Figure 4. . . Nested PCR amplificat

Figure 4. . . Nested PCR amplification of a subgenomic region of cDNA for baboon hepatitis B virus, South Africa. Reverse transcribed, DNase I–treated cDNA products were amplified by PCR, and amplicons were resolved by electrophoresis on a 1% agarose gel containing ethidium bromide. Non–reverse transcribed samples (in which diethyl pyrocarbonate [DEPC]–treated water was added instead of enzyme during reverse transcription) were included as negative controls. Top panel: Nested PCR 1: 255F–759R; PCR 2: 459F–710R. Bottom panel, 550-bp region of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene amplified to assess quality of mRNA. Lanes 1 and 8, 100 mg of baboon liver tissue used for RNA extraction; lanes 2 and 9, RNA extraction negative control; lanes 3 and 10, 200 mg of baboon liver tissue used for RNA extraction; lanes 4 and 11, RNA extraction negative control; lane 5, DNase I treatment negative control in which DEPC-treated water was added instead of RNA; lane 6, reverse transcription negative control in which DEPC-treated water was added instead of cDNA; lanes 7 and 12, double-round nested PCR negative control containing best-quality water instead of cDNA; lane 13, single-round PCR negative control containing best-quality water instead of cDNA; lane 14, PCR-positive control containing DNA extracted from liver tissue of baboon 9732 as template.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รูปที่ 4 . . ขยาย PCR ที่ซ้อนกันของภูมิภาค subgenomic ของ cDNA กับลิงบาบูนไวรัสตับอักเสบบี, แอฟริกาใต้ ย้อนกลับคัดลอก DNAse ฉันได้รับการรักษาผลิตภัณฑ์ยีนถูกขยายโดยวิธี PCR และ amplicons มีการแก้ไขโดยข่าวคราวเกี่ยวกับเจล agarose 1% ที่มี ethidium โบรไมด์ตัวอย่างที่ไม่ย้อนกลับคัดลอก (ซึ่ง diethyl pyrocarbonate น้ำ [depc] ได้รับการรักษาถูกเพิ่มเข้ามาแทนเอนไซม์ในระหว่างการถอดความกลับ) ถูกรวมการควบคุมเชิงลบ แผงด้านบน: ซ้อนกัน pcr 1: 255F-759R; pcr 2: 459f-710r แผงด้านล่างภาค 550-bp ของ glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต dehydrogenase ขยายยีนในการประเมินคุณภาพของ mrna ช่องที่ 1 และ 8100 มิลลิกรัมของเนื้อเยื่อตับลิงบาบูนที่ใช้ในการสกัด RNA; เลนที่ 2 และ 9 การสกัด RNA ควบคุมลบช่อง 3 และ 10, 200 mg ของเนื้อเยื่อตับลิงบาบูนที่ใช้ในการสกัด RNA; เลนที่ 4 และ 11, การสกัด RNA ควบคุมลบช่อง 5 DNAse รักษาฉันควบคุมเชิงลบในที่ที่น้ำ depc รับการรักษาถูกเพิ่มเข้ามาแทนอาร์เอ็นเอ; เลน 6ย้อนกลับถอดความการควบคุมเชิงลบในที่ที่น้ำ depc รับการรักษาถูกเพิ่มเข้ามาแทนยีน; เลน 7 และ 12 สองรอบ PCR ซ้อนกันควบคุมเชิงลบที่มีน้ำมีคุณภาพดีที่สุดแทน cDNA; เลน 13 รอบเดียว pcr ควบคุมเชิงลบที่มีคุณภาพดีที่สุด น้ำแทน cDNA; ช่อง 14, การควบคุมที่มี dna pcr บวกสกัดจากเนื้อเยื่อตับของลิงบาบูน 