MATERIALS AND METHODSMicroorganism

MATERIALS AND METHODS
Microorganism Monascus anka GIM 3.592 (deposited in the publicly
accessible culture collection GDMCC/GIMCC, Guangdong Culture Collection Centre
of Microbiology, China) was maintained on potato dextrose agar (PDA) plates and
preserved at 4C. A sub-culture was carried out at 30C for 7 days monthly.
Culture media Pre-inoculum culture medium consisted of glucose 20 g,
peptone 10 g, yeast extract 3 g, KCl 0.5 g, KH2PO4 4 g, ZnSO4$7H2O 0.01 g, and
FeSO4$7H2O 0.01 g in 1 L of double distilled water. Inoculum culture medium and
fermentation culture medium consisted of glucose 50 g, one of the investigated
nitrogen sources (NaNO3 6.44 g or (NH4)2SO4 5.00 g or peptone 8.84 g), KCl 0.5 g,
KH2PO4 4 g, ZnSO4$7H2O 0.01 g, MgSO4$7H2O 0.5 g, and FeSO4$7H2O 0.01 g in 1 L of
double distilled water. The pH of the inoculum culture was adjusted to selected
values by HCl 1 M or NaOH 2 M. The amount of each nitrogen source in the culture
medium was selected to ensure equimolar concentrations of nitrogen (0.076 M).
Cultivation For pre-inoculum cultivation, a suspension of spores was
collected by washing PDA plates with 0.1% tween 80 solution and then approximately
3 106 spores were inoculated into 50 mL pre-inoculum culture medium in
250 mL Erlenmeyer flasks. This cultivation was carried out at 30C, 180 rpm for 30 h
in a shaker (New Brunswick Scientific).
Then, an aliquot of pre-inoculum culture (5 mL) was inoculated into 50 mL
inoculum culture medium in 250 mL Erlenmeyer flasks and incubated at 30C,
180 rpm for 15 h.
For batch fermentations, an aliquot of inoculum culture (150 mL) was inoculated
into 1.5 L of fermentation culture medium with the same composition of the inoculum
culture medium, in 3 L bioreactors (New Brunswick Scientific, USA). The
fermentation conditions were set as follows: agitation 500 rpm, temperature 30C,
aeration rate 1.5 L/min. The pH was kept constant at 2.5, 4.0 or 6.5 during the whole
fermentation period by HCl 1 M or NaOH 2 M. For two-stage pH control fermentations,
pH was kept constant at 2.5 for the first 96 h and then maintained at 6.5
during the following 72 h. During the fermentation, a silicone antifoaming agent was
added when necessary.
Analysis methods An aliquot of fermentation sample (20 ml) was filtered
under vacuum through a 0.8 mm mixed cellulose esters membrane. The filtrate
(extracellular broth) was appropriately diluted to determine the residual glucose
concentration and the extracellular pigments concentration. The absorbance spectrum
of the extracellular broth was recorded by a UV/VIS spectrophotometer (Unico,
USA) from 350 nm to 550 nm at 1 nm intervals. The absorbance units (AU) at specific
wavelengths (410, 470 and 510 nm) were used as an index of the extracellular
pigments concentration. The residual glucose was quantified by the standard 3, 5-
dinitrosalicylic acid (DNS) method.
The mycelia on the filter were washed three times with double distilled water
and collected for intracellular pigments concentration analysis. The mycelia were
resuspended in a volume of acidic aqueous ethanol (70%, v/v, in aqueous HCl, pH 2)
equal to the initial volume of the aliquot (20 mL) and incubated 1 h. The pH of the
ethanol aqueous solution was acidic to prevent orange pigments shifting from orange
to red. The suspension was filtered with a pre-weighed filter paper and the
filtrate (intracellular extract) was subjected to the same pigments quantitation
described for the extracellular broth. The mycelia remained on the pre-weighed
filter was dried to constant weight at 60C to determine dry cell weight (DCW).
Thin layer chromatography (TLC) analysis was performed with two different
mobile phases on Silica gel 60 F254 TLC plates (Merck) (33). One mobile phase
consisted of methylbenzene/ethyl acetate/formic acid (7:3:1) and was used to
separate the red pigments from other pigments. With this mobile phase the red
pigments were separated with two Rf values of 0.17 and 0.21, while the yellow and
orange pigments co-eluted with Rf values of 0.64 and 0.68. A second mobile phase
consisted of n-hexane/ethyl acetate/petroleum ether (30:17:5) and was utilized to
separated the yellow pigments from the other pigments. The yellow pigments had Rf
values of 0.67 and 0.73. The amount of sample loaded on the TLC plate was quantitative:
10 ml of sample with an absorbance value at 410 nm adjusted to 50 AU, was
loaded on the TLC plate. For samples with absorbance value at 410 nm below 50
units, a volume (ml) equal to 500/AU was loaded.
