Materials and methods2.1 Preparatio

Materials and methods
2.1 Preparation of fungal spore inoculum
Spore suspensions of Aspergillus oryzae
TISTR 3102 were prepared from a fully sporulated
(7 days old) PDA slant culture using 10 ml of 0.85%
NaCl solution. This spore suspension was used as the
master suspension, which was appropriately diluted to
required density. Spore concentration in the inoculum
was estimated by a haemacytometer.
2.2 Substrate preparation
Two economic crops consisting of rice (Oryza
sativa L.) and cassava (Manihot esculenta) were used
in the experiment. The 400 g (on a dry basis) of each
substrate was weighed separately into a 2-l Erlenmeyer
flasks and distilled water containing 10% (v/v) of
supplementing salt solution (30 ppm of CaCl2) was added
and adjusted to 60% moisture level (8). The contents
of the flasks were mixed thoroughly and autoclaved at
121°C for 15 minutes.
2.3 Solid-state fermentation
The sterilised solid substrate was inoculated
with one ml of the prepared inoculum. The contents
were mixed thoroughly and incubated at 30°C for 7
days. Samples of triplicate flasks were withdrawn after
desired incubation.
2.4 Mashing
The fermented mass was mixed into water to
form the slurry of 30% w/v (on a dry basis). One litre of
the slurry was added with 0.03 g of CaCl2 and adjusted
to pH 6 by using 0.1 M lactic acid. Mashing was carried
out by following the method of Okafor and Iwouno (9).
The slurry was initially mashed at 50°C and allowed
to stand for 30 min. The supernatant was decanted and
the remained flour was heated until it gelatinized at
88°C. The supernatant was returned to the cooled and
elatinized slurry, giving an overall temperature of 62°C.
The mash was held at this temperature for 60 min.
The pH of the mash was tested and adjusted to 5.6 by
adding a few drops of lactic acid. One-half of the mash
was withdrawn, boiled and returned to the main mash
and the temperature increased to between 69 and 71°C.
The mixture was held at this temperature for 60 min. The
mash was cooled and filtered using funnel and folded
Whatman No. 1 filter paper. The filtered solution was
finally boiled for 60 min to yield the malt rice syrup.
2.5 Measure of total reducing sugar (TRS)
and free amino nitrogen (FAN)
The samples of fermented mass were diluted
with distilled water and analysed for TRS and FAN
following the methods of Miller (10) and Lie (11)
respectively.
2.6 Enzyme activity
Crude enzyme from the fermented mass was
extracted by simple extraction. A fermented mass of 10 g
was mixed thoroughly with distilled water to a total
extract volume of 100 ml. Contents were mixed by
shaking for one hour at 30°C on a 150 rpm shaker. At
the end of the extraction, the suspension was centrifuged
at 7,000 rpm for 10 min. The extracted solution was
measured for amylolytic activity, α-amylase activity
and α-glucosidase activity.
2.7 Determination of amylolytic enzyme
and α-amylase
The amylolytic activity was assayed using the
Terashima method (12) after crude extraction of malted
rice. 0.5 ml of the supernatant was added to 0.5 ml of a

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ
2.1 การเตรียมเชื้อสปอร์แขวนลอยสปอร์เชื้อรา

ของ Aspergillus oryzae TISTR 3102 พร้อมอย่างเต็มที่สร้างสปอร์มาก
( 7 วัน ) วัฒนธรรม ลาด PDA ใช้ 10 ml สารละลาย NaCl 0.85 %

นี้ถูกระงับการใช้สปอร์เป็น
อาจารย์ชั่วคราวที่เหมาะสม

ต้องเจือจางความหนาแน่น สปอร์ของเชื้อ
ประมาณโดย haemacytometer .

