The method of culturing cells using

The method of culturing cells using the ตู้เพาะเลี้ยงs according to this รูปลักษณะ
is similar to that of the first รูปลักษณะ, and thus the description thereof is omitted.
The ตู้เพาะเลี้ยงs according to this รูปลักษณะ can provide the same advantageous effects as those of the first รูปลักษณะ.
[0035]
10 Fourth รูปลักษณะ
Fig. 1 illustrates a mode in which the ตู้เพาะเลี้ยงs 1 according to one รูปลักษณะ
are arranged in the culture plate 3 (well plate). The ตู้เพาะเลี้ยงs 1 according to one
รูปลักษณะ can also be formed in a chamber (instrument) other than the culture plate 3 shown
in Fig. 1. Figs. 10 to 12 show examples of the structure of a ตู้เพาะเลี้ยง according to a 15 fourth รูปลักษณะ. Fig. 10 is a schematic view showing an example of the structure in which a
flask-shaped culture flask is used. Fig. 11 is a schematic view showing an example of the
structure in which a frame of a culture plate is used. Fig. 12 is a schematic view showing an
example of the structure in which the culture plate shown in Fig. 11 is designed in a stack shape
and used.
20 [0036]
In Fig. 10, a bottom surface of a culture flask 4 is used as a culture surface 4A (culture bottom surface). The culture surface 4A corresponds to each ตู้เพาะเลี้ยง 1 shown in Fig. 1. Accordingly, the culture surface 4A can also be referred to as a ตู้เพาะเลี้ยง. Like each
ตู้เพาะเลี้ยง 1 shown in Fig. 1, the culture surface 4A is a unit for using the same อาหารเลี้ยง. 25 The culture flask 4 includes a cap 4B. The area of the culture surface 4A can be designed
depending on the intended use. Examples of the size of a typical culture flask include 25, 75,
and 225 cm2. A จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of โพรง 40 are formed in the culture surface 4A of the culture flask
4. For example, in the bottom surface of the culture flask 4, a shaded area is designed as the
culture surface 4A and the จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of โพรง 40 are founed in the culture surface 4A. The
30 shape of each recess 40 (the shape of each of the ส่วนล่าง and the ส่วนช่องเปิด) may be
any one of the shapes illustrated in the above .
Fig. 11 shows an example in which only the frame of a culture plate is used. In Fig. 1, the ตู้เพาะเลี้ยงs 1 (wells) are formed in the culture plate 3, whereas in Fig. 11, a bottom surface of a culture plate 5 is used as a culture surface 5A (culture bottom surface). The culture
surface 5A corresponds to each ตู้เพาะเลี้ยง 1 shown in Fig. 1. Accordingly, the culture
surface 5A can also be referred to as a ตู้เพาะเลี้ยง. The culture surface 5A is a unit for
using the same อาหารเลี้ยง. The lower part of Fig. 11 shows an example (schematic cross-sectional
view) of the structure of the culture surface 5A. For example, in the bottom surface of the
5 culture plate 5, a shaded area is designed as the culture surface 5A and a จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of โพรง 50
are formed in the culture surface 5A. The โพรง 50 shown in Fig. 11 are schematically
illustrated. The number, size, and the like of the โพรง 50 are designed depending on the
intended use. The shape of each recess 50 (the shape of each of the ส่วนล่าง and the
ส่วนช่องเปิด) may be any one of the shapes illustrated in the above รูปลักษณะs.
10 Fig. 12 shows a structural example of a cell stack form in which a จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of culture
plates 5 shown in Fig. 11 are stacked. In other words, Fig. 12 shows an example of a multi-stage
structure. In a case where cells are cultured in a closed system with a larger area, the cell stack
form is generally used. While Fig. 12 illustrates an example in which the culture plates 5 shown
in Fig. 11 are stacked, the culture plates 3 shown in Fig. 1 may be stacked. In Fig. 12, the
15 illustration of a chamber that accommodates the จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of stacked ตู้เพาะเลี้ยงs and
provides a mechanism for การแทนที่ of a อาหารเลี้ยง is omitted. For example, a ตู้เพาะเลี้ยง having a typical stack shape can be used as the chamber that accommodates the จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of
culture plates. The explanation thereof is herein omitted.
[0037]
20 Other รูปลักษณะs
In the above รูปลักษณะs, the boundary between the ส่วนล่าง and the opening
portion is defined to be parallel to the bottom of each ตู้เพาะเลี้ยง. However, it is not
necessary that the boundary be parallel to the bottom. For example, the boundary may be
inclined with respect to the bottom, or may be foimed in a curve. It is only necessary that a 25 sufficient ที่ว่าง to foiiii a spheroid can be foiiiied in the ส่วนล่าง 11.
[0038]
[Example]
As for a ตู้เพาะเลี้ยง for culturing a cell aggregate and a harvesting method thereof, experiments were conducted according to the following example and comparative example.
30 (1) ตู้เพาะเลี้ยง
ตู้เพาะเลี้ยงs shown in Table 1 were used.
[0039]
[Table 1]
Example Comparative Example
Chamber A culture place in which
patterns of shapes shown in Figs. 1 to 3 are arranged in a culture bottom surface was prepared.

EZ-Sphere®
(manufactured by ASAHI GLASS CO., LTD.)

Bottom shape of micro- hemispherical shape spherical shape
chamber
The number of micro- 600 578
ที่ว่างs/wells
Taper angle 10 degrees There is no portion at
which a taper angle is
formed.
Equivalent diameter R 500 gm 400-500 Am
Depth 400 pm (0.8 R) 150-200 pm
Surface p-HEMA a product with a surface on
which a cell non-adhesion treatment is performed
Shape of chamber 24-well plate 24-well plate


[0040]
As the ตู้เพาะเลี้ยง of the example, a culture plate in which wells (ตู้เพาะเลี้ยงs
1) each including the โพรง 10 shown in Figs. 1 to 3 are formed was prepared.
5 In Table 1, microchambers respectively correspond to the โพรง 10 shown in Figs. 1
to 3 and each of micro-ที่ว่างs is a ที่ว่าง formed by each recess 10 (micro-ที่ว่าง). It can be said that the number of micro-ที่ว่างs per well is the number of โพรง per well.
[0041]
(2) วิธีเพาะเลี้ยง
10 To calculate a survival rate and a harvesting rate, which are described later, by image
analysis, endodermal cells labeled with fluorescence of GFP were used. The endodeiiiial cells,
vascular endothelial cells, and human mesenchymal stem cells were mixed at a ratio of 10:5-10:2,
and the cells were cultured for 30 days in an endothelial cell อาหารเลี้ยง kit-2: EGM-2 BulletKit
(product code CC-3162: Lonza). The อาหารเลี้ยง was replaced once every two days.
15 (3) Measurement of the survival rate of ลูกกลม
All the wells were observed with a confocal laser microscope, and ลูกกลม were





19
recognized by image analysis software. Then, the number of the recognized ลูกกลม was counted and the number was determined as the number of ลูกกลม. The survival rate of ลูกกลม was calculated by the following expression.
Spheroid survival rate (%)=(the number of ลูกกลม)x100/(the number of micro-ที่ว่างs)
5 A few hours after the cells were seeded (0th day), a spheroid-like cluster was formed in
90% or more of the micro-ที่ว่างs in all the ตู้เพาะเลี้ยงs. A value obtained by dividing the number of ลูกกลม obtained after การแทนที่ of the อาหารเลี้ยง on the 10th and 20th days of the culture by the number of ลูกกลม obtained on the 0th day was determined as the survival rate of ลูกกลม.
10 (4) Harvesting Method
After completion of the culture, the solution was agitated with a pipette (manufacturer, model number), and the suspended ลูกกลม were recovered. For example, a pipette capable of sucking 1 mL of อาหารเลี้ยง at maximum is suitably used for a 24-well plate that contains 500 AL to
1 mL of อาหารเลี้ยง.
15 (5) Harvesting Efficiency
Before and after the harvesting of ลูกกลม, images of the ลูกกลม were taken by a confocal laser microscope.
[0042]
(6) Results
20 Fig. 13 shows the survival rate of ลูกกลม during การแทนที่ of the อาหารเลี้ยง. The
vertical axis represents the survival rate of ลูกกลม (Sphere Number) and the horizontal axis represents the number of days of culture.
Fig. 13 shows data obtained from the start of culture to the 20th day of culture. As
shown in Fig. 13, the survival rate of ลูกกลม in the comparative example significantly
25 decreased in comparison to that in the example. After culture for 20 days, the survival rate of
ลูกกลม in the example was 60% or more. This indicates that the survival rate of spheroid in
the example was improved 1.5 times as high as that in the comparative example.
[0043]
Fig. 14 shows the images of ลูกกลม obtained before and after การแทนที่ of the
30 อาหารเลี้ยง in the example and the comparative example. Fig. 14 shows the images of ลูกกลม in
the ตู้เพาะเลี้ยง before and after the second การแทนที่ of the อาหารเลี้ยง on the fourth day of culture. The left side of Fig. 14 shows a photograph of the example (Kuraray p-HEMA), and the right side of Fig. 14 shows a photograph of the comparative example (Iwaki MPC). The upper part of the figure shows images taken before การแทนที่ of the อาหารเลี้ยง, and the lower part

(below an arrow) of Fig. 14 shows images taken after การแทนที่ of the อาหารเลี้ยง. More
specifically, the images in the lower part of Fig. 14 show the state after การแท

