RESULTSTransformation and Analysis

RESULTS
Transformation and Analysis ofTransgenic Rice Plants. The
plasmid pLAN150 (Fig. 1A) was cotransformed with the
hygromycin-resistance plasmid into protoplasts derived from
two varieties ofjaponica rice [Kinuhikari (K) and Nipponbare
(N)]. Of 238 hygromycin-resistant calli obtained from several
experiments, integration of the CP gene was detected in 139
calli by PCR analysis, giving a cotransformation frequency of
=60% at the DNA level. A total of 187 plants were regenerated
from 33 PCR-positive calli (lines).
Southern blot analysis of the primary transformants indicated
that one copy of the CP gene was integrated into the
genome of most transformants analyzed (Fig. 1B). No other
fragments of the CP gene were visualized under the conditions
used. This observation differs from those reported for
transgenic plants generated by direct DNA transfer showing
the presence of larger fragments in addition to a fragment of
the expected length (30, 31). When the circular plasmid was
used for transformation, a variety of integration patterns of
the plasmid were obtained (H. Fujimoto, T.I., R. Terada, R.
Yu, M. Suzuki, and K.S., unpublished data). Therefore, the
simple integration pattern of the RSV CP gene found in this
study may be due to linearization of the expression vector
before electroporation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลลัพธ์การเปลี่ยนแปลงและวิเคราะห์ ofTransgenic พืชข้าว ที่plasmid pLAN150 (Fig. 1A) ถูก cotransformed กับการต้านทาน hygromycin plasmid เป็นโปมาสองสายพันธุ์ข้าว ofjaponica [Kinuhikari (K) และ Nipponbare(N)] . 238 ของ calli hygromycin ทนได้จากหลายการทดลอง การรวมของยีน CP พบใน 139calli โดย PCR วิเคราะห์ ให้ความถี่ cotransformation= 60% ระดับดีเอ็นเอ จำนวน 187 พืชถูกสร้างจาก calli PCR บวก 33 (สาย)วิเคราะห์ภาคใต้คืนในตา transformants หลักที่ระบุที่สำเนาของยีน CP ถูกรวมเข้ากับการกลุ่ม transformants ส่วนใหญ่วิเคราะห์ (Fig. 1B) อื่น ๆ ไม่ชิ้นส่วนของยีน CP มี visualized ภายใต้เงื่อนไขใช้ สังเกตนี้แตกต่างจากรายงานการถั่วเหลืองพืชที่สร้างขึ้น โดยโอนย้ายดีเอ็นเอตรงที่แสดงของชิ้นส่วนใหญ่นอกจากส่วนของยาวคาด (30, 31) เมื่อ plasmid วงกลมได้ใช้สำหรับการแปลง หลากหลายรูปแบบรวมของplasmid ได้รับ (H. ฟุจิโมะโตะ T.I., R. Terada อาร์ยู ซูซู กิเมตร และเค เอส ยกเลิกประกาศข้อมูล) ดังนั้น การรวมเรื่องรูปแบบของยีน RSV CP ที่พบนี้การศึกษาอาจเป็น เพราะ linearization เวกเตอร์นิพจน์ก่อน electroporation

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลการเปลี่ยนแปลงและการวิเคราะห์ ofTransgenic ข้าวพืช พลาสมิด pLAN150 (รูป. 1A) ถูก cotransformed กับพลาสมิดไฮโกรต้านทานprotoplasts เข้ามาจากทั้งสองสายพันธุ์ข้าวofjaponica [Kinuhikari (K) และ Nipponbare (N)] 238 ไฮโกรทนแคลลัสที่ได้รับจากหลายการทดลองรวมของยีนซีพีถูกตรวจพบใน139 แคลลัสโดยการวิเคราะห์ PCR ให้ความถี่ของ cotransformation = 60% ในระดับดีเอ็นเอ ทั้งหมด 187 โรงงานถูกสร้างใหม่จากแคลลัส33 PCR-บวก (เส้น). การวิเคราะห์ blot ภาคใต้ของ transformants หลักที่ระบุว่าหนึ่งในสำเนาของยีนซีพีได้รับการรวมอยู่ในจีโนมของtransformants วิเคราะห์ส่วนใหญ่ (รูป. 1B) อื่น ๆ ไม่มีชิ้นส่วนของยีนซีพีได้รับการมองเห็นภายใต้เงื่อนไขที่ใช้ ข้อสังเกตนี้แตกต่างจากผู้รายงานพืชดัดแปรพันธุกรรมที่เกิดจากการถ่ายโอนโดยตรงดีเอ็นเอแสดงการปรากฏตัวของชิ้นส่วนขนาดใหญ่ในนอกเหนือไปจากส่วนของระยะเวลาที่คาดว่าจะ(30, 31) เมื่อพลาสมิดวงกลมถูกใช้สำหรับการเปลี่ยนแปลงหลากหลายของรูปแบบการรวมกลุ่มของพลาสมิดที่ได้รับ(เอช Fujimoto, TI, อาร์เทราดะ, อาร์ยูเอ็มซูซูกิและKS ข้อมูลที่ไม่ถูกเผยแพร่) ดังนั้นรูปแบบบูรณาการที่เรียบง่ายของ RSV CP ยีนที่พบในการศึกษาอาจจะเป็นเพราะเชิงเส้นของเวกเตอร์แสดงออกก่อนelectroporation

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลการ oftransgenic
และการวิเคราะห์พืชข้าว .
plan150 พลาสมิด ( รูปที่ 1A ) คือ cotransformed ที่มียีนต้านยา hygromycin พลาสมิดเข้าสู่โปรโตพลาสต์ต้านทาน

2 พันธุ์ที่ได้มาจาก ofjaponica ข้าว [ kinuhikari ( K ) และ nipponbare
( n ) ] ของแคลลัสที่ได้จากการทดลองแต่ยีนต้านยา hygromycin ทนหลาย
, บูรณาการของ CP ยีนที่ตรวจพบใน 139
แคลลัสโดยการวิเคราะห์ PCR ,ให้ cotransformation ความถี่
= 60% ในดีเอ็นเอ ) ทั้งหมด 187 พืชที่ได้จากเชื้อแคลลัส
33 บวก ( สาย )
ทำ Southern blot analysis พบว่าระดับของพลาสมิด
คัดลอกหนึ่งของซีพี ยีนที่ถูกรวมเข้ากับ
จีโนมของพลาสมิดที่สุดวิเคราะห์ ( รูปที่ 1A ) ไม่มีอื่น ๆชิ้นส่วนของยีนที่เป็น CP

ภาพภายใต้เงื่อนไขใช้การสังเกตนี้แตกต่างจากรายงานที่สร้างขึ้นโดยยีนพืช

โอนตรงดีเอ็นเอแสดงสถานะของชิ้นส่วนขนาดใหญ่ นอกจากส่วนของ
ความยาวที่คาดหวัง ( 30 , 31 ) เมื่อใช้วงกลมเป็นพลาสมิด
การความหลากหลายของการรวมรูปแบบของพลาสมิดได้
( H . ฟูจิโมโตะ ตุ่น เทราดะ , R , R
ยู เอ็ม ซูซูกิ และ k.s. ข้อมูลเผยแพร่ )ดังนั้น รูปแบบของการบูรณาการ
ง่าย ? ซีพียีนที่พบในการศึกษาครั้งนี้อาจจะเกิดจากเชิง

ก่อนที่นิพจน์เวกเตอร์ electroporation .