The color characteristics of the pigments were analyzed in terms of CIELAB color
space parameters. The highest absorbance values of intracellular and extracellular
pigments solutions among 410 nm, 470 nm or 510 nm were adjusted to the range of
1.5e2.0 for further analysis. The parameters (L*, a*, b*, C*, hab) of pigments solutions
in the CIELAB color space were measured by a CR-400 colorimeter (Minolta, Osaka,
Japan). L*, which ranges from 0 (perfect black) to 100 (perfect white), represents the
lightness; a* and b* represent the color coordinates, where positive a* and b* values
indicate red and yellow while negative a* and b* values indicate green and blue,
respectively; C* is the chroma where C* ¼ [(a*)2 þ (b*)2
]
1/2 and represents the
saturation of the color: chroma values closes to 0 indicate duller or grayer colors,
whereas higher values indicate more vivid colors; the hue angle (hab), where
hab ¼ tan1
(b*/a*), is a numerical value that represents the hue: hue angles of 0, 90,
180 and 270 represent red, yellow, green and blue, respectively.
RESU

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการจุลินทรีย์ Monascus anka ห้องออก 3.592 (ฝากในสาธารณะวัฒนธรรมที่สามารถเข้าถึงคอลเลกชัน GDMCC/GIMCC ศูนย์รวบรวมวัฒนธรรมของมณฑลกวางตุ้งจุลชีววิทยา จีน) ที่อยู่ในแผ่นมันฝรั่งขึ้น agar (PDA) และรักษาที่ค. 4 วัฒนธรรมย่อยที่ดำเนินที่ 30 C 7 วันรายเดือนสื่อวัฒนธรรม inoculum ก่อนวัฒนธรรมสื่อประกอบด้วยน้ำตาลกลูโคส 20 กรัมpeptone 10 กรัม ยีสต์สารสกัดจาก 3g, KCl 0.5 g, KH2PO4 4 g, ZnSO4$ 7H2O 0.01 g และFeSO4$ 7H2O 0.01 g ในคู่น้ำกลั่น 1 ลิตร สื่อวัฒนธรรม inoculum และสื่อวัฒนธรรมหมักประกอบด้วยน้ำตาลกลูโคส 50 กรัม หนึ่งของการสอบสวนแหล่งไนโตรเจน (NaNO3 6.44 g หรือ (NH4) 2SO4 5.00 g หรือ 8.84 g peptone), KCl 0.5 gKH2PO4 4 g, 0.01 g, MgSO4$ 7H2O 7H2O $ ZnSO4 0.5 g และ FeSO4$ 7H2O 0.01 g ใน 1 Lน้ำกลั่นคู่ PH ของวัฒนธรรม inoculum ถูกปรับปรุงให้เลือกค่าโดย HCl 1 M NaOH 2 M ยอดเงินของแต่ละแหล่งไนโตรเจนในสื่อที่ถูกเลือกให้ equimolar ความเข้มข้นของไนโตรเจน (0.076 เมตร)เพาะปลูกสำหรับ inoculum ก่อนเพาะปลูก เพาะเฟิร์นระงับได้รวบรวม โดยซักผ้าแผ่น PDA ด้วย 0.1% tween 80 โซลูชันแล้วประมาณ3 เพาะเฟิร์น 106 ถูก inoculated เป็นสื่อวัฒนธรรม inoculum ก่อน 50 mL ในนำ Erlenmeyer 250 mL เพาะปลูกนี้ได้รับการดำเนินที่ 30C, 