Total RNA of human embryonic stem c

Total RNA of human embryonic stem cell (hESC) was purchased
from CELPROGEN (Torrance, CA, USA). Total RNA was extracted from
control and irradiated cells using TRIzol® reagent (Invitrogen, Carlsbad,
CA, USA), and the integrity of the isolated total RNAwasmeasuredwith
an Agilent Bioanalyzer 2100 RNA Nano kit (Agilent Technologies, Palo
Alto, CA, USA). Synthesis of target cRNA probes and hybridization
were performed using Agilent's Low RNA Input Linear Amplification
kit (Agilent Technologies) according to themanufacturer's instructions.
Briefly, each 1 μg of total RNA and T7 promoter primer mix were combined
and incubated at 65 °C for 10 min. The cDNA master mix (5×
first strand buffer; 0.1 M DTT, 10 mM dNTP mix, RNase-Out, and
MMLV-RT) was prepared and added to RNA and the primer mixture.
The samples were incubated at 40 °C for 2 h for reverse transcription
and double-stranded cDNA (dsDNA) synthesis, then terminated by incubating
at 65 °C for 15min. The transcriptionmastermixwas prepared
according to themanufacturer's protocol (4× transcription buffer, 0.1M
DTT,NTPmix, 50% PEG, RNase-Out, inorganic pyrophosphatase, T7-RNA
polymerase, and cyanine 3/5-CTP) and added to the dsDNA reaction
mixture, and incubated at 40 °C for 2 h for transcription of dsDNA. During
transcription–amplification, control and test cRNAs were labeled
with Cy3-CTP and Cy5-CTP, respectively. Amplified and labeled cRNA
were purified and quantified using an ND-1000 spectrophotometer
(NanoDrop Technologies, Inc., Wilmington, DE, USA) to check labeling
efficiency, followed by fragmentation of cRNA by adding 10× blocking
agent and 25× fragmentation buffer, then incubating at 60 °C

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ร้านอาร์เอ็นเอทั้งหมดของมนุษย์ตัวอ่อนเซลล์ต้นกำเนิด (hESC)จาก CELPROGEN (รันซ์ CA, USA) อาร์เอ็นเอทั้งหมดที่สกัดจากควบคุมและเซลล์ irradiated ใช้รีเอเจนต์ TRIzol ® (Invitrogen ลสแบCA, USA), และความสมบูรณ์ของ RNAwasmeasuredwith รวมแยกชุดอุปกรณ์นาโน Agilent Bioanalyzer 2100 อาร์เอ็นเอ (Agilent เทคโนโลยี ปาโลอัลโต้ CA สหรัฐอเมริกา) สังเคราะห์ของเป้าหมาย cRNA คลิปปากตะเข้และ hybridizationได้ดำเนินการโดยใช้ของ Agilent ต่ำอาร์เอ็นเอเข้าเส้นขยายชุด (Agilent เทคโนโลยี) ตามคำแนะนำของ themanufacturerสั้น ๆ แต่ละ μg 1 ของผสมรองพื้นที่โปรโมเตอร์อาร์เอ็นเอและ T7 รวมได้รวมและ incubated ที่ 65 ° C สำหรับ 10 นาที ผสมหลักของ cDNA (5 ×บัฟเฟอร์สาระแรก 0.1 M DTT, 10 มม. dNTP ผสม RNase ออก และMMLV-RT) ถูกเตรียม และเพิ่มในอาร์เอ็นเอและส่วนผสมรองพื้นตัวอย่างที่ incubated ที่ 40 ° C สำหรับ h 2 การ transcription ย้อนและการสังเคราะห์ cDNA ควั่นคู่ (dsDNA) ยกเลิกแล้ว โดย incubatingที่ 65 ° C สำหรับ 15 นาที Transcriptionmastermixwas ที่เตรียมไว้ตาม themanufacturer ของโพรโทคอล (4 × transcription บัฟเฟอร์ 0.1 MDTT, NTPmix, 50% PEG, pyrophosphatase RNase เอาท์ อนินทรีย์ T7-อาร์เอ็นเอพอลิเมอเรส และ cyanine 3/5-CTP) และเพิ่มปฏิกิริยา dsDNAส่วนผสม และ incubated ที่ 40 ° C สำหรับ h 2 ใน transcription ของ dsDNA ในระหว่างการมีป้าย cRNAs transcription – ขยาย ควบคุม และทดสอบด้วย Cy3 CTP และ Cy5-CTP ตามลำดับ CRNA เอาต์ และป้ายที่บริสุทธิ์ และ quantified โดยใช้เครื่องทดสอบกรดด่างเป็น ND-1000(เทคโนโลยี NanoDrop, Inc. วิลมิ DE สหรัฐอเมริกา) ต้องติดฉลากประสิทธิภาพ ตามการกระจายตัวของ cRNA โดยการเพิ่มบล็อก× 10ตัวแทนและโรงกระจายตัว 25 ×บัฟเฟอร์ incubating แล้ว ที่ 60 ° C

