marigold by PCR. The PCRs were set

marigold by PCR. The PCRs were set up in a total volume
of 20 ml containing 50 ng of DNA, 0.2mM of each dNTP,
3.5mM MgCl2, 10 pmol of each primer and 1U of Taq
polymerase (Promega, WI, USA) in the manufacturersupplied
buffer. PCR cycles were run as follows: 948C
for 5 min, then 40 cycles of 948C for 30 s, 608C for 90 s
and 728C for 90 s, and ending with 728C for 5 min. The
amplified fragments were separated on 5% denaturing
polyacrylamide gels and visualized by silver staining as
described by Benbouza et al. (2006). The polymorphic
bands containing SSRs were excised and incubated at
37 8C for 2 h in 20 ml of sterile distilled water. The
eluted DNA bands were then reamplified and purified
before being cloned. To clone the fragments, SSR-containing
fragments were ligated with the pGEM-T easy
vector and transformed into Escherichia coli DH5a by
the heat shock method according to the manufacturer’s
instructions. The positive clones were selected for
sequencing, and SSR-flanking primers were designed
from the sequences of the clones and the database
using Websat (http://wsmartins.net/websat/). SSRs were
initially tested for amplification by PCR, and the products
were separated by polyacrylamide gel electrophoresis as
described above. The markers generating clear and scorable
bands were evaluated in all DNA samples with the
same technique.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดาวเรือง โดย PCR PCRs การตั้งค่าในไดรฟ์ข้อมูลทั้งหมดของ 20 มิลลิลิตรที่ประกอบด้วย 50 ฉบับของดีเอ็นเอ 0.2mM ของ dNTP แต่ละ3.5 มม. MgCl2, 10 pmol 1U และรองพื้นของ Taqพอลิเมอเรส (Promega อิน สหรัฐอเมริกา) ในการ manufacturersuppliedบัฟเฟอร์ รอบของ PCR ถูกเรียกใช้เป็นดังนี้: 948Cสำหรับ 5 นาที 40 รอบ 948C 30 s, C 608 90 sและ C 728 90 s และสิ้นสุด ด้วย 728C สำหรับ 5 นาทีการแยกจากกันชิ้นส่วนขยายบน denaturing 5%ตรวจสอบวิเคราะห์เจล และโดยย้อมสีเป็นสีเงินอธิบายโดย Benbouza et al. (2006) การ polymorphicวงดนตรีที่ประกอบด้วย SSRs สรรพสามิต และที่ได้รับการกก37 น้ำกลั่น 8C สำหรับ h 2 ใน 20 ml ของปลอดเชื้อ การeluted ดีเอ็นเอวง reamplified และบริสุทธิ์แล้วก่อนการลอกแบบ การโคลนเศษ SSR ที่ประกอบด้วยชิ้นส่วนถูกกเดี่ยวกับ pGEM-T ง่ายเวกเตอร์ และเปลี่ยนเป็น Escherichia coli โดย DH5aวิธีการช็อกความร้อนตามของผู้ผลิตคำแนะนำ เลือกโคลนบวกสำหรับออกแบบไพรเมอร์ที่การจัดลำดับ และ SSR ขนาบจากลำดับของโคลนและฐานข้อมูลใช้ Websat (http://wsmartins.net/websat/) มี SSRsตอนแรกทดสอบเพื่อขยายโดย PCR และผลิตภัณฑ์โดยเป็นการตรวจสอบวิเคราะห์อิเป็นอธิบายไว้ข้างต้น เครื่องหมายที่ชัดเจน และไม่สร้างวงได้รับการประเมินในตัวอย่างดีเอ็นเอทั้งหมดที่มีการเทคนิคเดียวกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดอกดาวเรืองโดยวิธี PCR PCRs ถูกตั้งขึ้นในปริมาณ