180 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 hในเชคเกอร์เป็น (รัฐนิวบรันสวิกวิทยาศาสตร์)แล้ว เป็นส่วนลงตัวของวัฒนธรรม inoculum ก่อน (5 mL) มี inoculated เป็น 50 mLวัฒนธรรม inoculum กลางในน้ำ 250 mL Erlenmeyer และ incubated ที่ 30Crpm 180 สำหรับ 15 hสำหรับชุดหมักแหนม เป็นส่วนลงตัวของวัฒนธรรม inoculum (150 มล.) inoculatedเป็น L 1.5 ของหมักกลางวัฒนธรรมมีองค์ประกอบเดียวของ inoculumสื่อวัฒนธรรม ใน 3 L bioreactors (รัฐนิวบรันสวิกวิทยาศาสตร์ สหรัฐอเมริกา) ที่หมักเงื่อนไขถูกกำหนดเป็นดังนี้: อาการกังวลต่อ 500 rpm อุณหภูมิ 30Caeration อัตรา 1.5 L/min PH ถูกเก็บคงที่ 2.5, 4.0 หรือ 6.5 ในช่วงทั้งหมดระยะเวลาหมักโดย HCl 1 M NaOH 2 M การหมักแหนมที่ควบคุม pH สองเก็บค่าคงที่ที่ 2.5 สำหรับ h 96 แรก และรักษาแล้ว ที่ 6.5 pHระหว่าง h 72 ต่อไปนี้ ระหว่างการหมัก เป็นตัวแทน antifoaming ซิลิโคนเพิ่มเมื่อจำเป็นวิธีวิเคราะห์ที่มีกรองเป็นส่วนลงตัวของหมักดองตัวอย่าง (20 มล.)ภายใต้สุญญากาศผ่านมม. 0.8 ผสมเยื่อเซลลูโลส esters การสารกรอง(extracellular ซุป) ถูกทำให้เหมาะสมเพื่อตรวจสอบน้ำตาลกลูโคสส่วนที่เหลือความเข้มข้นและความเข้มข้นของเม็ดสี extracellular สเปกตรัม absorbanceของซุป extracellular ถูกบันทึก โดยมี UV/VIS เครื่องทดสอบกรดด่าง (ยูนิโก้สหรัฐอเมริกา) จาก 350 nm ไป 550 nm ในช่วงนาโนเมตร 1 หน่วย absorbance (AU) ที่เฉพาะความยาวคลื่น (410, 470 และ 510 nm) ใช้เป็นดัชนีของการ extracellularสีเข้มข้น กลูโคสส่วนที่เหลือถูก quantified โดย 3 มาตรฐาน 5 -dinitrosalicylic กรด (DNS) วิธีการMycelia ตัวกรองถูกล้างครั้งที่ 3 น้ำกลั่นคู่และรวบรวมการวิเคราะห์ความเข้มข้นของเม็ดสี intracellular Mycelia ถูกresuspended ในปริมาตรของเอทานออควีเปรี้ยว (70%, v/v ในอควี HCl, pH 2)เท่ากับปริมาตรของส่วนลงตัว (20 มล.) และ incubated 1 h PH ของการเอทานอลละลายเป็นกรดเพื่อป้องกันการขยับจากส้มสีส้มการแดง การระงับมีกรอง ด้วยกระดาษกรองชั่งน้ำหนักก่อนและสารกรอง (intracellular สารสกัด) อยู่ภายใต้การวิเคราะห์หาปริมาณของเม็ดสีเดียวกันอธิบายสำหรับซุป extracellular Mycelia ยังคงอยู่บนชั่งน้ำหนักก่อนตัวกรองที่แห้งน้ำหนักคงที่ที่ 60C กำหนดน้ำหนักเซลล์แห้ง (DCW)ทำการวิเคราะห์บางชั้น chromatography (TLC) กับสองแตกต่างกันระยะเคลื่อนที่บนแผ่น F254 TLC เจล 60 (เมอร์ค) (33) โมบายระยะหนึ่งประกอบด้วย methylbenzene/เอทิล acetate/กรด (7:3:1) และใช้แยกสีแดงจากสีอื่น ๆ ด้วยมือนี้ระยะสีแดงสีถูกแบ่ง ด้วยค่าสองค่า Rf ของ 0.17 0.21 ในขณะที่สีเหลือง และสีส้ม eluted