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

อาร์เอ็นเอรวมของเซลล์ต้นกำเนิดจากตัวอ่อนมนุษย์ (hESC)
ถูกซื้อจากCELPROGEN (Torrance, CA, USA) รวม RNA
ถูกสกัดจากการควบคุมและเซลล์ฉายรังสีโดยใช้สารTRIzol® (Invitrogen, Carlsbad,
CA, USA) และความสมบูรณ์ของทั้งหมดที่แยก RNAwasmeasuredwith
Agilent Bioanalyzer 2100 RNA ชุดนาโน (Agilent Technologies, Palo
Alto, CA, USA) การสังเคราะห์โพรบเป้าหมายสีดำและผสมพันธุ์ได้ดำเนินการโดยใช้ของ Agilent ต่ำ RNA ป้อนข้อมูลเชิงเส้นขยายชุด(Agilent Technologies) ตามคำแนะนำ themanufacturer ของ. สั้น ๆ ในแต่ละ 1 ไมโครกรัมของอาร์เอ็นเอรวมและผสมรองพื้นโปรโมเตอร์ T7 มารวมกันและบ่มที่65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที . ส่วนผสมหลัก cDNA (5 ×บัฟเฟอร์สาระแรก 0.1 M DTT ผสม 10 มิลลิ dNTP, RNase ออกและ MMLV-RT) จัดทำและเพิ่มให้กับอาร์เอ็นเอและมีส่วนผสมไพรเมอร์. กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงสำหรับการถอดความย้อนกลับและcDNA เกลียวคู่ (dsDNA) สังเคราะห์ยกเลิกแล้วโดยการบ่มที่65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที transcriptionmastermixwas เตรียมตามโปรโตคอลthemanufacturer (4 ×บัฟเฟอร์ถอดความ 0.1M DTT, NTPmix 50% PEG, RNase-Out, pyrophosphatase นินทรีย์, T7-RNA โพลิเมอร์และ cyanine 3/5-CTP) และเพิ่มไปยังปฏิกิริยา dsDNA ส่วนผสม และบ่มที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงสำหรับการถอดความจาก dsDNA ในระหว่างการถอดความขยายการควบคุมและการทดสอบ CRNAs ถูกระบุด้วยCy3-CTP และ Cy5-CTP ตามลำดับ ขยายและติดป้าย Crna เป็นบริสุทธิ์และปริมาณการใช้ spectrophotometer ND-1000 (NanoDrop Technologies, Inc, วิลมิง, เดลาแวร์, สหรัฐอเมริกา) เพื่อตรวจสอบการติดฉลากประสิทธิภาพตามด้วยการกระจายตัวของสีดำโดยการเพิ่ม10 ×ปิดกั้นตัวแทนและ25 ×บัฟเฟอร์การกระจายตัวแล้ว บ่มที่ 60 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อาร์เอ็นเอทั้งหมดของมนุษย์จากตัวอ่อนเซลล์ต้นกำเนิด ( hesc ) ซื้อจาก celprogen
( Torrance , CA , USA ) อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจาก
ควบคุมและการฉายรังสีเซลล์โดยใช้ trizol ® Reagent ( Invitrogen ฮุสตัน
, CA , USA ) , และความสมบูรณ์ของการแยกรวม rnawasmeasuredwith
เป็นเลนต์ bioanalyzer 2100 RNA ชุดนาโน ( Agilent เทคโนโลยี Palo
อัลโต แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา )การสังเคราะห์และเป้าหมาย crna ) (
) มีการใช้ข้อมูลเชิงเส้น ( ด้านต่ำ RNA
Kit ( ด้านเทคโนโลยี ) ตามคำสั่งของผู้ผลิต .
สั้นอย่างละ 1 μกรัมของอาร์เอ็นเอทั้งหมด 6 กับ 7 สีรองพื้นผสมโปรโมเตอร์ร่วม
บ่มที่ 65 องศา C นาน 10 นาที วิธีผสม ( 5 ×มหาบัณฑิต
เฟิร์ส สแตนด์ บัฟเฟอร์ ; 0.1 M ส่วน 10 มม. dntp ผสม เลสออกและ
mmlv-rt ) ถูกเตรียมและเพิ่ม RNA และไพรเมอร์ผสม .
ตัวอย่างอุณหภูมิ 40 องศา C 2 H สำหรับ
ถอดความย้อนกลับและดับเบิล stranded cDNA ( dsdna ) การสังเคราะห์แล้วยกเลิก โดยการแช่
65 ° C เป็นเวลา 15 นาที ใน transcriptionmastermixwas เตรียม
ตามขั้นตอนของผู้ผลิต ( 4 ×ถอดกันชน 0.1m
, DTT , ntpmix 50% เพ็ก เลสออก pyrophosphatase อนินทรี ,t7-rna
เมอเรส และ cyanine 3 / 5-ctp ) และเพิ่มไปยัง dsdna ปฏิกิริยา
ส่วนผสมและอุณหภูมิ 40 องศา C 2 H สำหรับการถอดรหัสของ dsdna . ระหว่าง
ถอดความ–ขยาย การควบคุม และ crnas ทดสอบป้าย
ด้วย CTP และ cy3 cy5 CTP , ตามลำดับ ขยาย และป้าย crna
มีความบริสุทธิ์และปริมาณการใช้วัสดุ nd-1000
( nanodrop Technologies , Inc , Wilmington , DE ,สหรัฐอเมริกา ) เพื่อตรวจสอบประสิทธิภาพการติดฉลาก
ตามด้วยการแตกแยกของ crna โดยเพิ่ม 10 ×บล็อก
และตัวแทน 25 ×การบัฟเฟอร์แล้ว เพาะที่อุณหภูมิ 60 องศาซี