Alpha-thalassaemia, one of the most

Alpha-thalassaemia, one of the most monogenic disorders in
humans, is the result of defective production of the alpha chain of
haemoglobin [1]. The primary causes of alpha-thalassaemia involve
deletions of one or both of the alpha-globin genes in the telomeric
region of chromosome 16 (16p 13.3) on chromosome 16 [2]. Deletions
leading to alpha-thalassaemia are more common than nucleotide variations,
otherwise known as “nondeletion” alpha-thalassaemia variants.
Defects due to either type of mutation that leads to dysfunction of one
or two alpha genes may cause slight reduction in erythrocyte volume
and size but are not clinically relevant. Loss of function of three alpha
genes leads to Hb H disease, a chronic moderate anaemia associated
with a picture of alpha-thalassaemia intermedia [3]. Complete deletion
of all four alpha-globin genes results in severe anaemia in utero and a
condition known as Hb Barts hydrops foetalis. Definition of alpha
globin genotypes in potential carriers is useful to predict prognosis
and management options, due to the strong correlation of phenotype
and genotype in Hb H disease patients [4–7]. For identification of
nondeletion variants in alpha globin gene, Sanger sequencing is the reference
method. However, in routine laboratories, the detection of
known thalassaemiamutations and globin chain variants in populations
with specificmutation spectrums is mainly performed using traditional
well-established methods such as restriction enzyme analysis of PCR
amplicons (RE-PCR), allele-specific amplification using the amplification
refractorymutation system (ARMS), allele-specificmutation detection
of amplified DNA based on hybridization of PCR products to allelespecific
oligonucleotide probes (ASO) in either forward or reverse ASO
approach [8]. More recently, pyrosequencing, involving sequencing by
synthesis [9] and high resolution melting analysis without the need
for post-PCR sample manipulation [10], have been proposed for the
rapid genotyping or screening of “nondeletion” HBA mutations
In this paper, we report a method that facilitates direct detection by
the naked eye of the 13most common “nondeletion” alpha-globin gene
mutations in populations around the Mediterranean and Middle East
using a dipstick biosensor in a dry-reagent format. The method
comprises PCR amplification of a single fragment for each HBA1 and
HBA2 gene flanking all mutations, using any conventional thermal
