2.6. HPLC-PDA and MS/MS analysisMaj

2.6. HPLC-PDA and MS/MS analysis
Major phenolic compounds from the leaves were determined in
an HPLC system equipped with a degasser, quaternary pump, autosampler,
photodiode detector (Agilent Technologies 1200 series —
Englewood, CO, USA). The separation of polyphenols was performed
on a C18 column (250×4.6 mm, 5 μm Luna, Phenomenex, Torrance,
CA, USA) at a controlled temperature (30 °C). The mobile phase used
was A: deionized water: acetic acid (90.5:0.5 v/v), B: deionized
water: acetonitrile (90:10 v v−1
) and C: deionized water:methanol
(85:15 v v−1
). The gradient program was used as follows: 0 min
75% A, 10% B and 15% C; 25 min 55% A, 20% B and 25% C; 30 min
75% A, 10% B and 15% C. The flow rate and injection volume were
1.0 mL min−1 and 20 μL, respectively. The peak identification of
each polyphenol was based on the comparison of the relative retention
time (RT), peak area percentage, and spectra data with polyphenol
standards (vitexin, isovitexin and isoorientin). The standard curves for
all polyphenols were determined using the same chromatographic conditions
described above. The extracts were diluted in deionized water:
methanol (20:80, v:v), and filtered through 0.45 μm filters (Chromafil®
Xtra RC 45/25 membrane; MACHEREY-NAGEL, Bethlehem, PA, USA),
before injecting in the HPLC.
The same extracts used in the HPLC-UV/PAD analysis were also used
for MS analysis. The equipment used was a Q-ToF Micro® (Micromass,
UK) mass spectrometer with a hybrid system of analyzers composed by
quadrupole (Q) and time-of-flight (ToF) analyzers and a hexapole collision
cell (with helium as collision gas), operating to get full scan and
mass spectra in tandem (MS/MS), with m/z resolution of 5000. Samples
were introduced in the mass spectrometer through an electrospray ionization
source (ESI-MS/MS). The ESI-MS/MS system control and data
acquisition was performed by MassLynx 4.0 software (Micromass, UK).
In order to improve the signal-to-noise ratios, the quadrupole analyzer
was used as a filter for ion collection. For the identity confirmation
analysis, the molecular ions and their product ions were considered.
The ionization conditions selected were: cone gas flow (50 L h−1
),
desolvation gas flow (400 L h−1
), polarity (ESI+), capillary energy
(3000 V), sample cone energy (50 V), extraction cone energy (2 V),
desolvation temperature (250 °C), source temperature (100 °C), ionization
energy (2 V), collision energy (15 V), and multi-channel plate detector
energy (2780 V).
The method was suitable for the determination of the analytes and
the QToF technique made it possible to obtain m/z ratios with less
