Results
Quercetin and tamarixetin are internalised by platelets
To determine whether quercetin and tamarixetin were able to
gain access to the platelet cytosol containing metabolic enzymes,
the intrinsic fluorescent properties of quercetin and tamarixetin
[27] were utilised to visualise their potential presence within these
cells. Following incubation with quercetin (100 mM), tamarixetin
(40 mM) or the solvent control, dimethylsulphoxide (DMSO: 0.2%
(v/v)) for 30 min, a series of images in the z dimension were
obtained at 0.2 mm intervals through the membrane and cytosol of
platelets. A single image of a layer from the middle of the series
illustrated internalisation of quercetin (Figure 2B. i-iii and 2C. i-iii)
and tamarixetin (Figure 2D. i-iii and 2E. i-iii) and magnified
images showed greater detail (quercetin: Figure 2C. i-iii) and
(tamarixetin: Figure 2E. i-iii). Low levels of auto-fluorescence were
detected in untreated platelets (Figure 2A.i-iii).
Quercetin and tamarixetin associate with platelets
The putative ability of platelets to metabolise quercetin and
tamarixetin was investigated by HPLC analysis which involved
measuring the presence of these compohunds and potential
metabolic products in extracts from platelets treated with the
flavonol and metabolite. Platelets were treated with quercetin
(50 mM), tamarixetin (50 mM), or DMSO (0.2% (v/v)) for 5, 40, 60
and 120 min, lysed and spiked with myricetin (50 mM). Quercetin
and tamarixetin were identified at all incubation periods in platelet
extracts (through comparison with appropriate standards), but were
not modified. The retention times (RT) of quercetin (Figure 3A) and
tamarixetin (Figure 3B) were 46.1 and 51.6 min respectively and
that of the external control spike, myricetin (Figure 3F) was 39 min.
The plasma control (Figure 3C) did not contain any compounds and
HPLC analysis of standards showed single peaks at the respective
RT stated above (Figure 3D, E and F). UV spectra of quercetin,
myricetin and tamarixetin measured at 360 nm confirmed the
presence of these compounds in platelet extracts.
Quercetin is metabolised by platelets
Internalisation of quercetin and tamarixetin by platelets raised
the possibility that the flavonol and metabolite may be metabolised
by COMT, P-ST or glucuronidases within these cells. The
concentration and analysis of platelet extracts by HPLC alone was
insufficiently sensitive to detect metabolites of compounds, so MS
was incorporated following HPLC separation. Platelets were
incubated for 5, 40, 60 and 120 min with quercetin (50 mM) or
tamarixetin (50 mM), before lysis and extraction. Quercetin
aglycone (Figure 4A) was converted into a compound that was
detected at an RT (7.5 min) and m/z (317) identical to those of
tamarixetin. The platelet metabolite was detected at low intensity
between 5 (Figure 4A) and 40 min (data not shown) with the ion
detected at higher intensity after 60 min, suggesting a higher
internal concentration (Figure 4B). This species was not detected
at 0 and 120 min. Tamarixetin was not modified by platelets (data
not shown). Other plasma metabolites of quercetin, quercetin-39-
sulphate and quercetin-3-glucuronide were not detected within
platelets treated with either the aglycone or methylated metabolite
(data not shown).
