Standard DNA techniques and manipul

Standard DNA techniques and manipulations of Escherichia coli
and S. cerevisiae strains have been described elsewhere (Guthrie
and Fink 1991; Maniatis et al. 1989). An RsaI fragment containing
the MDH2-coding sequence from plasmid BS())BRRMDH2,
kindly provided by L. McAlister-Henn, was cloned into the EcoRV
site of Bluescript. The resulting plasmid (Bluescript-MDH2) was
used to clone MDH2 into the SalI and BamHI sites of YEp51 and
the SalI and SacI sites of pRS-426-PGK. Mutagenesis using
polymerase chain reaction (PCR) technology was employed to in-
troduce an XhoI site at a position corresponding to the 12th amino
acid of MDH2. The sequence of the oligodeoxyribonucleotide used
as a primer to introduce an XhoI site was CCGCTCGA-
GATGTTAAAAATTGCCATTTTAGGT together with the T3
primer and Bluescript-MDH2 as the template. The shorter version
of the MDH2 gene was cloned ®rst into the XhoI and BamHI sites
of Bluescript and, after its sequence had been veri®ed, it was cloned
into the SalI and BamHI sites of YEp51.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เทคนิคดีเอ็นเอมาตรฐานและ manipulations ภาพของ Escherichia coliและ S. cerevisiae สายพันธุ์ได้อธิบายอื่น ๆ (Guthrieและ Fink 1991 Maniatis et al. 1989) ประกอบด้วยส่วน RsaIรหัส MDH2 ลำดับจาก plasmid BS()) BRRMDH2กรุณาให้โดย L. McAlister-Henn ถูกโคลนเข้า EcoRVเว็บไซต์ของ Bluescript มี plasmid ผลลัพธ์ (Bluescript-MDH2)ใช้โคลน MDH2 เป็นไซต์สลี่และ BamHI ของ YEp51 และอเมริกาสลี่และ SacI ของพีอาร์เอส-426-PGK ใช้ mutagenesisเทคโนโลยีพอลิเมอเรสปฏิกิริยาลูกโซ่ (PCR) ถูกว่าจ้างไปใน-troduce เป็นเว็บไซต์ XhoI ที่ตำแหน่งที่สอดคล้องกับ 12 อะมิโนกรดของ MDH2 ลำดับของ oligodeoxyribonucleotide ใช้เป็นรองพื้นแนะนำ XhoI เป็น เว็บไซต์ CCGCTCGA-GATGTTAAAAATTGCCATTTTAGGT กับ T3สีรองพื้นและ Bluescript-MDH2 เป็นแบบ รุ่นสั้นของ MDH2 ยีนถูกโคลน ® rst ลงในเว็บไซต์ XhoI และ BamHIBluescript และ หลัง จากลำดับที่ได้ veri ® ed มันเป็นโคลนเข้าไซต์สลี่และ BamHI ของ YEp51

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เทคนิคดีเอ็นเอมาตรฐานและกิจวัตรของอีโคและ S. cerevisiae สายพันธุ์ที่ได้รับการอธิบายที่อื่น ๆ (Guthrie และตำรวจ 1991; Maniatis et al, 1989). RsaI ส่วนที่มีลำดับMDH2 เข้ารหัสจากพลาสมิด BS ()) BRRMDH2, ให้ความกรุณาโดยแอล McAlister-เฮ็นน์ถูกโคลนเข้า EcoRV เว็บไซต์ของ Bluescript พลาสมิดที่เกิด (Bluescript-MDH2) ถูกนำมาใช้ในการโคลนMDH2 เข้าไปในสาลี่และเว็บไซต์ของ YEp51 BamHI และสาลี่และเว็บไซต์ของSACI PRS-426-PGK กลายพันธุ์โดยใช้วิธี polymerase chain reaction (PCR) เทคโนโลยีที่ถูกจ้างมาเพื่อ In-troduce เว็บไซต์ XhoI ในตำแหน่งที่สอดคล้องกับอะมิโนที่ 12 กรด MDH2 ลำดับ oligodeoxyribonucleotide ที่ใช้เป็นไพรเมอร์ที่จะแนะนำเว็บไซต์XhoI การประเมิน CCGCTCGA- GATGTTAAAAATTGCCATTTTAGGT ร่วมกับ T3 ไพรเมอร์และ Bluescript-MDH2 เป็นแม่แบบ รุ่นสั้นของยีน MDH2 เป็นโคลน®rstลงในเว็บไซต์ XhoI และ BamHI ของ Bluescript และหลังจากลำดับที่ได้รับการveri®edมันก็โคลนเข้าไปในเว็บไซต์สาลี่และBamHI ของ YEp51

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เทคนิคดีเอ็นเอมาตรฐานและ manipulations ของ Escherichia coli
และ S . cerevisiae สายพันธุ์ได้ถูกอธิบายไว้ในที่อื่น ( Guthrie
และฟิน 1991 ; maniatis et al . 1989 ) เป็นส่วนที่มี rsai
mdh2 รหัสลำดับจากพลาสมิด bs() ) brrmdh2
, กรุณาให้โดย แม็คอลิสเตอร์ เฮน ถูกโคลนเข้าไปใน ecorv
เว็บไซต์ของ bluescript . ผลของพลาสมิด ( bluescript-mdh2
) คือใช้โคลน mdh2 ในสาลี่ BamHI และและเว็บไซต์ของ yep51
สาลี่ซาซิและเว็บไซต์ของ prs-426-pgk . การใช้เทคนิคพีซีอาร์ ( PCR )
-
เทคโนโลยีถูกนำมาใช้ใน troduce เป็น xhoi เว็บไซต์ในตำแหน่งที่ 12
กรดอะมิโน mdh2 . การเรียงลำดับของ oligodeoxyribonucleotide ใช้
เป็น primer แนะนำให้ xhoi ไซต์ ccgctcga -
gatgttaaaaattgccattttaggt ร่วมกับ T3
รองพื้น bluescript-mdh2 และเป็นแม่แบบ รุ่นสั้น
ของ mdh2 ยีนโคลนนิ่ง® RST ใน xhoi BamHI และเว็บไซต์ของ bluescript
และหลังจากลำดับของมันได้รับข้อมูล®เอ็ด มันโคลน
เป็นสาลี่ BamHI ของ yep51 และเว็บไซต์ .