9732 เป็นแม่แบบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รูปที่ 4 . . ขยาย PCR ที่ซ้อนกันของพื้นที่ subgenomic cDNA สำหรับไวรัสตับอักเสบบีลิงบาบูน แอฟริกาใต้ กลับทับ ศัพท์ I–treated DNase ผลิตภัณฑ์ cDNA ถูกขยาย โดย PCR และ amplicons ได้รับการแก้ไข โดย electrophoresis ในเจ 1% agarose ประกอบด้วยโบรไมด์ ethidium Non–reverse ทับศัพท์ตัวอย่าง (ในที่ pyrocarbonate diethyl [DEPC] –treated น้ำเพิ่มแทนเอนไซม์ระหว่างย้อน transcription) ถูกรวมเป็นตัวควบคุมค่าลบ แผงด้านบน: ซ้อน PCR 1: 255F–759R PCR 2: 459F–710R ด้านล่างแผง 550-bp ภูมิภาคของยีน dehydrogenase glyceraldehyde-3-ฟอสเฟตขยายเพื่อประเมินคุณภาพของ mRNA 1 ถนนหนทางและ 8 เนื้อเยื่อตับลิงบาบูนที่ใช้สำหรับสกัดอาร์เอ็นเอ 100 มก. ถนนหนทาง 2 และ 9 สกัดอาร์เอ็นเอลบควบคุม ถนนหนทางที่ 3 และ 10, 200 มิลลิกรัมของเนื้อเยื่อตับลิงบาบูนที่ใช้สำหรับสกัดอาร์เอ็นเอ ถนนหนทาง 4 และ 11 สกัดอาร์เอ็นเอลบควบคุม เลน 5, DNase ฉันรักษาลบควบคุมในน้ำถือว่า DEPC เพิ่มแทนอาร์เอ็นเอ เลน 6 กลับ transcription ลบตัวควบคุมที่มีเพิ่มน้ำรักษา DEPC แทน cDNA ถนนหนทาง 7 และ 12 การที่มีน้ำคุณภาพดีแทน cDNA ควบคุมลบ PCR ซ้อนกันสองรอบ เลน 13 รอบเดียว PCR ควบคุมลบประกอบด้วยน้ำคุณภาพดีแทน cDNA เลนที่ 14, PCR เป็นบวกควบคุมที่มีดีเอ็นเอที่สกัดจากเนื้อเยื่อตับของลิงบาบูน 9732 เป็นแม่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รูปที่ 4 . .... .... ในการขยายสัญญาณเสียง pcr ของเขตพื้นที่ subgenomic ของไวรัสตับอักเสบ cdna สำหรับลิงหน้าหมู B แอฟริกาใต้. ย้อนกลับสินค้า cdna dnase I - ได้รับการปฏิบัติที่ถอดสคริปต์แล้วมีแอมพลิฟายโดย pcr และ amplicons ก็แก้ไขได้โดย electrophoresis บนเจล agarose 1% ที่ประกอบด้วยไม่น่าทึ่ง ethidiumตัวอย่างที่ถอดสคริปต์แล้วไม่ใช่ - ย้อนกลับ(ในน้ำที่ pyrocarbonate [ depc ] - การปฏิบัติ diethyl ได้ถูกเพิ่มลงแทนของเอนไซม์ในระหว่างการถอดสคริปต์ทั้งย้อนกลับ)รวมอยู่ในการควบคุมค่าติดลบ แผงควบคุมบนซ้อน pcr 1 R 255 F -759 pcr 2 459 F 710 R . แผงด้านล่างเขตพื้นที่ 550 - BP ยีน alcohol dehydrogenase glyceraldehyde - 3 - ฟอสเฟตแอมพลิฟายในการประเมิน คุณภาพ ของ mrna . ช่อง 1 และ 8100 มก.ของลิงหน้าหมูตับเนื้อเยื่อใช้สำหรับการขุดเจาะ rna ;ช่องทาง 2 และ 9 , rna สกัดน้ำมันติดลบการควบคุม;ช่องทาง 3 และ 10 , 200 มก.ของลิงหน้าหมูตับเนื้อเยื่อใช้สำหรับ rna สกัด;ช่องทาง 4 และ 11 , rna สกัดลบควบคุม;ช่อง 5 , dnase ผมการบำบัดทางลบในการควบคุมซึ่ง depc - ได้รับการปฏิบัตินั้นมีน้ำเพิ่มขึ้นแทนที่จะเป็น rna ;ช่อง 6 ,การถอดสคริปต์ย้อนกลับติดลบในการควบคุมซึ่ง depc - ได้รับการปฏิบัตินั้นมีน้ำเพิ่มขึ้นแทนของ cdna ;ช่อง 7 และ 12 ,คู่ - รอบซ้อน pcr ลบการควบคุมที่มีดีที่สุด - คุณภาพ ของน้ำแทนของ cdna ;ช่อง 13 , single - รอบ pcr ลบการควบคุมที่มีดีที่สุด - คุณภาพ ของน้ำแทนของ cdna ;ช่อง 14 , pcr - ในเชิงบวกการควบคุมประกอบด้วยดีเอ็นเอมาจากตับเนื้อเยื่อของลิงหน้าหมู 9732 เป็นเทมเพลต.