The supernatant was separated from

The supernatant was separated from the culture broth by centrifugation (10 000 g) and filtered through 0·2-μm pore size membrane filters. The filtrate was used in enzyme activity assays. Amylase and cellulase activity were assayed according to a modified method of Miller (1959) and Khasin et al. (1993). Briefly, filtered supernatants (50 μl) were mixed with 950 μl of 0·5% substrate (starch or carboxymethylcellulose) in 0·1 mol l–1 Tris–HCl buffer (pH 7·0) and incubated at 37°C for 10 min. The reactions were terminated by adding 1 ml of dinitrosalicylic acid (DNS) and boiling for 5–7 min. After adding 8 ml of distilled water to each reaction mixture, the absorbance was determined at 540 nm by UV spectrophotometry (Unico, Dayton, NJ, USA). One unit of amylase or cellulose was defined as the amount of enzyme that produces 1 μmol of glucose equivalent per minute. Lipase activity was assayed according to a modified method of Lesuisse et al. (1993). The activity was measured using 0·5 ml of culture supernatant and 0·5 ml of 1% 4-nitrophenyl butyrate in 50 mmol Tris–HCl (pH 7·0). The reaction was carried out at 37°C for 10 min, and the absorbance was determined at 405 nm. One unit of lipase was defined as the amount of enzyme that librated 1 μmol of 4-nitrophenol per minute. Protease activity was assayed according to a modified method of Yanagida et al. (1986). Briefly, 2·5 ml of 0·7% casein (from bovine milk, Sigma) solution were mixed with 0·5 ml of culture broth and incubated at 37°C for 30 min. The reaction was stopped by adding 2·5 ml of 10% trichloroacetic acid (TCA). The reaction mixture was centrifuged (3000 g) at 4°C for 30 min, and the absorbance of the supernatant was measured spectrophotometrically at 275 nm. One unit of protease activity was defined as the amount causing an increase of 1 μmol tyrosine in 1 min.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Supernatant ถูกแยกออกจากซุปวัฒนธรรม โดย centrifugation (10 000 g) และกรองผ่านแผ่นกรองเมมเบรนขนาดรู 0·2-μm สารกรองที่ใช้ใน assays กิจกรรมของเอนไซม์ กิจกรรม amylase และ cellulase ถูก assayed ตามวิธีแก้ไขของมิลเลอร์ (1959) และ Khasin et al. (1993) สั้น ๆ กรอง supernatants (50 μl) ที่ผสมกับ μl 950 ของ 0·5% พื้นผิว (แป้งหรือ carboxymethylcellulose) ใน 0·1 โมล l – 1 ตรี – HCl บัฟเฟอร์ (pH 7·0) และ incubated ที่ 37° C สำหรับ 10 นาที ปฏิกิริยาที่ถูกเลิกจ้าง โดยเพิ่ม 1 มิลลิลิตรของกรด dinitrosalicylic (DNS) และเดือดสำหรับ 5-7 นาที หลังเพิ่ม 8 ml ของน้ำกลั่นลงในส่วนผสมแต่ละปฏิกิริยา absorbance ที่ถูกกำหนดที่ 540 nm โดย UV spectrophotometry (ยูนิโก้ เดย์ตัน NJ สหรัฐอเมริกา) หน่วยของ amylase หรือเซลลูโลสถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ที่สร้าง μmol 1 ของน้ำตาลกลูโคสเท่าต่อนาที กิจกรรมของเอนไซม์ไลเปสที่ assayed ตามวิธีแก้ไขของ Lesuisse et al. (1993) กิจกรรมที่วัดใช้ ml 0·5 ของ supernatant และมล 0·5 ของ 1% 4 nitrophenyl butyrate mmol 50 ทริสเรทติ้ง – HCl (pH 7·0) ปฏิกิริยาที่ได้รับการดำเนินที่ 37° C สำหรับ 10 นาที และ absorbance ที่กำหนดที่ 405 nm หน่วยหนึ่งของเอนไซม์ไลเปสที่ถูกกำหนดเป็นยอดของเอนไซม์ μmol ที่ 1 librated ของ 4-nitrophenol ต่อนาที กิจกรรมรติเอสถูก assayed ตามวิธีแก้ไขของ Yanagida et al. (1986) สั้น ๆ 2·5 ml ของเคซีน% 0·7 (จากน้ำนมวัว ซิก) ผสมกับ 0·5 ml ของวัฒนธรรมซุป และ incubated ที่ 37° C 30 นาทีสำหรับโซลูชัน หยุดปฏิกิริยา โดยการเพิ่ม 2·5 มิลลิลิตรของกรด trichloroacetic 10% (TCA) ส่วนผสมของปฏิกิริยาคือ centrifuged (3000 g) ที่ 4° C ใน 30 นาที และ absorbance ของ supernatant จะมีวัด spectrophotometrically ที่ 275 nm หนึ่งหน่วยกิจกรรมรติเอสถูกกำหนดเป็นยอดที่ทำให้เกิดการเพิ่มขึ้นของ 1 μmol tyrosine ใน 1 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สารละลายถูกแยกออกจากน้ำซุปวัฒนธรรมโดยการหมุนเหวี่ยง (10 000 กรัม) และกรองผ่าน 0 · 2 ไมครอนกรองเมมเบรนขนาดรูขุมขน กรองที่ใช้ในการตรวจการทำงานของเอนไซม์ อะไมเลสและเซลลูเลกิจกรรมถูก assayed ตามวิธีการแก้ไขของมิลเลอร์ (1959) และ Khasin et al, (1993) สั้น ๆ , supernatants กรอง (50 ไมโครลิตร) ได้รับการผสมกับ 950 ไมโครลิตรของ 0 ·พื้นผิว 5% (แป้งหรือ carboxymethylcellulose) ใน 0 · 1 mol l-1 บัฟเฟอร์ Tris-HCl (pH 7 · 0) และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที ปฏิกิริยาถูกยกเลิกโดยการเพิ่ม 1 มิลลิลิตรของกรด dinitrosalicylic (DNS) และเดือด 5-7 นาที หลังจากที่เพิ่ม 8 ml ของน้ำกลั่นผสมปฏิกิริยาแต่ละการดูดกลืนแสงที่ถูกกำหนดที่ 540 นาโนเมตรโดยรังสียูวี spectrophotometry (ยูนิโก้, เดย์, NJ, สหรัฐอเมริกา) หนึ่งหน่วยของอะไมเลสหรือเซลลูโลสถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ผลิต 1 ไมโครโมลเทียบเท่ากลูโคสต่อนาที กิจกรรมเอนไซม์ไลเปสได้รับการวิเคราะห์ตามวิธีการแก้ไขของ Lesuisse et al, (1993) กิจกรรมที่ได้รับการวัดโดยใช้ 0 · 5 มิลลิลิตรใสวัฒนธรรมและ 0 · 5 มิลลิลิตร butyrate 1% 4 Nitrophenyl 50 มิลลิโมล Tris-HCl (pH 7 · 0) ปฏิกิริยาที่ได้ดำเนินการที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีและการดูดกลืนแสงที่ถูกกำหนดที่ 405 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ไลเปสถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ librated 1 ไมโครโมล 4 nitrophenol ต่อนาที กิจกรรมโปรติเอสได้รับการวิเคราะห์ตามวิธีการแก้ไขของ Yanagida et al, (1986) สั้น ๆ 2 · 5 มิลลิลิตร 0 · 7% เคซีน (จากวัวนมซิก) วิธีการแก้ปัญหาที่ถูกผสมกับ 0 · 5 มล. ของน้ำซุปวัฒนธรรมและการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที ปฏิกิริยาก็หยุดโดยการเพิ่ม 2 · 5 มล. 10% กรดไตรคลอโร (TCA) ผสมปฏิกิริยาถูกหมุนเหวี่ยง (3000 กรัม) วันที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีและการดูดกลืนแสงของสารละลายที่วัด spectrophotometrically ที่ 275 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของกิจกรรมโปรติเอสถูกกำหนดเป็นจำนวนเงินที่ก่อให้เกิดการเพิ่มขึ้นของซายน์ 1 ไมโครโมลใน 1 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สูงแยกจากวัฒนธรรมอาหารโดยการเหวี่ยงแยก ( 10 , 000 กรัม ) และกรองผ่านเมมเบรน 2 - 0 ด้วยμ M ขนาดรูขุมขนตัวกรอง โดยการใช้เอนไซม์ กิจกรรมของเอนไซม์อะไมเลสและเซลลูเลส ได้ตามแบบวิธีของ มิลเลอร์ ( 1959 ) และ khasin et al . ( 1993 ) สั้น ๆกรอง supernatants ( 50 μลิตร ) ผสม 950 μ l 0 ด้วย 5 % ผสม ( แป้งหรือผู้ป่วยใน ) 0 ด้วย 1 โมล แอล– 1 โดย– HCl บัฟเฟอร์ pH 7 ด้วย 0 ) บ่มที่ 37 องศา C นาน 10 นาที ปฏิกิริยาที่ถูกยกเลิกโดยการเพิ่ม dinitrosalicylic 1 มิลลิลิตรของกรด ( DNS ) และต้มเป็นเวลา 5 - 7 นาที หลังจากเพิ่ม 8 ml ของน้ำแต่ละปฏิกิริยาผสมนตั้งใจ 540 nm โดยวิธียูวี ( Unico เดย์ตัน , NJ , USA ) หน่วยหนึ่งของแป้งหรือเซลลูโลสถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ผลิต 1 μโมลสมมูลกลูโคสต่อนาที กิจกรรมเอนไซม์ซีรั่ม ตามแบบวิธีของ lesuisse et al . ( 1993 )กิจกรรมการวัด 0 ด้วย 5 มิลลิลิตร และนำวัฒนธรรม 0 ด้วย 5 มิลลิลิตร 1 % 4-nitrophenyl บิวใน 50 มิลลิโมลต่อ– HCl ( pH 7 ด้วย 0 ) ปฏิกิริยาที่ถูกดำเนินการใน 37 ° C เป็นเวลา 10 นาทีและค่ากำหนดที่ 405 nm . หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ไลเปสที่ถูกกำหนดไว้เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ librated 1 μโมลของพาราไนโตรฟีนอลต่อนาทีกิจกรรมของเอนไซม์โปรติเอสซีรั่ม ตามแบบวิธีของยานางิดะ et al . ( 1986 ) สั้น 2 ด้วย 5 ml ของ 0 ด้วย 7% เคซีน ( จากนม วัว ซิกม่า ) สารละลายผสม 0 ด้วย 5 ml ของน้ำซุปวัฒนธรรมและบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 30 นาที ปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยการเพิ่ม 2 ด้วย 5 ml 10% กรดไตรคลอโรอะซิติก ( TCA ) ปฏิกิริยาผสมไฟฟ้า ( 3 , 000 กรัม ) ที่ 4 ° C เป็นเวลา 30 นาทีและการดูดกลืนแสงของน่านวัดนี้ที่ 275 นาโนเมตร หน่วยหนึ่งของกิจกรรมเอนไซม์โปรตีเอสถูกกำหนดไว้เป็นจำนวนที่เพิ่มขึ้นของ 1 โมล μแต่อย่างใด ใน 1 นาที