ร่วมกับค่า Rf 0.64 และ 0.68 ระยะที่สองเคลื่อนประกอบด้วยเอ็นเฮกเซน/เอทิล acetate/ปิโตรเลียม อีเทอร์ (30:17:5) และมีใช้การแยกสีเหลืองจากสีอื่น ๆ สีเหลืองมี Rfค่า 0.67 และ 0.73 จำนวนตัวอย่างที่โหลดบนแผ่น TLC เป็นเชิงปริมาณ:10 มิลลิลิตรของตัวอย่างกับค่า absorbance ที่ 410 nm ปรับ 50 AU ถูกโหลดบนแผ่น TLC สำหรับตัวอย่างที่มีค่า absorbance ที่ 410 nm ด้านล่าง 50หน่วย เป็นปริมาตร (ml) เท่ากับ 500/AU ถูกโหลดคุณลักษณะของสีของสีถูกวิเคราะห์ใน CIELAB สีพื้นที่พารามิเตอร์ ค่า absorbance สูง intracellular และ extracellularสีโซลูชั่นระหว่าง 410 nm, 470 nm หรือ 510 nm ได้ปรับปรุงช่วงของ1.5e2.0 สำหรับการวิเคราะห์เพิ่มเติม พารามิเตอร์ (L * การ *, b * C * ถล่ม) โซลูชั่นของเม็ดสีในพื้นที่สี CIELAB ถูกวัด โดยเครื่อง CR 400 (Minolta โอซาก้าญี่ปุ่น) L * ซึ่งมีตั้งแต่ 0 (โกดำ) ถึง 100 (สีขาวสมบูรณ์แบบ), แทนความสว่าง การ * และ b * แสดงพิกัดสี ที่บวก * และค่า b *สีแดงและสีเหลืองในขณะลบการ * และ b * ค่าบ่งชี้สีเขียวและสีน้ำเงินตามลำดับ C * เป็นความหมายที่ C * ¼ [(a*) 2 þ (b *) 2]1/2 และแสดงการความเข้มของสี: ความปิดค่าเป็น 0 บ่งชี้ duller หรือ grayer สีในขณะที่ค่าที่สูงบ่งชี้สีสดใสมาก เว้มุม (ถล่ม), ที่ถล่ม¼ตัน 1(b * / ตัว *), เป็นค่าตัวเลขที่แสดงถึงการเว้: เว้มุม 0, 90180 และ 270 แทนสีแดง สีเหลือง สีเขียว และสี น้ำเงิน ตามลำดับRESU

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการจุลินทรีย์ Monascus Anka GIM 3.592 (ฝากไว้ในที่เปิดเผยต่อสาธารณชนคอลเลกชันที่สามารถเข้าถึงวัฒนธรรมGDMCC / GIMCC, Guangdong วัฒนธรรมการเก็บศูนย์จุลชีววิทยา, จีน) ถูกเก็บรักษาไว้ในอาหารเลี้ยงเชื้อเดกซ์โทรสมันฝรั่ง (PDA) จานและเก็บรักษาไว้ที่4C วัฒนธรรมย่อยได้ดำเนินการที่ 30C เป็นเวลา 7 วันรายเดือน. สื่อวัฒนธรรมอาหารเลี้ยง Pre-เชื้อประกอบด้วยน้ำตาลกลูโคส 20 กรัม, เปปโตน 10 กรัมยีสต์สารสกัดจาก 3 กรัมโพแทสเซียมคลอไรด์ 0.5 กรัม, KH2PO4 4 กรัม, ZnSO4 $ 7H2O 0.01 กรัม และFeSO4 7H2O $ 0.01 กรัมใน 1 ลิตรของน้ำกลั่นคู่ อาหารเลี้ยงเชื้อและอาหารเลี้ยงหมักประกอบด้วยน้ำตาลกลูโคส 50 กรัมซึ่งเป็นหนึ่งในการตรวจสอบแหล่งที่มาของไนโตรเจน(NaNO3 6.44 กรัมหรือ (NH4) 2SO4 5.00 กรัมหรือเปปโตน 8.84 กรัม), โพแทสเซียมคลอไรด์ 0.5 กรัม, KH2PO4 4 กรัม, ZnSO4 $ 7H2O 0.01 กรัม MgSO4 7H2O $ 0.5 กรัมและ FeSO4 7H2O $ 0.01 กรัมใน 1 ลิตรของน้ำกลั่นคู่ พีเอชของวัฒนธรรมหัวเชื้อที่ถูกปรับเปลี่ยนเพื่อเลือกค่าโดย HCl 1 M NaOH หรือ 2 