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการ culturing เซลล์โดยใช้ ตู้เพาะเลี้ยงs ตามนี้รูปลักษณะคือเหมือนกับว่า ครั้งแรก รูปลักษณะ และคำอธิบายดังกล่าวไม่ใส่ตู้เพาะเลี้ยงs ตามรูปลักษณะนี้สามารถให้ผลประโยชน์เดียวกันที่รูปลักษณะแรก[0035]10 รูปลักษณะ 4Fig. 1 แสดงโหมดที่ ตู้เพาะเลี้ยงs 1 ตามรูปลักษณะหนึ่ง จะถูกจัดเรียงในจานวัฒนธรรม 3 (ทั้งแผ่น) ตู้เพาะเลี้ยงs 1 ตามหนึ่ง รูปลักษณะสามารถยังสามารถเกิดขึ้นในหอ (เครื่องมือ) ไม่ใช่วัฒนธรรมจาน 3 แสดง ใน Fig. 1 Figs. 10-12 แสดงตัวอย่างของโครงสร้างของตู้เพาะเลี้ยงตามรูปลักษณะสี่ 15 Fig. 10 คือ มุมมองมันแสดงตัวอย่างของโครงสร้างที่เป็น หนาวหนาวรูปวัฒนธรรมการผลิต Fig. 11 คือ มุมมองมันแสดงตัวอย่างของการ โครงสร้างที่มีใช้กรอบของวัฒนธรรมจาน Fig. 12 คือ มุมมองมันแสดงการ ตัวอย่างของโครงสร้างที่แสดงใน Fig. 11 แผ่นวัฒนธรรมถูกออกแบบมาในรูปกอง และใช้20 [0036]Fig. 10 พื้นผิวด้านล่างของหนาววัฒนธรรม 4 ใช้เป็น 4A เป็นผิววัฒนธรรม (วัฒนธรรมพื้น) 4A ผิววัฒนธรรมสอดคล้องกับแต่ละตู้เพาะเลี้ยงแสดงใน Fig. 1 1 ตาม 4A ผิววัฒนธรรมสามารถยังถูกเรียกว่าตู้เพาะเลี้ยง เช่นแต่ละตู้เพาะเลี้ยง 1 Fig. 1, 4A ผิววัฒนธรรมแสดงเป็นหน่วยสำหรับใช้อาหารเลี้ยงเดียวกัน หนาว 25 วัฒนธรรม 4 มี 4B หมวก สามารถออกแบบพื้นที่ของ 4A ผิววัฒนธรรม ขึ้นอยู่กับการใช้ ตัวอย่างของขนาดของหนาววัฒนธรรมทั่วไปได้แก่ 25, 75 และ 225 cm2 จำนวนที่มากกว่าหนึ่งของโพรง 40 จะเกิดขึ้นใน 4A ผิววัฒนธรรมของหนาววัฒนธรรม4. ตัวอย่าง ในพื้นผิวด้านล่างของหนาววัฒนธรรม 4 ร่มเงาออกแบบให้เป็นวัฒนธรรมผิว 4A และจำนวนที่มากกว่าหนึ่งของโพรง 40 มี founed ใน 4A ผิววัฒนธรรม ที่30 ทรงย่อมุมละ 40 (รูปร่างของแต่ละส่วนล่างและส่วนช่องเปิด) อาจหนึ่งของรูปร่างที่อธิบายข้างต้นFig. 11 แสดงตัวอย่างซึ่งใช้กรอบของวัฒนธรรมจานเท่านั้น ใน Fig. 1, ตู้เพาะเลี้ยงs 1 (บ่อ) ก่อตั้งขึ้นในวัฒนธรรมจาน 3 ในขณะที่ใน Fig. 11 พื้นผิวด้านล่างของจานวัฒนธรรม 5 ถูกใช้เป็นของ 5A ที่ผิวของวัฒนธรรม (วัฒนธรรมพื้น) วัฒนธรรมของ 5A ผิวสอดคล้องกับแต่ละตู้เพาะเลี้ยงแสดงใน Fig. 1 1 ตาม วัฒนธรรมของ 5A ผิวยังสามารถอ้างถึงเป็นการตู้เพาะเลี้ยง ของ 5A ผิวของวัฒนธรรมเป็นหน่วยใช้อาหารเลี้ยงเดียวกัน ส่วนด้านล่างของ Fig. 11 แสดงตัวอย่าง (มันเหลว ดู) ของโครงสร้างของของ 5A ผิวของวัฒนธรรม ตัวอย่าง ในพื้นผิวด้านล่างของใบ ออกแบบให้แผ่น 5 วัฒนธรรม 5 ร่มเงาเป็นของ 5A ผิวของวัฒนธรรมและจำนวนที่มากกว่าหนึ่งของโพรง 50 จะเกิดขึ้นในของ 5A ผิวของวัฒนธรรม มีโพรง 50 แสดงใน Fig. 11 schematically ภาพประกอบ จำนวน ขนาด ความหมายของโพรง 50 ถูกออกแบบขึ้นอยู่กับการ วัตถุประสงค์การใช้ รูปร่างของแต่ละย่อมุม 50 (รูปร่างของแต่ละส่วนล่างและ ส่วนช่องเปิด) ได้หนึ่งรูปร่างแสดง รูปลักษณะs ข้างต้น10 fig. 12 แสดงตัวอย่างโครงสร้างของเซลล์กองซ้อนแบบที่จำนวนที่มากกว่าหนึ่งวัฒนธรรมแสดงใน Fig. 11 5 แผ่นซ้อนกัน ในคำอื่น ๆ Fig. 12 แสดงตัวอย่างแบบหลายขั้นตอนโครงสร้างการ ในกรณีที่เซลล์มีอ่างในระบบปิดที่มีพื้นที่กว้าง เซลล์เรียงซ้อนโดยทั่วไปจะใช้แบบฟอร์ม ในขณะที่ Fig. 12 แสดงตัวอย่างที่วัฒนธรรมแผ่น 5 แสดงใน Fig. 11 จะซ้อน วัฒนธรรม 3 แสดงใน Fig. 1 แผ่นอาจจะซ้อนได้ ใน Fig. 12 การภาพประกอบ 15 ของหอการค้าที่รองรับจำนวนที่มากกว่าหนึ่งของ ตู้เพาะเลี้ยงs ซ้อน และมีกลไกสำหรับการแทนที่ของอาหารเลี้ยงไม่ใส่ สามารถใช้ตู้เพาะเลี้ยงที่มีรูปร่างทั่วไปกองเป็นหอการค้าที่รองรับจำนวนที่มากกว่าหนึ่งของตัวอย่าง วัฒนธรรมแผ่น คำอธิบายดังกล่าวนี้มีการตัดออก[0037]20 รูปลักษณะs อื่น ๆรูปลักษณะs ด้านบน ขอบเขตการส่วนล่างและการเปิด ส่วนที่กำหนดให้ขนานกับด้านล่างของแต่ละตู้เพาะเลี้ยง อย่างไรก็ตาม ไม่ จำเป็นที่ว่า ขอบเขตจะขนานกับด้านล่าง ตัวอย่าง ขอบเขตอาจ หัวกับด้านล่าง หรืออาจจะ foimed ในเส้นโค้ง ได้เฉพาะที่เป็นที่ว่างพอ 25 เพื่อ foiiii เป็นทรงคล้ายทรงกลมสามารถ foiiiied ในส่วนล่าง 11 [0038][ตัวอย่าง]ส่วนตู้เพาะเลี้ยงสำหรับ culturing เซลล์รวมและวิธีการ harvesting นั้น ได้ดำเนินการทดลองตามตัวอย่างต่อไปนี้และตัวอย่างเปรียบเทียบ30 (1) ตู้เพาะเลี้ยงตู้เพาะเลี้ยงs shown in Table 1 were used.[0039][Table 1]Example Comparative ExampleChamber A culture place in whichpatterns of shapes shown in Figs. 1 to 3 are arranged in a culture bottom surface was prepared. EZ-Sphere®(manufactured by ASAHI GLASS CO., LTD.) Bottom shape of micro- hemispherical shape spherical shapechamberThe number of micro- 600 578ที่ว่างs/wellsTaper angle 10 degrees There is no portion atwhich a taper angle isformed.Equivalent diameter R 500 gm 400-500 AmDepth 400 pm (0.8 R) 150-200 pmSurface p-HEMA a product with a surface onwhich a cell non-adhesion treatment is performedShape of chamber 24-well plate 24-well plate[0040]As the ตู้เพาะเลี้ยง of the example, a culture plate in which wells (ตู้เพาะเลี้ยงs1) each including the โพรง 10 shown in Figs. 1 to 3 are formed was prepared.5 In Table 1, microchambers respectively correspond to the โพรง 10 shown in Figs. 1to 3 and each of micro-ที่ว่างs is a ที่ว่าง formed by each recess 10 (micro-ที่ว่าง). It can be said that the number of micro-ที่ว่างs per well is the number of โพรง per well. [0041](2) วิธีเพาะเลี้ยง10 To calculate a survival rate and a harvesting rate, which are described later, by imageanalysis, endodermal cells labeled with fluorescence of GFP were used. The endodeiiiial cells,vascular endothelial cells, and human mesenchymal stem cells were mixed at a ratio of 10:5-10:2, and the cells were cultured for 30 days in an endothelial cell อาหารเลี้ยง kit-2: EGM-2 BulletKit (product code CC-3162: Lonza). The อาหารเลี้ยง was replaced once every two days. 15 (3) Measurement of the survival rate of ลูกกลมAll the wells were observed with a confocal laser microscope, and ลูกกลม were 19recognized by image analysis software. Then, the number of the recognized ลูกกลม was counted and the number was determined as the number of ลูกกลม. The survival rate of ลูกกลม was calculated by the following expression.Spheroid survival rate (%)=(the number of ลูกกลม)x100/(the number of micro-ที่ว่างs)5 A few hours after the cells were seeded (0th day), a spheroid-like cluster was formed in90% or more of the micro-ที่ว่างs in all the ตู้เพาะเลี้ยงs. A value obtained by dividing the number of ลูกกลม obtained after การแทนที่ of the อาหารเลี้ยง on the 10th and 20th days of the culture by the number of ลูกกลม obtained on the 0th day was determined as the survival rate of ลูกกลม.10 (4) Harvesting MethodAfter completion of the culture, the solution was agitated with a pipette (manufacturer, model number), and the suspended ลูกกลม were recovered. For example, a pipette capable of sucking 1 mL of อาหารเลี้ยง at maximum is suitably used for a 24-well plate that contains 500 AL to1 mL of อาหารเลี้ยง.15 (5) Harvesting EfficiencyBefore and after the harvesting of ลูกกลม, images of the ลูกกลม were taken by a confocal laser microscope.[0042](6) Results20 Fig. 13 shows the survival rate of ลูกกลม during การแทนที่ of the อาหารเลี้ยง. Thevertical axis represents the survival rate of ลูกกลม (Sphere Number) and the horizontal axis represents the number of days of culture.Fig. 13 shows data obtained from the start of culture to the 20th day of culture. As shown in Fig. 13, the survival rate of ลูกกลม in the comparative example significantly 25 decreased in comparison to that in the example. After culture for 20 days, the survival rate of ลูกกลม in the example was 60% or more. This indicates that the survival rate of spheroid in the example was improved 1.5 times as high as that in the comparative example. [0043]Fig. 14 shows the images of ลูกกลม obtained before and after การแทนที่ of the30 อาหารเลี้ยง in the example and the comparative example. Fig. 14 shows the images of ลูกกลม inthe ตู้เพาะเลี้ยง before and after the second การแทนที่ of the อาหารเลี้ยง on the fourth day of culture. The left side of Fig. 14 shows a photograph of the example (Kuraray p-HEMA), and the right side of Fig. 14 shows a photograph of the comparative example (Iwaki MPC). The upper part of the figure shows images taken before การแทนที่ of the อาหารเลี้ยง, and the lower part (below an arrow) of Fig. 14 shows images taken after การแทนที่ of the อาหารเลี้ยง. Morespecifically, the images in the lower part of Fig. 14 show the state after การแท

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการเพาะเลี้ยงเซลล์โดยใช้ตู้เพาะเลี้ยง s
ตามรูปลักษณะนี้จะคล้ายกับที่ของรูปแรกลักษณะและทำให้คำอธิบายดังกล่าวจะถูกละเว้น.
ตู้เพาะเลี้ยง s ตามนี้รูปลักษณะที่สามารถให้ผลกระทบที่ได้เปรียบเดียวกัน เป็นผู้ที่อยู่ในรูปลักษณะแรก.