cycler, multiplex primer extension (PEXT) reaction of just 10 cycles
followed by the visual detection of the reaction productswithin minutes
by the multi-allele dipstick biosensor. Specialized instrumentation is
precluded, and the requirements for highly qualified technical personnel
are minimized.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อัลฟา-thalassaemia โรค monogenic สุดในอย่างใดอย่างหนึ่งมนุษย์ เป็นผลผลิตที่บกพร่องของอัลฟาของhaemoglobin [1] สาเหตุหลักของอัลฟา thalassaemia ที่เกี่ยวข้องกับลบหนึ่งหรือทั้งสองของยีนอัลฟา-globin ในที่ telomericภูมิภาคของโครโมโซม 16 (16p 13.3) บนโครโมโซม 16 [2] ลบนำไป thalassaemia อัลฟาอยู่ทั่วไปกว่ารูปแบบนิวคลีโอไทด์หรือที่เรียกว่า "nondeletion" อัลฟา thalassaemia ย่อยข้อบกพร่องเนื่องจากชนิดของการกลายพันธุ์ที่นำไปสู่ความผิดปกติของหรือยีนอัลฟาสองอาจทำให้ลดลงเล็กน้อยในปริมาณของเม็ดเลือดแดงและขนาดแต่ไม่เกี่ยวข้องทางคลินิก สูญเสียหน้าที่ของอัลฟา 3ยีนที่นำไปสู่โรค Hb H เป็นเรื้อรังทุกขโรคโลหิตจางสัมพันธ์รูปภาพของอัลฟ่า-thalassaemia intermedia [3] การลบที่สมบูรณ์ของยีนอัลฟ่า-globin สี่ทั้งหมดผลลัพธ์ในโรคโลหิตจางอย่างรุนแรงใน utero และสภาพที่เรียกว่า Hb Barts hydrops foetalis คำจำกัดความของอัลฟาglobin ศึกษาจีโนไทป์ในสายการบินอาจมีประโยชน์ในการคาดการณ์คาดคะเนและตัว เลือกการจัดการ เนื่องจากความสัมพันธ์ที่แข็งแกร่งของ phenotypeและลักษณะทางพันธุกรรมในผู้ป่วยโรค Hb H [4-7] สำหรับการระบุตัวแปร nondeletion ในยีนอัลฟา globin, Sanger ลำดับเป็นการอ้างอิงวิธีการ อย่างไรก็ตาม ในห้องปฏิบัติการตามปกติ การตรวจพบthalassaemiamutations รู้จักและ globin กลุ่มย่อยในประชากรมี specificmutation spectrums ส่วนใหญ่ดำเนินการโดยใช้แบบวิธีที่ดีขึ้นเช่นการวิเคราะห์เอนไซม์จำกัดของ PCRamplicons (RE-PCR), ขยายเฉพาะ allele ที่ขยายที่ใช้ระบบ refractorymutation (อาร์ม), ตรวจ allele specificmutationเอ็นเอาต์ตาม hybridization ของผลิตภัณฑ์ PCR allelespecificoligonucleotide คลิปปากตะเข้ (เอโซ) ในอาโซะไปข้างหน้า หรือย้อนกลับวิธี [8] เมื่อเร็ว ๆ นี้ pyrosequencing เกี่ยวข้องกับการจัดลำดับโดยความละเอียดสูงที่ละลายโดยไม่ต้องวิเคราะห์และสังเคราะห์ [9]การบริหารจัดการตัวอย่างใน PCR ลง [10], ได้รับการเสนอชื่อgenotyping อย่างรวดเร็วหรือการคัดกรองของกลายพันธุ์ HBA "nondeletion"ในเอกสารนี้ เราได้รายงานวิธีการตรวจสอบโดยตรงโดยการอำนวยความสะดวกตาเปล่า 13most ทั่วไป "nondeletion" อัลฟา-globin ยีนการกลายพันธุ์ในกลุ่มประชากรทั่วเมดิเตอร์เรเนียนและตะวันออกกลางใช้ dipstick biosensor ในรูปแห้งรีเอเจนต์ วิธีการประกอบด้วย PCR ขยายของส่วนหนึ่งสำหรับแต่ละ HBA1 และยีน HBA2 flanking กลายพันธุ์ทั้งหมด ใช้ความร้อนใด ๆ ปกติcycler รองพื้น multiplex ส่วนขยาย (PEXT) ปฏิกิริยาของรอบ 10ตามการตรวจพบภาพปฏิกิริยา productswithin นาทีโดย biosensor dipstick allele หลาย เป็นเครื่องมือเฉพาะprecluded และความต้องการบุคลากรด้านเทคนิคที่มีคุณภาพสูงมีย่อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