เมตรจำนวนเงินของแต่ละแหล่งไนโตรเจนในวัฒนธรรมกลางได้รับการคัดเลือกเพื่อให้แน่ใจว่ามีความเข้มข้นของไนโตรเจนequimolar (0.076 M). การเพาะปลูกสำหรับการเพาะปลูกก่อนเชื้อ, ระงับของสปอร์ที่ถูกเก็บรวบรวมโดยแผ่นPDA ล้างด้วย 0.1% ทวี 80 การแก้ปัญหาแล้วประมาณ3 106 สปอร์ถูกเชื้อเข้าสู่ 50 มลอาหารเลี้ยงเชื้อก่อนใน250 มิลลิลิตรขวด Erlenmeyer การเพาะปลูกนี้ได้ดำเนินการที่ 30C, 180 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 ชั่วโมงในเครื่องปั่น(New Brunswick วิทยาศาสตร์). จากนั้นเป็น aliquot ของวัฒนธรรมก่อนเชื้อ (5 มิลลิลิตร) ได้รับเชื้อเข้าไปใน 50 มลอาหารเลี้ยงเชื้อใน250 มิลลิลิตรขวด Erlenmeyer และบ่ม ที่ 30C, 180 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 ชม. สำหรับการหมักแหนมชุด aliquot ของวัฒนธรรมเชื้อ (150 มิลลิลิตร) ได้รับเชื้อเข้าไป1.5 ลิตรของกลางวัฒนธรรมการหมักที่มีองค์ประกอบเดียวกันของเชื้อกลางวัฒนธรรม3 L bioreactors (New Brunswick วิทยาศาสตร์ สหรัฐอเมริกา). เงื่อนไขการหมักที่ตั้งดังนี้กวน 500 รอบต่อนาที 30C อุณหภูมิอัตราการให้อากาศ1.5 ลิตร / นาที ค่า pH คงที่ที่ 2.5, 4.0 หรือ 6.5 ในช่วงที่ทั้งระยะเวลาในการหมักโดยHCl 1 M NaOH หรือ 2 เมตรสำหรับสองขั้นตอนการหมักแหนมควบคุมค่า pH ค่า pH คงที่ที่ 2.5 ครั้งแรก 96 ชั่วโมงและการบำรุงรักษาที่แล้ว 6.5 ในช่วง ต่อไปนี้ 72 ชั่วโมง ในระหว่างการหมัก, ซิลิโคนตัวแทน antifoaming ถูกเพิ่มเมื่อมีความจำเป็น. วิธีการวิเคราะห์หารของกลุ่มตัวอย่างหมัก (20 มล.) ถูกกรองภายใต้สุญญากาศผ่าน0.8 มมผสมเอสเทอเยื่อเซลลูโลส กรอง(น้ำซุป extracellular) ถูกเจือจางเหมาะสมเพื่อตรวจสอบระดับน้ำตาลที่เหลือความเข้มข้นและความเข้มข้นของสารเม็ดสี สเปกตรัมการดูดกลืนแสงของน้ำซุป extracellular ได้รับการบันทึกโดย UV / VIS spectrophotometer (ยูนิโก้, USA) จาก 350 นาโนเมตรถึง 550 นาโนเมตร ณ วันที่ 1 ช่วงนาโนเมตร หน่วยการดูดกลืนแสง (AU) เฉพาะที่ความยาวคลื่น(410, 470 และ 510 นาโนเมตร) ถูกนำมาใช้เป็นดัชนีของสารเข้มข้นเม็ดสี กลูโคสที่เหลือได้รับการวัดโดยมาตรฐานที่ 3, 5 กรด dinitrosalicylic (DNS) วิธี. เส้นใยกรองถูกล้างสามครั้งด้วยน้ำกลั่นคู่และเก็บเซลล์เม็ดสีที่เข้มข้นของการวิเคราะห์ เส้นใยถูกresuspended ปริมาณเอทานอลในน้ำเป็นกรด (70% ปริมาตร / ปริมาตรในน้ำ HCl ค่า pH 2) เท่ากับปริมาณการเริ่มต้นของการหารนี้ (20 มิลลิลิตร) และบ่ม 1 ชั่วโมง พีเอชของเอทานอลเป็นสารละลายที่เป็นกรดเพื่อป้องกันไม่ให้เม็ดสีส้มเปลี่ยนจากสีส้มเป็นสีแดง ระงับถูกกรองด้วยกระดาษกรองก่อนการชั่งน้ำหนักและการกรอง (สารสกัดเซลล์) ได้ภายใต้การวิเคราะห์เชิงปริมาณเม็ดสีเดียวกันอธิบายสำหรับน้ำซุปextracellular เส้นใยยังคงอยู่ที่ก่อนการชั่งน้ำหนักกรองแห้งให้น้ำหนักคงที่ 60C เพื่อตรวจสอบน้ำหนักเซลล์แห้ง (DCW). โคชั้นบาง (TLC) การวิเคราะห์ได้ดำเนินการกับแตกต่างกันสองขั้นตอนบนมือถือซิลิก้าเจล60 F254 แผ่น TLC (เมอร์ค) ( 33) หนึ่งเฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย methylbenzene / เอทิลอะซิเต / กรด (7: 3: 1) และถูกใช้ในการแยกเม็ดสีสีแดงจากเม็ดสีอื่นๆ ด้วยขั้นตอนนี้มือถือสีแดงเม็ดสีถูกคั่นด้วยสองค่า Rf 0.17 และ 0.21 ในขณะที่สีเหลืองและสีเม็ดสีส้มร่วมชะที่มีค่าRf 0.64 และ 0.68 ระยะที่สองมือถือประกอบด้วย n-เฮกเซน / เอทิลอะซิเต / ปิโตรเลียมอีเทอร์ (30: 17: 5) และถูกนำมาใช้เพื่อแยกเม็ดสีเหลืองจากเม็ดสีอื่นๆ สีเหลืองมี Rf ค่า 0.67 และ 0.73 ปริมาณของตัวอย่างโหลดบนแผ่น TLC เป็นเชิงปริมาณ: 10 มล. ของกลุ่มตัวอย่างที่มีการดูดกลืนแสงค่าที่ 410 นาโนเมตรปรับถึง 50 AU ถูกโหลดบนแผ่นTLC สำหรับตัวอย่างที่มีค่าการดูดกลืนแสงที่ 410 นาโนเมตรต่ำกว่า 50 หน่วยปริมาณ (มล.) เท่ากับ 500 / AU ถูกโหลด. ลักษณะสีของเม็ดสีถูกนำมาวิเคราะห์ในแง่ของสี CIELAB พารามิเตอร์พื้นที่ สูงสุดค่าการดูดกลืนแสงของเซลล์และสารการแก้ปัญหาเม็ดสีในหมู่ 410 นาโนเมตร 470 นาโนเมตรหรือ 510 นาโนเมตรได้รับการปรับให้ช่วงของ 1.5e2.0 สำหรับการวิเคราะห์ต่อ พารามิเตอร์ (L * a * b * * ซี hab) ของการแก้ปัญหาเม็ดสีในพื้นที่สีCIELAB ถูกวัดโดย colorimeter CR-400 (Minolta โอซาก้าประเทศญี่ปุ่น) L * ซึ่งมีตั้งแต่ 0 (สีดำที่สมบูรณ์แบบ) 100 (สีขาวที่สมบูรณ์แบบ) หมายถึงความสว่าง; a * และ b * แสดงพิกัดสีที่บวก a * และ b * ค่าบ่งชี้แดงและสีเหลืองในขณะที่ลบ* และ b * ค่าบ่งบอกถึงสีเขียวและสีน้ำเงิน, ตามลำดับ C * เป็นความเข้มของสีที่ C * ¼ [การ (ก *) 2 þ (b *) 2] 1/2 และแสดงให้เห็นถึงความอิ่มตัวของสี: ค่าความเข้มของสีใกล้เคียงกับ 0 บ่งชี้สีทึบหรือพระเกศา, ในขณะที่ค่าสูงแสดงให้เห็นความสดใสมากขึ้น สี มุมสี (hab) ซึ่งhab ¼สีน้ำตาล 1 (b * / a *) เป็นค่าตัวเลขที่แสดงถึงสี: มุมสีของ 0, 90, 180 และ 270 เป็นตัวแทนของสีแดง, สีเหลือง, สีเขียวและสีน้ำเงินตามลำดับ . resu

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ
จุลินทรีย์เชื้อราแอนก้า คิม 3.592 ( ฝากในสาธารณชนสามารถเข้าถึงคอลเลกชัน gdmcc วัฒนธรรม /
gimcc , Guangdong วัฒนธรรมศูนย์คอลเลกชัน
จุลชีววิทยา , จีน ) ไว้บนอาหารเลี้ยงเชื้อ potato dextrose agar ( PDA ) และแผ่น
เก็บไว้ที่ 4C . ซับวัฒนธรรมได้ดำเนินการที่ 30C 7 วัน รายเดือน