[0035]
10
สี่รูปลักษณะรูป 1 ที่แสดงให้เห็นในโหมดที่ตู้เพาะเลี้ยง s 1
ตามรูปลักษณะอย่างใดอย่างหนึ่งจะจัดในจานวัฒนธรรม3 (แผ่นเดียว) ตู้เพาะเลี้ยง s 1
ตามหนึ่งรูปลักษณะนี้ยังสามารถเกิดขึ้นในห้อง(เครื่องดนตรี) ที่นอกเหนือจากแผ่นวัฒนธรรม 3
แสดงให้เห็นในรูป 1. มะเดื่อ 10-12 แสดงตัวอย่างของโครงสร้างของตู้เพาะเลี้ยงตาม 15 สี่รูปลักษณะ มะเดื่อ. 10
เป็นมุมมองที่วงจรการแสดงตัวอย่างของโครงสร้างที่หนึ่งขวดรูปขวดวัฒนธรรมถูกนำมาใช้ มะเดื่อ. 11
เป็นมุมมองที่วงจรการแสดงตัวอย่างของโครงสร้างที่กรอบของแผ่นวัฒนธรรมถูกนำมาใช้ มะเดื่อ. 12
เป็นมุมมองที่วงจรแสดงตัวอย่างของโครงสร้างที่อยู่ในแผ่นวัฒนธรรมที่แสดงในรูป 11
ได้รับการออกแบบในรูปกองและใช้.
20 [0036]
ในรูป 10 พื้นผิวด้านล่างของขวดวัฒนธรรม 4 จะใช้เป็นพื้นผิววัฒนธรรม 4A (วัฒนธรรมพื้นผิวด้านล่าง) 4A ผิววัฒนธรรมที่สอดคล้องกับแต่ละตู้เพาะเลี้ยง 1 แสดงในรูป 1. ดังนั้น 4A วัฒนธรรมพื้นผิวนอกจากนี้ยังสามารถเรียกว่าตู้เพาะเลี้ยง เช่นเดียวกับในแต่ละตู้เพาะเลี้ยง 1 แสดงในรูป
1, 4A ผิววัฒนธรรมเป็นหน่วยในการใช้อาหารเลี้ยงเดียวกัน 25 ขวดวัฒนธรรม 4 รวมถึงหมวก 4B พื้นที่ผิว 4A
วัฒนธรรมที่สามารถได้รับการออกแบบขึ้นอยู่กับการใช้งานที่ตั้งใจ ตัวอย่างของขนาดของขวดวัฒนธรรมทั่วไปรวม 25 75,
และ 225 cm2 จำนวนที่มากกว่าหนึ่งของโพรง 40 จะเกิดขึ้นในพื้นผิว 4A วัฒนธรรมของขวดวัฒนธรรม
4 ยกตัวอย่างเช่นในพื้นผิวด้านล่างของขวดวัฒนธรรม 4
พื้นที่สีเทาถูกออกแบบมาเป็นพื้นผิววัฒนธรรม4A และจำนวนที่มากกว่าหนึ่งของโพรง 40 จะ founed ในพื้นผิววัฒนธรรม 4A
30 รูปร่างของแต่ละช่องที่ 40 (รูปร่างของแต่ละส่วนล่างและส่วนช่องเปิดที่)
อาจจะเป็นคนใดคนหนึ่งของรูปทรงที่แสดงในข้างต้น.
รูป 11 แสดงตัวอย่างซึ่งมีเพียงกรอบของแผ่นวัฒนธรรมที่มีการใช้ ในรูป 1, ตู้เพาะเลี้ยง s ที่ 1 (หลุม) จะเกิดขึ้นในแผ่นวัฒนธรรม 3 ในขณะที่ในรูป 11 พื้นผิวด้านล่างของแผ่นวัฒนธรรม 5 จะใช้เป็นพื้นผิววัฒนธรรม 5A (วัฒนธรรมพื้นผิวด้านล่าง) วัฒนธรรมพื้นผิว 5A สอดคล้องกับแต่ละตู้เพาะเลี้ยง 1 แสดงในรูป
1. ดังนั้นวัฒนธรรม
5A พื้นผิวนอกจากนี้ยังสามารถเรียกว่าตู้เพาะเลี้ยง พื้นผิว 5A
วัฒนธรรมเป็นหน่วยสำหรับการใช้อาหารเลี้ยงเดียวกัน ส่วนล่างของรูป 11 แสดงให้เห็นเป็นตัวอย่าง
(ตัดวงจรมุมมอง) ของโครงสร้างของพื้นผิววัฒนธรรม 5A ที่ ยกตัวอย่างเช่นในพื้นผิวด้านล่างของแผ่นวัฒนธรรม 5 5 เป็นพื้นที่สีเทาถูกออกแบบมาเป็นพื้นผิว 5A วัฒนธรรมและจำนวนที่มากกว่าหนึ่งของโพรง 50 จะเกิดขึ้นในพื้นผิววัฒนธรรม 5A โพรง 50 แสดงในรูป 11 แผนผังแสดง จำนวนขนาดและชอบของโพรง 50 ได้รับการออกแบบขึ้นอยู่กับการใช้งานที่ตั้งใจไว้ รูปร่างของแต่ละช่อง 50 (รูปร่างของแต่ละส่วนล่างและในส่วนช่องเปิด) อาจจะเป็นคนใดคนหนึ่งของรูปทรงที่แสดงในข้างต้นรูปลักษณะ s. 10 รูป 12 แสดงให้เห็นเป็นตัวอย่างโครงสร้างของรูปแบบสแต็คเซลล์ซึ่งในจำนวนที่มากกว่าหนึ่งของวัฒนธรรมแผ่น5 แสดงในรูป 11 ที่ซ้อนกัน ในคำอื่น ๆ รูป 12 แสดงให้เห็นตัวอย่างของหลายขั้นตอนโครงสร้าง ในกรณีที่มีการเพาะเลี้ยงเซลล์ในระบบปิดที่มีพื้นที่ขนาดใหญ่กองเซลล์รูปแบบที่ใช้โดยทั่วไป ในขณะที่รูป 12 