สองพืชไร่เศรษฐกิจ 2.2 การเตรียมพื้นผิวประกอบด้วยข้าว ( Oryza sativa L .
) และมันสำปะหลัง ( มันสำปะหลัง ) ใช้
ในการทดลอง 400 กรัม ( บนพื้นฐานแห้ง ) ของแต่ละแผ่นมันหนัก แยกเป็น

2-l เออร์เลนเมเยอร์และขวดน้ำกลั่นผสม 10% ( v / v )
เสริมสารละลายเกลือ ( CaCl2 30 ppm ) และได้เพิ่ม
ปรับระดับความชื้น 60% ( 8 ) เนื้อหา
ของขวดมาผสมอย่างทั่วถึงและสังเคราะห์ที่ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที
.
3
sterilised ของแข็งของแข็งและพื้นผิวเป็นเชื้อ
กับหนึ่งมิลลิลิตร เตรียมไว้ 3 . เนื้อหา
ปะปนกันอย่างละเอียด และบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C
7 วัน ตัวอย่างของการทำสำเนาสามฉบับขวดถูกถอนหลังจาก


ระยะเวลาที่ต้องการ และบดหมักผสมเป็นมวลน้ำ

รูปเสีย 30 % W / V ( บนพื้นฐานแห้ง ) หนึ่งลิตรของน้ำเพิ่มด้วย

0.03 กรัมผลิตและปรับ pH 6 ด้วยกรดแลกติกความเข้มข้น 0.1 M . บดา
ออกตามวิธีของ โอคาฟอร์ และ iwouno ( 9 ) .
ความเข้มข้น 50 ° C ก็เริ่มบดและอนุญาตให้ยืนเป็นเวลา 30 นาที

คือรินสูงและยังคงอุ่นจนแป้งวุ้นที่
88 องศาที่นำกลับมาเพื่อระบายความร้อนและ
elatinized เสีย ให้อุณหภูมิโดยรวม 62 ° C .
บดถูกจัดขึ้นที่อุณหภูมิ 60 นาที
pH ของบดทดสอบและปรับให้ 5.6 โดย
เพิ่มไม่กี่หยดกรดแลกติก ถูกถอนออกไปครึ่งหนึ่งของบด
, ต้มและส่งกลับไปยังหลักบด
และอุณหภูมิที่เพิ่มขึ้นระหว่าง 69 และ 71 องศา C .
ส่วนผสมจะถูกจัดขึ้นที่อุณหภูมินี้ 60 นาที
บดเป็นแท่งและกรองใช้ช่องทางและพับ
whatman 1 ไส้กรองกระดาษ กรองสารละลาย
ต้มจน 60 นาทีเพื่อให้ผลผลิตข้าวมอลต์น้ำเชื่อม .
2.5 การวัดปริมาณน้ำตาลทั้งหมด ( TRS )
และไนโตรเจนกรดอะมิโนฟรี ( พัดลม )

ลดจำนวนของมวลที่หมักด้วยน้ำกลั่นและวิเคราะห์พัดลม
ซิ่นตามวิธีของ มิลเลอร์ ( 10 ) และ ( 11 ) โกหก


2.6 ตามลำดับ เอนไซม์เอนไซม์จากการหมักมวลถูก
สกัดโดยการสกัดอย่างง่าย หมัก มวล 10 กรัม
ผสมอย่างละเอียดด้วยน้ำกลั่นให้ปริมาณสารสกัดรวม
100 มล. ต่อเนื้อหาผสมโดย
เขย่าเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง 30 ° C ใน shaker 150 รอบต่อนาที ที่
ตอนท้ายของการสกัดถูกระงับไฟฟ้า
ที่ 7 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาทีสกัดสารละลาย
วัดกิจกรรมไมโลไลติกแอลฟาอะไมเลส ,
กิจกรรมและกิจกรรมแอลฟากลูโคซิเดส .
2.7 การวิเคราะห์เอนไซม์แอลฟาอะไมเลสและไมโลไลติก

ไมโลไลติกเอนไซม์กิจกรรมใช้วิธีการ
เทราชิม่า ( 12 ) หลังจากการสกัดน้ำมันจากข้าวมอลต์
. 0.5 ml ของน่านคือเพิ่ม 0.5 ml ของ