- Lyse the PBS-washed cell with 5%

- Lyse the PBS-washed cell with 5% SDS.
- Sonicate sample briefly or pass it several times through a 21-gauge needle.
- Centrifuge sample at 4°C for 10 minutes to pellet insoluble material.

- Determine protein concentration and dilute protein sample in 1 x SDS sample buffer
(62.5 mM Tris pH 6.8, 2% SDS, 10%glycerol, 0.0005% bromophenol blue, 1.5%
DTT).
- Denature proteins by boiling sample for 3 minutes.

Load 50 μg/lane of protein in polyarylamide gel
- Add approximately 400 mL 1X Tris/Glycine/SDS running buffer to the lower
chamber of the cell. Snap the lid on the chamber and plug the leads into the power
source. Apply a constant voltage of 200 V for 55 minutes.

- Make a sandwich composed of filter paper-gel-blot (PVDF or nitrocellulose)-filter
paper, and place in electric field where negatively charged proteins migrate out of gel
onto blot. Apply current (60-70V) according to recommended time.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

-Lyse PBS ล้างเซลล์ ด้วย 5% SDS-Sonicate อย่างสั้น ๆ หรือส่งผ่านเข็ม 21 วัดหลายครั้ง-ตัวอย่างเครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 4° C 10 นาทีให้เม็ดวัสดุที่มีละลาย-กำหนดความเข้มข้นของโปรตีน และ dilute ตัวอย่างโปรตีนในบัฟเฟอร์อย่าง SDS x 1(62.5 มม.ทริสเรทติ้ง pH 6.8, SDS 2%, 10% กลีเซอร 0.0005% bromophenol บลู 1.5%DTT)-Denature โปรตีน โดยเดือดอย่างใน 3 นาทีโหลด μg 50 เลนโปรตีนเจ polyarylamide-เพิ่มประมาณ 400 mL 1 X ตรี/Glycine/SDS ทำบัฟเฟอร์ลงล่างหอของเซลล์ ชิดฝาบนหอการค้า และต่อเป้าหมายที่เป็นพลังงานแหล่งที่มา ใช้แรงดันไฟฟ้าคงที่ 200 V 55 นาที-ทำแซนวิประกอบด้วยกระดาษกรองเจลคืนในตา (PVDF หรือ nitrocellulose) -กรองกระดาษ และวางในสนามไฟฟ้าที่คิดค่าธรรมเนียมส่งโปรตีนย้ายจากเจไปคืนในตา ใช้ปัจจุบัน (60-70V) ตามเวลาที่แนะนำ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

- Lyse เซลล์พีบีเอสล้าง 5% SDS.
- ตัวอย่าง sonicate สั้น ๆ หรือผ่านมันหลายครั้งผ่าน 21 เข็มวัด.
- ตัวอย่างปั่นแยกที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีเพื่อให้เม็ดวัสดุที่ไม่ละลายน้ำ. - ตรวจสอบความเข้มข้นของโปรตีนและเจือจางโปรตีน ตัวอย่างใน 1 x บัฟเฟอร์ตัวอย่าง SDS (62.5 มิลลิทริสพีเอช 6.8, 2% SDS, กลีเซอรีน 10% 0.0005% Bromophenol สีฟ้า 1.5% DTT). - เสียสภาพธรรมชาติของโปรตีนโดยตัวอย่างเดือด 3 นาที. เคลื่อนที่ 50 ไมโครกรัม / เลนของโปรตีนใน polyarylamide เจล- เพิ่มประมาณ 400 มิลลิลิตร 1X Tris / Glycine / SDS ทำงานบัฟเฟอร์ที่จะลดลงในห้องของเซลล์ Snap ฝาบนห้องและเสียบนำไปสู่การเข้าสู่อำนาจแหล่งที่มา สมัครแรงดันคงที่ 200 V สำหรับ 55 นาที. - ทำแซนวิชประกอบด้วยกระดาษกรองเจล-blot (PVDF หรือ nitrocellulose) กรองกระดาษและสถานที่ในสนามไฟฟ้าที่ประจุลบโปรตีนโยกย้ายออกจากเจลลงบนรอยเปื้อน สมัครปัจจุบัน (60-70V) ตามระยะเวลาที่แนะนำ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

- ทำให้ดู ทีวีช่องล้างเซลล์ด้วย 5 % t .
- sonicate ตัวอย่างสั้น ๆหรือผ่านไปหลายครั้งผ่านเข็ม 21 วัด .
- เครื่องตัวอย่างที่ 4 ° C เป็นเวลา 10 นาที เพื่อละลายวัสดุเม็ด

-- ตรวจสอบความเข้มข้นของโปรตีน และโปรตีนเจือจางตัวอย่างใน 1 X t
บัฟเฟอร์ ( 62.5 มม. โดยตัวอย่าง พีเอช 6.8 , 2 % SDS , 10% กลีเซอรอลโบรโมฟีน 0.0005% สีฟ้า , 1.5% ส่วน

)- โมเลกุลโปรตีนโดยการต้มตัวอย่าง 3 นาที

โหลด 50 μกรัมของโปรตีนใน polyarylamide เลนเจล
- เพิ่มประมาณ 400 มล. / น / 1 บริษัท SDS วิ่งบัฟเฟอร์เพื่อลด
หอเซลล์ ถ่ายฝาบนห้องและเสียบนำเข้าพลังงาน
แหล่ง ใช้แรงดันคงที่ 200 v

55 นาที- ทำแซนวิชประกอบด้วยไส้กรองกระดาษเจลเปรอะเปื้อน ( PVDF หรือไนโตร ) - กระดาษกรอง
, และสถานที่ในสนามไฟฟ้าที่ประจุลบโปรตีนโยกย้ายออกจากเจล
ลงเปรอะเปื้อน . ใช้ในปัจจุบัน ( 60-70v ) ตามระยะเวลาที่แนะนำ