretically ใน 1% เจล .