แสดงให้เห็นถึงตัวอย่างที่แผ่นวัฒนธรรม 5 แสดงให้เห็นในรูป 11 ที่ซ้อนกัน, จานวัฒนธรรม 3 แสดงในรูป 1 อาจจะซ้อนกัน ในรูป 12 15 ภาพของห้องที่รองรับจำนวนที่มากกว่าหนึ่งซ้อนของตู้เพาะเลี้ยงและให้กลไกสำหรับการแทนที่ของอาหารเลี้ยงถูกละไว้ ยกตัวอย่างเช่นตู้เพาะเลี้ยงมีรูปร่างสแต็คทั่วไปสามารถใช้เป็นห้องที่รองรับจำนวนที่มากกว่าหนึ่งของแผ่นวัฒนธรรม คำอธิบายดังกล่าวถูกละไว้ในที่นี้. [0037] 20 รูปลักษณะอื่น ๆ ของในข้างต้นรูปลักษณะของเขตแดนระหว่างส่วนล่างและเปิดส่วนที่ถูกกำหนดให้เป็นคู่ขนานกับด้านล่างของแต่ละตู้เพาะเลี้ยง แต่มันไม่ได้เป็นสิ่งจำเป็นที่เขตแดนจะขนานไปที่ด้านล่าง ยกตัวอย่างเช่นขอบเขตอาจจะมีความโน้มเอียงที่เกี่ยวกับด้านล่างหรืออาจจะ foimed ในโค้ง มันเป็นสิ่งจำเป็นที่เดียวที่ 25 ที่ว่างเพียงพอที่จะ foiiii ลูกกลมสามารถ foiiiied ในส่วนล่าง 11 [0038] [ตัวอย่าง] ในฐานะที่เป็นสำหรับตู้เพาะเลี้ยงสำหรับเลี้ยงรวมมือถือและวิธีการเก็บเกี่ยวนั้นให้ทดลองได้ดำเนินการตาม ตัวอย่างต่อไปนี้และตัวอย่างเปรียบเทียบ. 30 (1) เพาะเลี้ยงตู้ตู้เพาะเลี้ยงs แสดงในตารางที่ 1 ถูกนำมาใช้. [0039] [ตารางที่ 1] ตัวอย่างเปรียบเทียบตัวอย่างหอการค้าสถานที่วัฒนธรรมซึ่งในรูปแบบของรูปทรงที่แสดงในมะเดื่อ 1-3 จะจัดในพื้นผิวด้านล่างวัฒนธรรมได้รับการเตรียม. EZ-Sphere® (ผลิตโดย ASAHI GLASS CO., LTD.) รูปร่างด้านล่างของรูปทรงครึ่งวงกลมรูปทรงกลมไมโครห้องจำนวน600 ไมโคร 578 ที่ว่าง s / หลุมเรียวมุม 10 องศามีส่วนที่ไม่เป็นที่มุมเรียวจะเกิดขึ้น. เส้นผ่าศูนย์กลาง R เทียบเท่า 500 กรัม 400-500 Am ความลึก 400 เมตร (0.8 R) 150-200 นพื้นผิวพีHEMA ผลิตภัณฑ์ที่มีพื้นผิวบนที่ไม่ใช่เซลล์การรักษา -adhesion จะดำเนินการรูปแบบของห้องแผ่น24 แผ่นเดียว 24 หลุม[0040] ในฐานะที่เป็นตู้เพาะเลี้ยงของตัวอย่างแผ่นวัฒนธรรมที่หลุม (ตู้เพาะเลี้ยง s 1) แต่ละคนรวมทั้ง 10 โพรงมะเดื่อแสดงใน 1-3 จะเกิดขึ้นได้เตรียม. 5 ในตารางที่ 1 microchambers ตามลำดับสอดคล้องกับโพรง 10 แสดงในมะเดื่อ 1 ที่จะที่ 3 และแต่ละไมโครที่ว่าง S เป็นที่ว่างที่เกิดขึ้นจากแต่ละช่อง 10 (ไมโครที่ว่าง) อาจกล่าวได้ว่าจำนวนของไมโคร s ที่ว่างต่อกันคือจำนวนของโพรงต่อกัน. [0041] (2) วิธีเพาะเลี้ยง10 ในการคำนวณอัตราการรอดตายและอัตราการเก็บเกี่ยวซึ่งจะอธิบายต่อไปโดยภาพการวิเคราะห์เซลล์ endodermal กำกับด้วยการเรืองแสงของ GFP ถูกนำมาใช้ เซลล์ endodeiiiial, เซลล์บุผนังหลอดเลือดหลอดเลือดและเซลล์ต้นกำเนิด mesenchymal มนุษย์ถูกผสมในอัตราส่วน 10: 5-10: 2, และเซลล์เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 30 วันใน endothelial เซลล์อาหารเลี้ยงชุด-2: วิสามัญผู้ถือหุ้น-2 BulletKit ( รหัสสินค้า CC-3162: Lonza) อาหารเลี้ยงถูกแทนที่ทุกๆสองวัน. 15 (3) การวัดอัตราการรอดตายของลูกกลมหลุมทั้งหมดถูกตั้งข้อสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์confocal เลเซอร์และลูกกลมเป็น19 ได้รับการยอมรับโดยซอฟต์แวร์การวิเคราะห์ภาพ แล้วจำนวนได้รับการยอมรับลูกกลมนับและจำนวนที่ถูกกำหนดเป็นจำนวนลูกกลม อัตราการรอดตายของลูกกลมที่คำนวณได้จากการแสดงออกดังต่อไปนี้. อัตราการรอดตายลูกกลม (%) = (จำนวนลูกกลม) x100 / (จำนวนไมโครที่ว่าง s) 5 ไม่กี่ชั่วโมงหลังจากเซลล์เมล็ด (0 วัน), กลุ่มลูกกลมเหมือนถูกสร้างขึ้นใน90% หรือมากกว่าของไมโครที่ว่างในทุกตู้เพาะเลี้ยง s ค่าที่ได้จากการหารจำนวนลูกกลมได้รับหลังจากการแทนที่ของอาหารเลี้ยงบนที่ 10 และวันที่ 20 ของวัฒนธรรมจากจำนวนลูกกลมที่ได้รับในวันที่ 0 ถูกกำหนดเป็นอัตราการรอดตายของลูกกลม. 10 ( 4) วิธีการเก็บเกี่ยวหลังจากเสร็จสิ้นการวัฒนธรรม, การแก้ปัญหาที่ถูกตื่นเต้นกับปิเปต (ผู้ผลิตหมายเลขรุ่น) และระงับลูกกลมหาย ยกตัวอย่างเช่นปิเปตความสามารถในการดูด 1 มิลลิลิตรของอาหารเลี้ยงที่สูงสุดเป็นที่เหมาะสำหรับใช้ในแผ่น 24 หลุมที่มี 500 อัลไป1 มิลลิลิตรของอาหารเลี้ยง. 15 (5) ประสิทธิภาพการเก็บเกี่ยวก่อนและหลังการเก็บเกี่ยวของลูกกลมที่ภาพของลูกกลมถูกถ่ายโดยกล้องจุลทรรศน์ confocal เลเซอร์. [0042] (6) ผลการค้นหา20 รูป 13 แสดงให้เห็นว่าอัตราการรอดตายของลูกกลมในระหว่างการแทนที่ของอาหารเลี้ยง แกนแนวตั้งแสดงให้เห็นถึงอัตราการรอดตายของลูกกลม (Sphere Number) และแกนนอนหมายถึงจำนวนวันของวัฒนธรรม. รูป 13 แสดงให้เห็นว่าข้อมูลที่ได้รับจากการเริ่มต้นของวัฒนธรรมวันที่ 20 ของวัฒนธรรม ในฐานะที่แสดงในรูป 13 อัตราการรอดตายของลูกกลมในตัวอย่างเปรียบเทียบอย่างมีนัยสำคัญ25 ลดลงเมื่อเทียบกับที่ในตัวอย่าง หลังจากวัฒนธรรม 20 วันอัตราการรอดตายของลูกกลมในตัวอย่าง60% หรือมากกว่า นี้บ่งชี้ว่าอัตราการรอดตายของลูกกลมในตัวอย่างได้ดีขึ้น 1.5 เท่าสูงที่สุดเท่าที่ในตัวอย่างเปรียบเทียบ. [0043] รูป 14 แสดงให้เห็นภาพของลูกกลมที่ได้รับก่อนและหลังการแทนที่ของ30 อาหารเลี้ยงในตัวอย่างและตัวอย่างเปรียบเทียบ มะเดื่อ. 14 แสดงให้เห็นภาพของลูกกลมในตู้เพาะเลี้ยงก่อนและหลังที่สองการแทนที่ของอาหารเลี้ยงในวันที่สี่ของวัฒนธรรม ด้านซ้ายของรูป 14 แสดงให้เห็นภาพของตัวอย่าง (Kuraray พี HEMA) และด้านขวาของรูป 14 แสดงให้เห็นภาพของตัวอย่างเปรียบเทียบ (ที่ Iwaki MPC) ส่วนบนของรูปที่แสดงให้เห็นภาพที่ถ่ายก่อนการแทนที่ของอาหารเลี้ยงและส่วนล่าง(ด้านล่างลูกศร) ของรูป 14 แสดงให้เห็นว่าภาพที่ถ่ายหลังจากการแทนที่ของอาหารเลี้ยง เพิ่มเติมโดยเฉพาะภาพในส่วนล่างของรูป 14 แสดงรัฐหลังจากการแท

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีเพาะเลี้ยงเซลล์โดยใช้ตู้เพาะเลี้ยง S ตามนี้รูปลักษณะ
จะคล้ายกับที่ของรูปลักษณะก่อน แล้วจึงอธิบายนั้นเป็นละเว้น .
ตู้เพาะเลี้ยง S ตามรูปลักษณะนี้สามารถให้ประโยชน์เดียวกันผลเท่าของรูปลักษณะแรก .
[ ]

0035 10 สี่รูปลักษณะภาพประกอบ1 แสดงให้เห็นถึงโหมดที่ตู้เพาะเลี้ยง S 1 ตามหนึ่งรูปลักษณะ
จัดในวัฒนธรรมจาน 3 ดี ( แผ่น ) การตู้เพาะเลี้ยง S 1 ตามหนึ่ง
รูปลักษณะยังสามารถเกิดขึ้นในห้อง ( เครื่องดนตรี ) นอกเหนือจากวัฒนธรรมจาน 3 แสดง
ในรูปที่ 1 . มะเดื่อ .10 กับ 12 แสดงให้เห็นตัวอย่างของโครงสร้างของตู้เพาะเลี้ยงตาม 15 4 รูปลักษณะ . รูปที่ 10 เป็นภาพแผนผังแสดงตัวอย่างของโครงสร้างที่เป็นรูปขวดขวด
วัฒนธรรมมาใช้ รูปที่ 11 เป็นภาพแผนผังแสดงตัวอย่างของ
โครงสร้างที่กรอบของวัฒนธรรมที่จานที่ใช้ รูปที่ 12 วงจรดูการแสดง
ตัวอย่างของโครงสร้างที่แสดงในรูปที่ 11 วัฒนธรรมจานถูกออกแบบมาในรูปทรงและใช้กอง
.