วัฒนธรรมสื่อ ก่อนโดยสื่อวัฒนธรรม ประกอบด้วยกลูโคส 20 กรัม
extract สารสกัดจากยีสต์ 10 กรัม , 3 กรัม ปริมาณ 0.5 กรัม kh2po4 4 g $ 7h2o znso4 0.01 กรัม และ feso4 7h2o
$ 0.01 กรัมใน 1 คู่ น้ำกลั่น อาหารเลี้ยงเชื้อและการหมักเชื้อ
อาหารเลี้ยงเชื้อประกอบด้วยกลูโคส 50 กรัม หนึ่งในสอบสวน
แหล่งไนโตรเจน ( NaNO3 6.44 กรัมหรือ ( NH4 ) 2so4 5.00 กรัม หรือขจัดกรัมตามลำดับ ) ปริมาณ 0.5 g ,
kh2po4 4 กรัม znso4 $ 7h2o 0.01 กรัม MgSO4 ใ $ 7h2o 0.5 กรัม และ feso4 $ 7h2o 0 .01 กรัมใน 1 ลิตร
คู่น้ำกลั่น pH ของ 3 วัฒนธรรมคือปรับค่าโดยเลือก
1 M หรือ NaOH HCl 2 เมตร ปริมาณของแต่ละแหล่งไนโตรเจนในวัฒนธรรม
กลางถูกเลือกเพื่อให้แน่ใจว่า ๆความเข้มข้นของไนโตรเจน ( 0.076 M )
การเพาะปลูกเพื่อเพาะเชื้อก่อน , ช่วงล่างสปอร์ถูก
เก็บซักแผ่น 0 พีดีเอ .1 tween 80 วิธีการแก้ปัญหาแล้วประมาณ
3 106 สปอร์เป็นเชื้อปริมาณ 50 มิลลิลิตร ก่อนสื่อวัฒนธรรมใน
เออร์เลนเมเยอร์ ขวด 250 ml . การเพาะปลูกการที่ 30C 180 รอบ 30 H
ในเครื่องปั่น ( บรุนซ์ใหม่ทางวิทยาศาสตร์ ) .
แล้วเป็นส่วนลงตัวของวัฒนธรรมก่อนเชื้อ ( 5 ml ) เป็นเชื้อ 50 ml
3 สื่อวัฒนธรรมและหมักในฟลาสก์ขนาด 250 มิลลิลิตร ขวด บ่มที่อุณหภูมิ 30C
,180 รอบ / นาทีเป็นเวลา 15 ชั่วโมง
สำหรับ fermentations แบทช์เป็นส่วนลงตัวของวัฒนธรรม 3 ( 150 มล. ) เป็นเชื้อ
เป็น 1.5 L ของวัฒนธรรมการหมักอาหารที่มีส่วนประกอบเดียวกัน ของเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อ 3
, L เครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพ ( บรุนซ์ใหม่ทางวิทยาศาสตร์ , USA )
สภาพการหมักกำหนดดังนี้ อัตราการกวน 500 รอบต่อนาทีอุณหภูมิ 30 C
, อัตราการให้อากาศ 1.5 ลิตร / นาที ค่า pH คงที่ที่ 2.5 , 40 หรือ 6.5 ตลอดระยะเวลาการหมักด้วย HCl
1 M หรือ NaOH 2 เมตร สำหรับสองขั้นตอนการควบคุม fermentations
อ , pH คงที่ที่ 2.5 สำหรับแรก 96 H แล้วไว้ที่ 6.5
ช่วงต่อไปนี้ 72 ชั่วโมง ในระหว่างหมัก , ซิลิโคนกันฟองตัวแทน

วิธีการเพิ่มเมื่อจำเป็น เป็นส่วนลงตัวตัวอย่างและการวิเคราะห์ ( 20 มล ) คือกรองสุญญากาศด้วย
08 มม. เอสเทอร์ผสมเซลลูโลสเมมเบรน 148
( และน้ำ ) คืออย่างเหมาะสมเจือจางเพื่อตรวจสอบส่วนที่เหลือกลูโคส
ความเข้มข้นและความเข้มข้นสีภายนอก . นสเปกตรัม
ของน้ำซุปที่มีการบันทึกไว้โดย UV / VIS Spectrophotometer ( Unico
, USA ) จาก 350 nm 550 nm ในช่วงเวลา 1 นาโนเมตร นหน่วย ( AU )
( 410 , ความยาวคลื่นที่เฉพาะเจาะจง470 และ 510 nm ) ซึ่งใช้เป็นดัชนีของความเข้มข้น
สีภายนอก . กลูโคสที่เหลือก็วัดได้ตามมาตรฐาน 3 , 5 -
dinitrosalicylic acid ( DNS ) .