อัลฟาธาลัสซีซึ่งเป็นหนึ่งในความผิดปกติของ monogenic
มากที่สุดในมนุษย์เป็นผลมาจากการผลิตที่มีข้อบกพร่องของห่วงโซ่อัลฟาของฮีโมโกล
[1] สาเหตุหลักของอัลฟาธาลัสซีเกี่ยวข้องกับการลบหนึ่งหรือทั้งสองของยีนอัลฟาโกลบินใน telomeric ภูมิภาคของโครโมโซมที่ 16 (16p 13.3) บนโครโมโซม 16 [2] ลบที่นำไปสู่อัลฟาธาลัสซีเป็นเรื่องธรรมดามากกว่ารูปแบบเบื่อหน่ายหรือที่เรียกว่า"nondeletion" สายพันธุ์อัลฟาธาลัสซี. ข้อบกพร่องอันเนื่องมาจากทั้งสองประเภทของการกลายพันธุ์ที่นำไปสู่ความผิดปกติอย่างใดอย่างหนึ่งหรือสองยีนอัลฟาอาจก่อให้เกิดการลดลงเล็กน้อยในปริมาณเม็ดเลือดแดงและขนาดแต่ไม่ได้เกี่ยวข้องทางคลินิก การสูญเสียการทำงานของสามอัลฟายีนจะนำไปสู่การเกิดโรค Hb H เป็นโรคโลหิตจางเรื้อรังในระดับปานกลางที่เกี่ยวข้องกับภาพของสือัลฟาธาลัสซีa [3] การลบสมบูรณ์ทั้งสี่ยีนผลอัลฟาโกลบินในโรคโลหิตจางรุนแรงในมดลูกและสภาพที่เรียกว่าHb Barts hydrops foetalis ความหมายของอัลฟายีน globin ในผู้ให้บริการที่มีศักยภาพจะเป็นประโยชน์ในการทำนายการพยากรณ์โรคที่ตัวเลือกและการจัดการเนื่องจากความสัมพันธ์ที่แข็งแกร่งของฟีโนไทป์และจีโนไทป์ในHb H ผู้ป่วยโรค [4-7] สำหรับบัตรประจำตัวของสายพันธุ์ในยีน nondeletion อัลฟา globin ลำดับแซงเจอร์เป็นอ้างอิงวิธี แต่ในห้องปฏิบัติการประจำการตรวจสอบของthalassaemiamutations ที่รู้จักกันและตัวแปรห่วงโซ่ globin ในประชากรที่มีสเปกตรัมspecificmutation จะดำเนินการส่วนใหญ่ใช้แบบดั้งเดิมวิธีการที่ดีขึ้นเช่นการวิเคราะห์การทำงานของเอนไซม์ข้อจำกัด ของวิธี PCR amplicons (RE-PCR) ขยายอัลลีลเฉพาะใช้ขยายระบบ refractorymutation (แขน), อัลลีล-specificmutation การตรวจสอบดีเอ็นเออยู่บนพื้นฐานของการขยายพันธุ์ของผลิตภัณฑ์PCR เพื่อ allelespecific ฟิวส์ oligonucleotide (ASO) ทั้งในข้างหน้าหรือย้อนกลับ ASO วิธี [8] เมื่อเร็ว ๆ นี้ pyrosequencing ที่เกี่ยวข้องกับการจัดลำดับโดยการสังเคราะห์[9] และการวิเคราะห์ละลายความละเอียดสูงโดยไม่จำเป็นต้องโพสต์-PCR จัดการตัวอย่าง [10], ได้รับการเสนอสำหรับgenotyping อย่างรวดเร็วหรือการคัดกรองของ "nondeletion" กลายพันธุ์ HBA ในบทความนี้เรา รายงานวิธีที่อำนวยความสะดวกการตรวจสอบโดยตรงด้วยตาเปล่าของ13most ทั่วไป "nondeletion" อัลฟาโกลบินยีนกลายพันธุ์ในประชากรทั่วทะเลเมดิเตอร์เรเนียนและตะวันออกกลางโดยใช้ไบโอเซนเซอร์dipstick ในรูปแบบแห้งสาร วิธีประกอบด้วยขยาย PCR ของชิ้นเดียวสำหรับแต่ละ HBA1 และยีนกลายพันธุ์HBA2 ขนาบทั้งหมดโดยใช้ความร้อนใด ๆ ธรรมดาCycler ขยายไพรเมอร์มัลติเพล็ก (PEXT) ปฏิกิริยาของเพียง 10 รอบตามด้วยการตรวจสอบภาพของการเกิดปฏิกิริยาproductswithin นาทีโดยหลายอัลลีล dipstick ไบโอเซนเซอร์ เครื่องมือเฉพาะเป็นจรรยาบรรณและความต้องการสำหรับบุคลากรทางเทคนิคที่มีคุณภาพสูงจะลดลง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แอลฟาทาลัสซีเมีย หนึ่งของความผิดปกติที่พบการกระจายตัวมากที่สุดใน