ผลลัพธ์Quercetin และ tamarixetin internalised โดยเกล็ดเลือดการตรวจสอบว่า quercetin และ tamarixetin ถูกต้องเข้าสู่ไซโตซอลเกล็ดเลือดที่ประกอบด้วยเอนไซม์เผาผลาญคุณสมบัติเรืองแสง intrinsic quercetin และ tamarixetin[27] ถูกใช้เพื่อ visualise ของพวกเขาแสดงศักยภาพภายในเหล่านี้เซลล์ คณะทันตแพทยศาสตร์ต่อ ด้วย quercetin (100 mM), tamarixetin(40mm) หรือตัว ควบคุมตัวทำละลาย dimethylsulphoxide (DMSO: 0.2%(v/v)) ใน 30 นาที มีชุดของรูปภาพในมิติ zได้ในช่วง 0.2 mm ผ่านเมมเบรนและไซโตซอลของเกล็ดเลือด รูปเดี่ยวของชั้นจากตรงกลางของชุดinternalisation คู่มือของ quercetin (รูปที่ 2B. i-iii และ 2C. i-iii)และ tamarixetin (รูปที่ 2D i-iii และ 2E i-iii) และขยายภาพแสดงให้เห็นรายละเอียดมากกว่า (quercetin: รูป 2C. i-iii) และ(tamarixetin: รูปที่ 2E i-iii) ระดับต่ำสุดของ fluorescence อัตโนมัติได้ตรวจพบในเกล็ดเลือดไม่ถูกรักษา (รูป 2A.i-iii)Quercetin และ tamarixetin เชื่อมโยงกับเกล็ดเลือดเกล็ดเลือดความ putative ฤทธิ์ quercetin และtamarixetin ถูกสอบสวน โดยวิเคราะห์ HPLC ซึ่งเกี่ยวข้องกับวัดของ compohunds และศักยภาพเหล่านี้รับผลิตภัณฑ์เผาผลาญในสารสกัดจากเกล็ดเลือดflavonol และ metabolite เกล็ดเลือดได้รับ quercetin(50 mM), tamarixetin (50 mM), หรือ DMSO (0.2% (v/v)) 5, 40, 60และ 120 นาที lysed และ spiked กับ myricetin (50 mM) Quercetinและระบุ tamarixetin ที่ระยะฟักตัวทั้งหมดในเกล็ดเลือดแต่มีบางส่วน (โดยเปรียบเทียบกับมาตรฐานที่เหมาะสม),ไม่ปรับเปลี่ยน เก็บรักษาเวลา (RT) ของ quercetin (รูปที่ 3A) และtamarixetin (รูปที่ 3B) ได้ 46.1 และ 51.6 นาทีตามลำดับ และตัวควบคุมภายนอกที่ขัดขวาง myricetin (รูปที่ 3F) ถูก 39 นาทีควบคุมพลาสมา (รูปที่ 3C) ไม่ประกอบด้วยสารใด ๆ และมาตรฐานวิเคราะห์ HPLC พบยอดเดียวที่ที่เกี่ยวข้องRT กล่าว (รูป 3D, E และ F) แรมสเป็คตรา UV ของ quercetinmyricetin และ tamarixetin วัดที่ 360 nm ที่ยืนยันการสารสกัดของสารประกอบเหล่านี้ในเกล็ดเลือดQuercetin เป็น metabolised โดยเกล็ดเลือดInternalisation quercetin และ tamarixetin โดยเกล็ดเลือดเพิ่มขึ้นความเป็นไปได้ว่า flavonol และ metabolite อาจจะ metabolisedโดย COMT, P-ST หรือ glucuronidases ภายในเซลล์เหล่านี้ ที่ความเข้มข้นและวิเคราะห์สารสกัดจากเกล็ดเลือดโดย HPLC เพียงอย่างเดียวinsufficiently สำคัญสืบ metabolites ของสารประกอบ MS ดังนั้นถูกรวมต่อแยก HPLC เกล็ดเลือดได้incubated สำหรับ 5, 40, 60 และ 120 นาทีด้วย