20 มล. มี 50 NG ดีเอ็นเอ 0.2mm ของแต่ละ dNTP,
3.5 มม MgCl2 10 pmol ของแต่ละไพรเมอร์และ 1U ของ Taq
โพลิเมอร์ (Promega, WI, USA) ใน manufacturersupplied
บัฟเฟอร์ รอบ PCR วิ่งดังนี้ 948C
เป็นเวลา 5 นาทีแล้ว 40 รอบของ 948C เป็นเวลา 30 วินาที, 608C 90 s
และ 728C 90 S, และลงท้ายด้วย 728C เป็นเวลา 5 นาที
ชิ้นส่วนขยายที่ถูกแยกออกเมื่อวันที่ 5% denaturing
เจลอะคริเลตและมองเห็นโดยการย้อมสีเงินเป็น
อธิบายโดย Benbouza et al, (2006) polymorphic
วงดนตรีที่มี SSRs ถูกตัดและบ่มที่
37 8C เป็นเวลา 2 ชั่วโมงใน 20 มล. น้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ
ชะวงดนตรีดีเอ็นเอ reamplified แล้วและบริสุทธิ์
ก่อนที่จะถูกโคลน การโคลนเศษ SSR ที่มี
ชิ้นส่วนที่ถูกผูกด้วยง่าย pGEM-T
เวกเตอร์และกลายเป็นเชื้อ Escherichia coli DH5a โดย
วิธีการช็อตความร้อนตามที่ผู้ผลิต
คำแนะนำ โคลนบวกถูกเลือกสำหรับการ
จัดลำดับและไพรเมอร์ SSR-ขนาบข้างได้รับการออกแบบ
จากลำดับของโคลนและฐานข้อมูล
โดยใช้ Websat (http://wsmartins.net/websat/) SSRs ถูก
ทดสอบครั้งแรกสำหรับการขยายโดยวิธี PCR และผลิตภัณฑ์
ถูกแยกจากกันโดย polyacrylamide gel electrophoresis เป็น
อธิบายไว้ข้างต้น เครื่องหมายการสร้างความชัดเจนและ scorable
วงดนตรีที่ได้รับการประเมินในทุกตัวอย่างดีเอ็นเอด้วย
เทคนิคเดียวกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดาวเรืองโดย PCR การ pcrs ตั้งในหมวดทั้งหมด20 มิลลิลิตร บรรจุ 50 กรัม ดีเอ็นเอ ของแต่ละ dntp 0.2mm ,3.5 มม. ชุดละ 10 pmol และรองพื้นวิดของทัคการ ( promega , WI , USA ) ใน manufacturersuppliedบัฟเฟอร์ วงจรทั้งหมดจะถูกเรียกใช้ ดังนี้ 948cสำหรับ 5 นาทีแล้ว 40 รอบ 948c 30 , 608c 90 วินาทีและ 728c 90 s และลงท้ายด้วย 728c 5 นาทีชิ้นส่วนของ 5 % ี่แยกกันแถบตรวจโดยการย้อมสีเจลและเงินเป็นอธิบายโดย benbouza et al . ( 2006 ) ที่มีวงดนตรีที่ประกอบด้วย ssrs ถูกตัดและอุณหภูมิ37 8C 2 ชั่วโมง 20 ml เป็นหมันของน้ำกลั่น ที่ตัวอย่างแถบดีเอ็นเอแล้ว reamplified และทำให้บริสุทธิ์ก่อนที่จะถูกโคลน การโคลน SSR ที่มีการกระจายตัวชิ้นส่วนถูกผูกกับ pgem-t ง่ายเวกเตอร์และกลายเป็นเชื้อ Escherichia coli dh5a โดยความร้อนช็อกวิธีตามของผู้ผลิตคําแนะนํา โคลนบวกเลือกการจัดลำดับและ SSR flanking โดยออกแบบจากลำดับของโคลนและฐานข้อมูลการใช้ websat ( http : / / wsmartins . net / websat / ) ssrs คือเริ่มทดสอบการขยายโดยวิธี PCR และผลิตภัณฑ์แยกจากกันโดย polyacrylamide gel electrophoresis เป็นที่อธิบายข้างต้น เครื่องหมายการสร้างชัดเจน และ scorableแถบทดสอบในตัวอย่างดีเอ็นเอทั้งหมดกับเทคนิคเดียวกัน