มนุษย์ เป็นผลผลิตของอัลฟาโซ่
ฮีโมโกลบิน [ 1 ] ที่บกพร่อง สาเหตุหลักของอัลฟาธาลัสซีเมียเกี่ยวข้องกับ
ลบของหนึ่งหรือทั้งสองของยีนแอลฟาโกลบินในภูมิภาค telomeric
โครโมโซม 16 ( 16p 13.3 ) บนโครโมโซมคู่ที่ 16 [ 2 ] ลบ
แอลฟาทาลัสซีเมียชั้นนำทั่วไปมากกว่าเบสรูปแบบ
หรือที่เรียกว่า " nondeletion " อัลฟาธาลัสซีเมียแปร
ข้อบกพร่องเนื่องจากประเภทการกลายพันธุ์ที่นำไปสู่ความผิดปกติของหนึ่งหรือสองแอลฟายีนเหมือนกัน

อาจจะทำให้ลดปริมาณเม็ดเลือดแดงเล็กน้อยและขนาด แต่ไม่อาการที่เกี่ยวข้อง การสูญเสียฟังก์ชันสามอัลฟ่า
ยีนนำไปสู่ Hb H โรคโลหิตจางเรื้อรังปานกลางเกี่ยวข้อง
กับภาพของอัลฟาธาลัสซีเมีย intermedia [ 3 ]
เสร็จสมบูรณ์ ของทั้งหมดสี่อัลฟาโกลบินยีนผลลัพธ์ในภาวะโลหิตจางรุนแรงในท้องและเงื่อนไขเรียกว่า Hb Barts
อาการบวมน้ำ foetalis . คำนิยามของอัลฟาโกลบิน ในผู้ที่มีจีโนไทป์

มีประโยชน์ที่จะทำนายพยากรณ์และการจัดการตัวเลือก เนื่องจากความสัมพันธ์ที่แข็งแกร่งของฟีโนไทป์
และยีโนไทป์ในผู้ป่วยโรคฮีโมโกลบินเอช 4 ) [ 7 ] การจำแนกชนิดของยีนแอลฟาโกลบินในรูป
nondeletion ในแซงเกอร์ , ระบบอ้างอิง
วิธี อย่างไรก็ตาม ในห้องปฏิบัติการ ตามปกติ การตรวจหา
รู้จัก thalassaemiamutations : โซ่และตัวแปรในประชากรส่วนใหญ่ดำเนินการสอดคล้องกับ specificmutation

ใช้แบบดั้งเดิมรู้จักวิธีการเช่นการวิเคราะห์เอนไซม์จำกัด )
amplicons ( re-pcr ) ในกลุ่มเฉพาะ ( ใช้ระบบ refractorymutation (
( แขน ) ในการตรวจสอบ specificmutation
ของแถบดีเอ็นเอขึ้นอยู่กับผลิตภัณฑ์ PCR hybridization เพื่อ allelespecific
ซึ่งวิธีการ ( ASO ) ไม่ว่าจะเดินหน้าหรือถอยหลัง โซะ
วิธีการ [ 8 ] ไพโรซีเควนซิงมากขึ้นเมื่อเร็ว ๆนี้ ,ที่เกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์ลำดับโดย
[ 9 ] และความละเอียดสูงจุดหลอมเหลวการวิเคราะห์โดยไม่ต้องโพสต์ PCR ตัวอย่างการจัดการ
[ 10 ] ได้รับการเสนอสำหรับการอ่านหรือการคัดกรอง
อย่างรวดเร็ว " nondeletion " HBA การกลายพันธุ์
ในกระดาษนี้เรารายงานวิธีการที่อำนวยความสะดวกในการตรวจสอบโดยตรงโดย
ตาเปล่าของ 13most ทั่วไป " nondeletion " อัลฟาโกลบินยีน
การกลายพันธุ์ในประชากรรอบทะเลเมดิเตอร์เรเนียนและตะวันออกกลาง
ใช้ไบโอเซนเซอร์ในรูปแบบสารละลายชนิดแห้ง วิธี PCR
ประกอบด้วยแบบเศษเสี้ยวเดียวสำหรับแต่ละ hba1 และ
hba2 ยีน flanking ทั้งหมดการกลายพันธุ์ โดยใช้วงจรใด ๆความร้อน
ปกติรองพื้นส่วนขยายมัลติเพล็กซ์ ( pext ) ปฏิกิริยาเพียง 10 รอบ
ตามด้วยการตรวจสอบและปฏิกิริยา productswithin นาที
โดยหลายชนิดในไบโอเซนเซอร์ . เครื่องมือพิเศษเป็น
ลบและความต้องการบุคลากรทางเทคนิคที่มีคุณภาพสูง
มีค่าน้อยที่สุด