quercetin (50 mM) หรือtamarixetin (50 mM), ก่อน lysis และสกัด Quercetinสารประกอบที่ถูกแปลง aglycone (รูปที่ 4A)ในการ RT (7.5 นาที) และ m/z (317) เหมือนกับtamarixetin พบ metabolite เกล็ดเลือดที่ความเข้มต่ำ40 นาที (ไม่ได้แสดงข้อมูล) และ 5 (รูปที่ 4A) กับไอออนพบที่ความเข้มสูงหลังจาก 60 นาที แนะนำสูงขึ้นภายในเข้มข้น (รูปที่ 4B) ไม่พบชนิดนี้ที่ 0 ถึง 120 นาที Tamarixetin ไม่ล่าสุด โดยเกล็ดเลือด (ข้อมูลไม่แสดง) อื่น metabolites พลาสม่าของ quercetin, quercetin-39 -ซัลเฟตและ quercetin-3-glucuronide ไม่พบภายในเกล็ดเลือดถือว่าพร้อมจะ aglycone หรือ methylated metabolite(ข้อมูลไม่แสดง)
การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์
Quercetin และ tamarixetin จะ internalized โดยเกล็ดเลือด
เพื่อตรวจสอบว่า quercetin และ tamarixetin ก็สามารถที่จะ
ได้รับการเข้าถึงเกล็ดเลือดเซลล์ที่มีเอนไซม์เผาผลาญ
คุณสมบัติเรืองแสงที่แท้จริงของ quercetin และ tamarixetin
[27] ถูกนำมาใช้เพื่อให้มองเห็นการแสดงตนที่มีศักยภาพของพวกเขาเหล่านี้ภายใน
เซลล์ ต่อไปนี้การบ่มด้วย quercetin (100 มิลลิเมตร) tamarixetin
(40 มิลลิเมตร) หรือการควบคุมตัวทำละลาย DIMETHYLSULPHOXIDE (DMSO: 0.2%
(v / v)) เป็นเวลา 30 นาที, ชุดของภาพในถูกมิติ Z
ได้ที่ 0.2 mm ช่วงเวลาที่ผ่าน เมมเบรนและเซลล์ของ
เกล็ดเลือด ภาพเดียวของชั้นจากตรงกลางของชุด
แสดง internalisation ของ quercetin (รูปที่ 2B. I-III และ 2C. I-iii)
และ tamarixetin (รูปแบบ 2 มิติ. I-III และ 2E. I-iii) และขยาย
ภาพที่แสดงให้เห็นว่า รายละเอียดมากขึ้น (quercetin: รูปที่ผม 2C-iii.) และ
(tamarixetin. 2E รูปแบบ i-iii) ระดับต่ำของอัตโนมัติเรืองแสงถูก
ตรวจพบในเกล็ดเลือดได้รับการรักษา (รูปที่ 2A.i-iii). Quercetin และ บริษัท ร่วม tamarixetin กับเกล็ดเลือดความสามารถสมมุติของเกล็ดเลือดที่จะเผาผลาญสาร quercetin และtamarixetin ถูกตรวจสอบโดยการวิเคราะห์ HPLC ซึ่งเกี่ยวข้องกับการวัดการปรากฏตัวของ compohunds เหล่านี้และ ที่มีศักยภาพในการเผาผลาญของผลิตภัณฑ์สารสกัดจากเกล็ดเลือดรับการรักษาด้วยflavonol และ metabolite เกล็ดเลือดได้รับการรักษาด้วย quercetin (50 มิลลิเมตร) tamarixetin (50 มิลลิเมตร) หรือ DMSO (0.2% (v / v)) เป็นเวลา 5, 40, 60 และ 120 นาที, lysed และถูกแทงด้วย myricetin (50 มิลลิเมตร) Quercetin และ tamarixetin ถูกระบุในช่วงเวลาฟักตัวทั้งหมดในเกล็ดเลือดสารสกัด (ผ่านการเปรียบเทียบกับมาตรฐานที่เหมาะสม) แต่ไม่ได้แก้ไข เวลาการเก็บรักษา (RT) ของ quercetin (รูปที่ 3A) และtamarixetin (รูปที่ 3B) เป็น 46.1 และ 51.6 ตามลำดับและนาทีที่ขัดขวางการควบคุมภายนอก myricetin (รูป 3F) 39 นาที. ควบคุมพลาสม่า (รูปที่ 3C) ไม่ได้ มีสารใด ๆ และการวิเคราะห์ HPLC มาตรฐานการแสดงให้เห็นว่ายอดเดียวในแต่ละRT ระบุไว้ข้างต้น (รูปที่ 3 มิติ, E และ F) สเปกตรัมของรังสียูวี quercetin, myricetin และ tamarixetin วัดที่ 360 นาโนเมตรได้รับการยืนยันการมีอยู่ของสารเหล่านี้ในสารสกัดจากเกล็ดเลือด. Quercetin ถูกเผาผลาญโดยเกล็ดเลือดinternalisation ของ quercetin และ tamarixetin โดยยกเกล็ดเลือดเป็นไปได้ว่า flavonol และ metabolite อาจจะเผาผลาญโดย COMT, P- ST หรือ glucuronidases ภายในเซลล์เหล่านี้ และการวิเคราะห์ความเข้มข้นของสารสกัดจากเกล็ดเลือดโดยวิธี HPLC อย่างเดียวไม่เพียงพอที่มีความสำคัญในการตรวจสอบสารของสารดังนั้น MS จัดตั้งขึ้นดังต่อไปนี้การแยกสารด้วยเทคนิค HPLC เกล็ดเลือดที่ถูกบ่มเป็นเวลา 5, 40, 60 และ 120 นาทีด้วย quercetin (50 มิลลิเมตร) หรือtamarixetin (50 มิลลิเมตร) ก่อนที่จะสลายและการสกัด Quercetin aglycone (รูปที่ 4A) ถูกดัดแปลงให้เป็นสารที่ได้รับการตรวจพบใน RT (7.5 นาที) และม. / Z (317) เหมือนกันกับของtamarixetin metabolite ของเกล็ดเลือดที่ตรวจพบที่ระดับความเข้มต่ำระหว่าง 5 (รูปที่ 4A) และ 40 นาที (ไม่ได้แสดงข้อมูล) กับไอออนตรวจพบที่ระดับความเข้มสูงขึ้นหลังจาก 60 นาทีบอกที่สูงกว่าความเข้มข้นภายใน (รูปที่ 4B) สายพันธุ์นี้ไม่ได้ถูกตรวจพบที่ 0 และ 120 นาที Tamarixetin ไม่ได้ถูกแก้ไขโดยเกล็ดเลือด (ข้อมูลไม่แสดง) สารพลาสม่าอื่น ๆ ของ quercetin, quercetin-39- ซัลเฟตและ quercetin-3-glucuronide ไม่ได้ถูกตรวจพบภายในเกล็ดเลือดได้รับการปฏิบัติอย่างใดอย่างหนึ่งหรือ aglycone metabolite methylated (ไม่ได้แสดงข้อมูล)
การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลและเป็น internalised
เคอร์ tamarixetin โดยเกล็ดเลือด
เพื่อตรวจสอบว่า ซี เอช tamarixetin สามารถ
เข้า PDF ที่มีการเผาผลาญของเอนไซม์
เรืองสมบัติที่แท้จริงของ ซี เอช tamarixetin
[ 27 ] ใช้ในการเห็นภาพการแสดงศักยภาพของพวกเขาภายในเซลล์เหล่านี้
ต่อไปนี้บ่มกับเคอร์ ( 100 mM ) , tamarixetin
( 40 มม. ) หรือสารเคมีควบคุม dimethylsulphoxide ( DMSO : 0.2 %
( v / v ) เป็นเวลา 30 นาที ชุดของภาพใน Z (
) มิติในช่วง 0.2 มม. ผ่านเมมเบรนและไซโตซอลของ
เกล็ดเลือด เป็นรูปเดียวของชั้นจากตรงกลางของชุด
ภาพประกอบ internalisation ของเคอร์ ( รูปที่ 2B 2C และ และ และ และ tamarixetin . )