แต่ละตัวกรองถูกล้างด้วยน้ำกลั่นสองครั้งสามครั้ง และเก็บภายในเซลล์ความเข้มข้น
สี การวิเคราะห์ และเส้นใย
resuspended ในปริมาณกรดสารละลายเอทานอล ( 70% , V / V ,ในสารละลาย HCl , pH 2 )
เท่ากับปริมาณเริ่มต้นของการเทศนา ( 20 มล. ) โดย 1 . pH ของสารละลายเป็นกรด
เอทานอลเพื่อป้องกันสีส้มเปลี่ยนจากสีส้ม
สีแดง ระงับถูกกรองด้วยกระดาษกรอง และก่อนชั่ง
กรอง ( แยกเซลล์ ) ถูกยัดเยียดให้เหมือนกันสีเซลล์
อธิบายสำหรับน้ำซุปและ .เส้นใยที่ยังคงอยู่บนก่อนชั่งน้ำหนัก
กรองแห้งน้ำหนักคงที่ที่ 60C หาน้ำหนักเซลล์แห้ง ( dcw ) .
Thin layer chromatography ( TLC ) วิเคราะห์ข้อมูลด้วยสองระยะเคลื่อนที่แตกต่างกัน
บนซิลิกาเจล 60 f254 TLC แผ่น ( Merck ) ( 33 ) หนึ่งเฟสเคลื่อนที่
ประกอบด้วยเมทิลเบนซีน / ethyl acetate / กรด ( 7:3:1 ) และถูกใช้ในการแยกเม็ดสีสีแดงจาก
สีอื่น ๆกับโทรศัพท์มือถือนี้เฟสสีแดง
ถูกแยกกับสอง RF เท่ากับ 0.17 และ 0.21 , ในขณะที่สีเหลืองและสีส้ม
ตัวอย่างกับค่า Rf เท่ากับ 0.64 Co และ 0.68 . เป็นเฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยบีบ 2
/ / ปิโตรเลียมอีเทอร์เอทิลอะซิเตท ( 30:17:5 ) และใช้

แบ่งสีสีเหลืองจากสีอื่น ๆ สี เหลือง มีค่า Rf
0.67 และ 0.73 .ปริมาณตัวอย่างที่โหลดบน TLC plate เชิงปริมาณ :
10 มิลลิลิตรของตัวอย่างที่มีค่าค่า 410 nm ปรับ 50 AU คือ
โหลดบน TLC plate . สำหรับตัวอย่างที่มีค่าการดูดกลืนแสงที่ 410 nm ด้านล่าง 50
หน่วย ปริมาตร ( มิลลิลิตร ) เท่ากับ 500 / Au ถูกโหลด
สีลักษณะของสีที่นำมาวิเคราะห์ในแง่ของแถบสี
พื้นที่พารามิเตอร์สูงสุดและค่าการดูดกลืนแสงของเซลล์และ
สีโซลูชั่นระหว่าง 410 nm , 470 nm หรือ 510 nm และระยะช่วง
1.5e2.0 สำหรับการวิเคราะห์ต่อไป พารามิเตอร์ ( L * a * b * C * HAB ) สีโซลูชั่น
ในแถบสีพื้นที่วัดโดย cr-400 colorimeter ( Minolta , โอซาก้า ,
ญี่ปุ่น ) L * ซึ่งช่วงจาก 0 ( สมบูรณ์ดำ ) 100 ( ผิวขาว )แสดงถึงความสว่าง
; a * และ b * แสดงสี พิกัด ที่บวกค่า a * และ b *
แสดงสีแดงและสีเหลือง ในขณะที่ค่า a * และ b * เท่ากับบ่งชี้สีเขียวและสีฟ้า ,
) ; C * Chroma ที่ C * ¼ [ ( * ) 2 þ ( b * ) 2
]
1 / 2 และเป็นตัวแทน
ความอิ่มตัวของสี : Chroma ค่าปิด 0 บ่งชี้แบบ duller หรือเกรเยอร์สี ในขณะที่ค่านิยมสูงขึ้นบ่งชี้
สีสดใสมากกว่าสีมุม ( HAB ) ที่
HAB ¼แทน  1
( b * / * ) คือตัวเลขที่แสดงถึงค่าสี : สีมุม 0 , 90 , 180 และ 270
เป็นตัวแทนของสีแดง , สีเหลือง , สีเขียวและสีฟ้า
resu ตามลำดับ