than 10 ppm of error for each analyte.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6. HPLC PDA และ MS/MS วิเคราะห์ม่อฮ่อมหลักจากใบถูกกำหนดในเป็นระบบ HPLC พร้อม degasser ปั๊ม quaternary, autosamplerจับ photodiode (Agilent เทคโนโลยี 1200 ชุด —Englewood, CO สหรัฐอเมริกา) ทำการแยกของโพลีฟีนในคอลัมน์ C18 (250 × 4.6 mm, Luna, Phenomenex รันซ์ 5 μmCA, USA) ที่ควบคุมอุณหภูมิ (30 ° C) ระยะเคลื่อนที่ใช้มีน้ำ deionized a:: deionized b:กรดอะซิติก (90.5:0.5 v/v),น้ำ: acetonitrile (90:10 v v−1) และ c: deionized น้ำ: เมทานอล(85:15 v v−1). ใช้โปรแกรมไล่ระดับเป็นดังนี้: 0 นาที75% A, 10% B และ 15% C 25 นาที 55% A, 20% B และ 25% C 30 นาที75% A, 10% B และ 15% ค มีขั้นตอนการฉีดและอัตราปริมาณmin−1 1.0 มล.และ 20 μL ตามลำดับ หมายเลขสูงสุดของpolyphenol แต่ละเป็นไปตามการเปรียบเทียบของการเก็บรักษาญาติเวลา (RT), เปอร์เซ็นต์สูงสุดที่ตั้ง และข้อมูล polyphenol แรมสเป็คตรามาตรฐาน (vitexin, isovitexin และ isoorientin) เส้นโค้งมาตรฐานสำหรับโพลีฟีนทั้งหมดถูกกำหนดโดยใช้เงื่อนไข chromatographic เดียวอธิบายไว้ข้างต้น สารสกัดจากการถูกทำให้เจือจางในน้ำ deionized:เมทานอล (20:80, v: v), และกรองผ่านตัวกรอง μm 0.45 (Chromafil ®เอ็กซ์ตร้า RC 45/25 เมมเบรน MACHEREY-NAGEL เบธเลเฮม PA สหรัฐอเมริกา),ก่อน injecting ใน HPLC การนอกจากนี้ยังใช้สารสกัดเดียวกันที่ใช้ในการวิเคราะห์ HPLC UV/แผ่นสำหรับการวิเคราะห์ MS อุปกรณ์ที่ใช้ถูก® Q ToF ไมโคร (Micromassสเปกโตรมิเตอร์มวล UK) ด้วยเครื่องวิเคราะห์ที่ประกอบด้วยระบบไฮบริดquadrupole (Q) และเวลา--เที่ยว (ToF) เครื่องวิเคราะห์ และชน hexapoleเซลล์ (มีฮีเลียมเป็นก๊าซชน), ทำงานได้เต็มรูปแบบในการสแกน และแรมสเป็คตราโดยรวมคือ (MS/MS), ความละเอียด 5000 m/z ตัวอย่างได้แนะนำไปในสเปกโตรมิเตอร์โดยรวมผ่านการ ionization วิธีพ่นละอองไฟฟ้าแหล่ง (ESI-MS/MS) ควบคุมระบบ ESI-MS/MS และข้อมูลซื้อที่ดำเนินการ โดยซอฟต์แวร์ MassLynx 4.0 (Micromass, UK)เพื่อปรับปรุงอัตราส่วนสัญญาณต่อเสียง วิเคราะห์ quadrupoleใช้เป็นตัวกรองในคอลเลกชันไอออน สำหรับการยืนยันตัวตนวิเคราะห์ ประจุโมเลกุล และประจุผลิตภัณฑ์ของพวกเขาได้ถือIonization เงื่อนไขที่เลือกได้: กรวยแก๊สไหล (h−1 50 L),กระแสก๊าซ desolvation (h−1 400 L), ขั้ว (ESI +), พลังงานเส้นเลือดฝอย(3000 V), ตัวอย่างกรวยพลังงาน (50 V), พลังงานกรวยแยก (2 V),desolvation ionization แหล่งอุณหภูมิ (100 ° C) อุณหภูมิ (250 ° C)พลังงาน (2 V), พลังงานชน (15 V), และเครื่องตรวจจับแผ่นหลายช่องพลังงาน (2780 V)วิธีการเหมาะสมกับความมุ่งมั่นของการ analytes และเทคนิคการ QToF ทำให้ได้รับอัตราส่วน m/z มีน้อยกว่า ppm 10 ข้อผิดพลาดสำหรับแต่ละ analyte

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 HPLC-PDA และ MS / MS
การวิเคราะห์ที่สำคัญสารประกอบฟีนอจากใบได้รับการพิจารณาในระบบ
HPLC พร้อมกับ degasser ปั๊มสี่, ฉีดตัวอย่างอัตโนมัติ,
เครื่องตรวจจับโฟโตไดโอด (Agilent Technologies 1200 ซีรีส์ -
แองเกิล, CO, USA) การแยกของโพลีฟีนได้ดำเนินการในคอลัมน์ C18 (250 × 4.6 มม 5 ไมครอน Luna, Phenomenex, Torrance, CA, USA) ที่ควบคุมอุณหภูมิ (30 ° C) ขั้นตอนการใช้โทรศัพท์มือถือเป็น A: น้ำปราศจากไอออน: กรดอะซิติก (90.5: 0.5 v / v), B: ปราศจากไอออนน้ำacetonitrile (90:10 VV-1) และ C: น้ำปราศจากไอออน: เมทานอล(85:15 VV-1) . โปรแกรมการไล่ระดับสีที่ใช้เป็นดังนี้: 0 นาที75% B 10% และ 15% C; 25 นาที 55% A, B 20% และ 25% C; 30 นาที75% B 10% และ 15% ซีอัตราการไหลและปริมาณการฉีดเป็น1.0 มิลลิลิตรนาทีที่ 1 และ 20 ไมโครลิตรตามลำดับ บัตรประจำตัวสูงสุดของโพลีฟีนแต่ละคนขึ้นอยู่กับการเปรียบเทียบของการเก็บรักษาญาติเวลา(RT) ร้อยละพื้นที่สูงสุดและข้อมูลสเปกตรัมที่มีโพลีฟีนมาตรฐาน(vitexin isovitexin และ isoorientin) เส้นโค้งมาตรฐานโพลีฟีนทั้งหมดได้รับการพิจารณาโดยใช้เงื่อนไขเดียวกันโครมาอธิบายไว้ข้างต้น สารสกัดถูกเจือจางในน้ำปราศจากไอออน: เมทานอล (20:80 โวลต์: โวลต์) และกรองผ่าน 0.45 ไมครอนกรอง (Chromafil®เอ็กซ์ตร้าเมมเบรนRC 45/25; MACHEREY-แจคกี้เบ ธ เลเฮ, PA, USA) ก่อนที่จะฉีดใน HPLC. สารสกัดเดียวกับที่ใช้ใน HPLC-UV / วิเคราะห์พันธมิตรฯ ยังถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์MS อุปกรณ์ที่นำมาใช้เป็น Q-ToF Micro® (Micromass, สหราชอาณาจักร) สเปกโตรมิเตอร์มวลด้วยระบบไฮบริดของการวิเคราะห์ประกอบด้วยquadrupole (Q) และเวลาของเที่ยวบิน (ToF) วิเคราะห์และการปะทะกัน hexapole เซลล์ (มีฮีเลียมเป็นก๊าซชน ), การดำเนินงานที่จะได้รับการสแกนเต็มรูปแบบและสเปกตรัมมวลควบคู่(MS / MS) กับเมตร / ความละเอียด 5000 ซีของตัวอย่างเป็นที่รู้จักในสเปกโตรมิเตอร์มวลผ่านelectrospray ไอออนไนซ์แหล่งที่มา(ESI-MS / MS) ESI-MS / MS ควบคุมระบบและข้อมูลการเข้าซื้อกิจการได้ดำเนินการโดยMassLynx ซอฟแวร์ 4.0 (Micromass สหราชอาณาจักร). เพื่อที่จะปรับปรุงอัตราส่วนสัญญาณต่อเสียงรบกวน, วิเคราะห์ quadrupole ถูกใช้เป็นตัวกรองสำหรับคอลเลกชันไอออน สำหรับตัวตนยืนยันการวิเคราะห์ไอออนโมเลกุลและไอออนผลิตภัณฑ์ของพวกเขาได้รับการพิจารณา. เงื่อนไขไอออนไนซ์เลือกคือการไหลของก๊าซกรวย (50 L H-1) การไหลของก๊าซ desolvation (400 L H-1), ขั้ว (ESI +), เส้นเลือดฝอย พลังงาน(3000 V) พลังงานกรวยตัวอย่าง (50 V) พลังงานกรวยสกัด (2 V) อุณหภูมิ desolvation (250 ° C) อุณหภูมิแหล่งที่มา (100 ° C) ไอออนไนซ์พลังงาน(2 V) พลังงานชน (15 V ) และแผ่นหลายช่องทางตรวจจับพลังงาน(2780 V). วิธีการที่มีความเหมาะสมสำหรับการวัดวิเคราะห์และเทคนิค QToF ทำให้มันเป็นไปที่จะได้รับเมตร / อัตราส่วนซีที่มีน้อยกว่า10 ppm ของข้อผิดพลาดสำหรับแต่ละวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 hplc-pda MS / MS และการวิเคราะห์สารประกอบฟีนอลจากใบใหญ่

เป็น HPLC วิเคราะห์ในระบบพร้อมกับ degasser , ปั๊ม , autosampler ควอโฟโตไดโอด ( Agilent Technologies , เครื่องตรวจจับ
-
1200 ชุด Englewood , CO , USA ) การแยกโพลีฟีนอลแสดง
ในคอลัมน์ C18 250 × 4.6 มม. , 5 μ m ลูน่า phenomenex ซ์
, , CA , USA ) ที่ควบคุมอุณหภูมิ ( 30 ° C )ขั้นตอนการใช้โทรศัพท์มือถือ
เป็น : คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ : กรดน้ำส้ม ( 90.5:0.5 v / v ) B :
( คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ : ไนรูป V V − 1
) C : คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำเมทานอล
( 85:15 V V − 1
) โปรแกรมการใช้ดังต่อไปนี้ : 0 Min
75 % เป็น 10 % และ 15 % C ; 25 นาที 55 % เป็น 20 % และ 25 % C ; 30 นาที
75% เป็น 10% และ 15% C อัตราการไหลและปริมาตร 1.0 มิลลิลิตรต่อนาที ) ฉีด
− 1 และ 20 μลิตรยอดการกำหนด
แต่ละโพลีขึ้นอยู่กับการเปรียบเทียบเวลากัก
ญาติ ( RT ) ได้แก่ พื้นที่สูงสุด และให้ข้อมูลกับมาตรฐาน polyphenol
( 5-Dihydroxyxanthone โซไวเทกซิน , และ isoorientin ) เส้นโค้งมาตรฐาน
ทั้งหมด โพลีฟีนอล ตัดสินใจโดยใช้แบบเดียวกันและเงื่อนไข
ที่อธิบายข้างต้น สารสกัดถูกเจือจางในน้ำเมทานอล ( คล้ายเนื้อเยื่อประสาน :
: V : V )