[ ]
20 0036 ในรูปที่ 10 , พื้นผิวด้านล่างของขวดวัฒนธรรม 4 ใช้เป็นวัฒนธรรมพื้นผิว 4A ( พื้นผิวด้านล่างวัฒนธรรม ) พื้นผิวที่สอดคล้องกับวัฒนธรรมในแต่ละตู้เพาะเลี้ยง 4A 1 แสดงในรูปที่ 1 ตามวัฒนธรรมผิว 4A นอกจากนี้ยังสามารถเรียกว่าตู้เพาะเลี้ยง . เหมือนแต่ละคน
ตู้เพาะเลี้ยง 1 แสดงในรูปที่ 1 , พื้นผิววัฒนธรรม 4A เป็นหน่วยที่ใช้อาหารเลี้ยงเดียวกัน 25 วัฒนธรรมขวด 4 รวมถึงหมวก 4B พื้นที่ของวัฒนธรรมพื้นผิว 4A สามารถออกแบบ
ขึ้นอยู่กับวัตถุประสงค์การใช้งาน ตัวอย่างของขนาดของขวดวัฒนธรรมทั่วไปรวมถึง 2575 ,
และ 225 cm2 เป็นจำนวนที่มากกว่าหนึ่งของโพรง 40 จะเกิดขึ้นในพื้นผิวของขวดวัฒนธรรมวัฒนธรรม 4
4 ตัวอย่างเช่นในพื้นผิวด้านล่างของวัฒนธรรมขวด 4 , พื้นที่ที่แรเงาคือการออกแบบเป็น
วัฒนธรรมพื้นผิว 4A และจำนวนที่มากกว่าหนึ่งของโพรง 40 เป็น founed ในวัฒนธรรมผิว
4A30 รูปร่างของแต่ละช่อง 40 ( รูปร่างของแต่ละส่วนล่างและส่วนช่องเปิด ) อาจ
หนึ่งรูปร่างที่แสดงในรูปที่ 11 แสดงให้เห็นข้างต้น
ตัวอย่างซึ่งมีเพียงกรอบของวัฒนธรรมที่จานที่ใช้ ในรูปที่ 1 , ตู้เพาะเลี้ยง S 1 ( เวลส์ ) ที่เกิดขึ้นในวัฒนธรรมจาน 3 ส่วนในรูปที่ 11พื้นผิวด้านล่างของจานวัฒนธรรม 5 ใช้เป็นวัฒนธรรมงาน 5A ( พื้นผิวด้านล่างวัฒนธรรม ) วัฒนธรรม
งาน 5A สอดคล้องกับแต่ละตู้เพาะเลี้ยง 1 แสดงในรูปที่ 1 ตามวัฒนธรรม
5a ผิวนอกจากนี้ยังสามารถเรียกว่าตู้เพาะเลี้ยง . พื้นผิววัฒนธรรม 5A เป็นหน่วย
ใช้อาหารเลี้ยงเดียวกัน ส่วนล่างของภาพ11 แสดงตัวอย่าง ( วงจรภาคตัดขวาง
View ) ของโครงสร้างของพื้นผิวที่หลากหลายวัฒนธรรม ตัวอย่างเช่น ในผิวด้านล่างของวัฒนธรรม
5 แผ่น 5 พื้นที่สีเทาถูกออกแบบมาเป็นวัฒนธรรมงาน 5A และจำนวนที่มากกว่าหนึ่งของโพรง 50
ที่เกิดขึ้นในวัฒนธรรมงาน 5A . โพรง 50 ที่แสดงใน รูปที่ 11 เป็นแผนผัง
ภาพประกอบ จำนวน , ขนาด ,และชอบของโพรง 50 ถูกออกแบบขึ้นอยู่กับ
ไว้ใช้ รูปร่างของแต่ละช่อง 50 ( รูปร่างของแต่ละส่วนล่างและ
ส่วนช่องเปิด ) อาจเป็นหนึ่งในรูปร่างที่แสดงในข้างต้นรูปลักษณะ S .
10 รูปที่ 12 แสดงให้เห็นตัวอย่างของโครงสร้างเซลล์กองแบบฟอร์มที่จำนวนที่มากกว่าหนึ่งวัฒนธรรม
5 แสดงในรูปที่ 11 เป็นแผ่นซ้อนกัน ในคำอื่น ๆ รูปที่ 12 แสดงให้เห็นตัวอย่างของโครงสร้างแบบหลายชั้น

ในกรณีที่เซลล์ที่เพาะเลี้ยงในระบบปิดที่มีพื้นที่ขนาดใหญ่ เซลล์กอง
แบบฟอร์มทั่วไปที่ใช้ ในขณะที่รูปที่ 12 แสดงให้เห็นถึงตัวอย่างที่แสดงในรูปที่ 5 วัฒนธรรมแผ่น
11 ซ้อนกัน วัฒนธรรม แผ่น 3 แสดงในรูปที่ 1 อาจจะซ้อนกัน ในรูปที่ 12
ภาพประกอบที่ 15 ห้องรองรับจำนวนที่มากกว่าหนึ่งของซ้อนตู้เพาะเลี้ยง s
ให้กลไกสำหรับการแทนที่ของอาหารเลี้ยงคือการละเว้น ตัวอย่างเช่น ตู้เพาะเลี้ยงมีรูปร่างกองทั่วไปสามารถใช้เป็นห้องที่รองรับจำนวนที่มากกว่าหนึ่งของ
จานเพาะเลี้ยง