( รูป 2 มิติ และ และ 2 . 1-3 ) และขยาย
ภาพแสดงรายละเอียดมากขึ้น ( เคอร์ : รูป 2 . 1-3 )
( tamarixetin : รูป 2 . 1-3 ) ระดับต่ำของรถยนต์ถูกตรวจพบในการรักษาเกล็ดเลือด
( รูปที่ 2A . 1-3 )
และเคอร์ tamarixetin เชื่อมโยงกับความสามารถของเกล็ดเลือดซึ่งเกล็ดเลือด
tamarixetin เคอร์เพื่อ metabolise และถูกตรวจสอบด้วย HPLC ในการวิเคราะห์ที่เกี่ยวข้องกับ
วัดสถานะของ compohunds เหล่านี้และผลิตภัณฑ์ที่มีสารสกัดจากการสลาย
และเกล็ดเลือดที่ได้รับ flavonol ไลท์ . เกล็ดเลือดรักษาด้วย quercetin
( 50 มม. ) , tamarixetin ( 50 มม. ) หรือ DMSO ( 0.2% ( v / v ) 5 , 40 , 60 และ 120 นาที และ lysed
, C ไมริซีทิน ( 50 มม. ) และ quercetin
tamarixetin ระบุที่ระยะเวลาทั้งหมดในเกล็ดเลือด
สารสกัด ( ผ่านการเปรียบเทียบกับมาตรฐานที่เหมาะสม ) แต่ถูก
ไม่แก้ไข ในเวลา ( RT ) ของเควอซิติน ( รูปที่ 3 ) และ
tamarixetin ( รูปที่ 3B ) และข้อมูลระหว่างนาทีตามลำดับและ
ที่ขัดขวางการควบคุมภายนอก ไมริซีทิน ( รูป 3f ) 39 นาที
การควบคุมพลาสมา ( รูปที่ 3 ) ไม่ประกอบด้วยสารประกอบใด ๆการวิเคราะห์ HPLC และ
มาตรฐานพบยอดเดียว ที่เกี่ยวข้อง
RT ที่ระบุไว้ข้างต้น ( 3D , รูป E และ F ) สเปกตรัมของรังสี UV และแหล่งปลูก
ไมริซีทิน tamarixetin วัด 360 nm ยืนยัน
ตนของสารประกอบเหล่านี้ในเกล็ดเลือดที่สกัด
internalisation quercetin เป็น metabolised โดยเกล็ดเลือดของ ซี เอช tamarixetin โดยเกล็ดเลือดเพิ่มขึ้น
ความเป็นไปได้ที่อาจถูก metabolised และ 3 ระดับ โดย comt
, glucuronidases p-st หรือภายในเซลล์เหล่านี้
ความเข้มข้นและการวิเคราะห์สารสกัดด้วย HPLC เกล็ดเลือดอยู่ที่ไม่ไวต่อการตรวจจับสาร
สารประกอบดังนั้นนางสาว
จัดตั้งขึ้นตามแยก 2 . เกล็ดเลือด (
) 5 , 40 , 60 และ 120 นาทีกับเคอร์ ( 50 มม. ) หรือ
tamarixetin ( 50 มม. ) ก่อนการสลายและการสกัด เคอร์ซีทิน ( รูปที่ 4 )
ี่ถูกแปลงเป็นสารประกอบที่
ตรวจพบการ RT ( 7.5 นาที ) และ M / Z ( 317 ) เหมือนพวก
tamarixetin . โรคที่ตรวจพบในระดับความเข้มต่ำ ระหว่าง 5
( รูปที่ 4 ) และ 40 นาที ( ข้อมูลไม่แสดง ) กับไอออน
ตรวจพบความเข้มสูงหลังจาก 60 นาที จะสูงกว่า
ภายในสมาธิตัวเลข ( 4B ) ชนิดนี้ไม่พบ
0 และ 120 นาที tamarixetin ไม่ได้ถูกแก้ไขโดยเกล็ดเลือด ( ข้อมูล
ไม่แสดง ) สารอื่น ๆ ของพลาสมาแหล่งปลูก quercetin-39 -
ซัลเฟตและ quercetin-3-glucuronide ไม่พบภายใน
เกล็ดเลือดรักษาด้วยอย่างใดอย่างหนึ่งหรือ methylated ี่ไลท์
( ข้อมูลไม่แสดง )
การแปล กรุณารอสักครู่..
